火龍果對衰老模型小鼠血清和肝臟中GSH—Px、SOD活性和MDA含量的影響

鄭守歡韋玉娜黎瑜霜魏海帆李朝敢

【摘要】目的探討火龍果對衰老模型小鼠血清和肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性以及對丙二醛（MDA）含量的影響。

方法設(shè)立衰老模型組、火龍果皮組、火龍果肉組和正常對照組，每組12只小鼠列入統(tǒng)計(jì)分析，衰老模型小鼠每天分別給予火龍果的果皮和果肉（100 g·kg1·d1）喂養(yǎng)，40 d后處死小鼠，取血清及肝臟測定GSHPx、SOD活性和MDA含量。

結(jié)果與衰老模型組比較，火龍果皮組、火龍果肉組小鼠血清中的GSHPx活性顯著增高（P<0.01），MDA含量顯著降低（P<0.05或P<0.01）；火龍果皮組、火龍果肉組小鼠肝臟中SOD的活性顯著增高（P<0.01），火龍果肉組MDA含量顯著降低（P<0.05）。

結(jié)論火龍果具有增強(qiáng)抗氧化酶活性而發(fā)揮抗氧化作用。

【關(guān)鍵詞】火龍果；GSHPx；SOD；MDA

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2016.04.009

火龍果（Hylocereus undatus），又稱紅龍果、吉祥果和仙蜜果等，是仙人掌科（Cataceae）量天尺屬（Hylocere usundatus）植物果實(shí)，是近年來在我國備受關(guān)注的一種熱帶亞熱帶經(jīng)濟(jì)植物[1]。目前在我國海南、福建、廣西、廣東和貴州省等地被大面積種植，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值?；瘕埞矶际菍?，火龍果果肉和果皮富含植物多糖、植物蛋白質(zhì)及多種氨基酸、脂肪酸及礦物質(zhì)等，此外，還含有多種生物活性物質(zhì)，如多酚、黃酮類化合物、花青素等，而這些天然多酚、黃酮類化合物、花青素被實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有清除自由基和良好的抗氧化作用[2～3]。

衰老是一種生命過程的必然規(guī)律，是機(jī)體各種組織和器官功能的時(shí)間依賴性衰退，是各種生命成熟后都一定經(jīng)歷的最后階段，衰老不能抗拒，但是可以通過藥物干預(yù)延緩衰老，如通過保持機(jī)體具有足夠的抗氧化物質(zhì)，就能及時(shí)清除機(jī)體內(nèi)過量的自由基，保持機(jī)體健康和抗衰老[4]。由于火龍果是天然抗氧化劑的良好來源，因此本實(shí)驗(yàn)以火龍果果皮和果肉為原料，從抗氧化酶活性的角度探討火龍果的抗氧化作用?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1藥物及試劑

新鮮火龍果，紅皮白肉，采購于廣西百色市；D半乳糖購于武漢博士德生物工程有限公司；谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及動(dòng)物分組

60只健康昆明種小白鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)：SYXK20110010）。小鼠被隨機(jī)分成4個(gè)實(shí)驗(yàn)組：衰老模型組、火龍果皮組、火龍果肉組和正常對照組，每組15只。

1.3衰老模型的建立及給藥

采用皮下注射D半乳糖（150 mg/kg）建立衰老小鼠模型，正常對照組小鼠皮下注射等量生理鹽水。在造模的同時(shí)，火龍果皮組、火龍果肉組小鼠按體重劑量100 g·kg1·d1分別喂食火龍果皮和火龍果肉，連續(xù)注射和喂養(yǎng)40 d。

1.4血清GSHPx、SOD活性和MDA含量的測定

每只小鼠摘眼球取血液于1.5 ml EP管中，經(jīng)過37℃恒溫水浴靜置30 min后，3000 rpm離心10 min獲得血清，根據(jù)相應(yīng)試劑盒操作說明書分別測定GSHPx、SOD活性和MDA含量。

1.5肝臟GSHPx、SOD活性和MDA含量的測定

小鼠取血后，迅速斷椎處死，及時(shí)摘取肝臟，先用4℃預(yù)冷的生理鹽水清洗肝臟表面血液，再用干凈的濾紙吸干表面水分，稱重，用玻璃勻漿器于冰水浴中進(jìn)行手工勻漿，再加入9倍體積的生理鹽水稀釋制成10%肝勻漿，以3000 rpm離心10 min，根據(jù)相應(yīng)試劑盒操作說明書分別取上清液部分測定GSHPx、SOD活性和MDA含量。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)過程中每組小鼠因?yàn)榉N種原因均有意外死亡，因此以每組12只實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，各組和對照組兩兩比較采用最小顯著差法（LSD法），檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05。

2結(jié)果

2.1火龍果對小鼠血清GSHPx、SOD活性和MDA含量的影響

與正常對照組比較，火龍果肉組、火龍果皮組血清GSHPx活性均顯著升高（P<0.05或0.01）；而衰老模型組血清GSHPx活性顯著降低（P<0.05）；火龍果皮組血清MDA含量顯著降低（P<0.05）。與衰老模型組比較，火龍果肉組、火龍果皮組血清GSHPx活性均顯著升高（P<0.01），而MDA含量均顯著降低（P<0.05或0.01）。但火龍果肉組、火龍果皮組血清SOD活性與正常對照組比較以及與衰老模型組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2火龍果對小鼠肝臟GSHPx、SOD活性和MDA含量的影響

與正常對照組相比，火龍果肉組、火龍果皮組和衰老模型組肝臟MDA含量均有顯著升高（P<0.01）；同時(shí)衰老模型組肝臟SOD活性顯著降低（P<0.01）。與衰老模型組相比，火龍果肉組、火龍果皮組肝臟SOD的活性顯著升高（P<0.01）；火龍果肉組MDA含量顯著降低（P<0.05）。但火龍果肉組、火龍果皮組肝臟GSHPx活性與正常對照組相比以及與衰老模型組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3討論

在眾多研究抗衰老機(jī)制中，自由基學(xué)說被公認(rèn)為是衰老發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一[5]。自由基學(xué)說認(rèn)為，人體抗氧化防御體系中的各種抗氧化酶如GSHPx、SOD等和小分子非酶抗氧劑與機(jī)體自由基的產(chǎn)生在正常生理情況下是處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)中，一旦這種平衡被打破，機(jī)體內(nèi)包括氧自由基以及其活性衍生物就會(huì)產(chǎn)生過多，這類統(tǒng)稱為活性氧族（reactive oxygen species，ROS）物質(zhì)產(chǎn)生過多會(huì)使機(jī)體發(fā)生一系列的氧化反應(yīng)，使細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物如MDA等有害物質(zhì)，結(jié)果使細(xì)胞質(zhì)膜的生理功能遭受損害，細(xì)胞生命活力低下，導(dǎo)致組織器官功能減退，從而使機(jī)體進(jìn)入衰老過程[6]。因此，通過保持機(jī)體內(nèi)各種抗氧化酶活性，及時(shí)清除過量自由基，對于延緩衰老有著重要的意義。

火龍果的果肉和果皮中均含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，此外，還含有如黃酮類物質(zhì)、三萜類化合物等生理活性藥用成分[7]。火龍果含有的多酚類化合物，具有清除過量自由基危害的功效[8～9]。紅皮白肉火龍果以及紅皮紅肉火龍果的果肉和果皮中都含有豐富的花青素，其中火龍果中的甜菜花青素（betacyanines）既可以作為著色劑，又具有減少和清除自由基的能力[10～11]。本研究結(jié)果表明，火龍果肉、果皮能顯著增高血清GSHPx活性和肝臟SOD活性，同時(shí)能顯著降低血清和肝臟MDA含量，提示火龍果具有提高抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生等而發(fā)揮抗氧化作用。但在本次實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，火龍果在提高血清SOD活性、肝臟GSHPx活性方面作用不明顯，這是否可能與產(chǎn)生SOD、GSHPx的組織器官有關(guān)，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

綜上所述，火龍果具有一定抗氧化、延緩衰老的作用。其抗氧化和延緩衰老方面的有效成分和作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]鄧仁菊，范建新，蔡永強(qiáng)，等.國內(nèi)外火龍果研究進(jìn)展及產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（6）：188192.

[2]廖芳，王光銀，陳來平，等.火龍果果皮色素的提取及抗氧化活性的研究[J].凱里學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，31（6）：6165.

[3]陳冠林，鄧曉婷，胡坤，等.火龍果的營養(yǎng)價(jià)值、生物學(xué)活性及其開發(fā)應(yīng)用[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，40（11）：20302033.

[4]楊翠榮.衰老的機(jī)理與藥物抗衰老作用的分析[J].北方藥學(xué)，2014，11（3）： 163，120.

[5]周文麗，張建鵬，馮偉華，等.腦衰老機(jī)制與腦疾病的關(guān)系[J].生命的化學(xué)，2008，28（4）：435438.

[6]黃麗娟，黃彥峰，王映，等.茴香提取液對糖尿病大鼠血清NO、MDA和SOD的影響[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，38（1）：1416.

[7]趙志平，楊春霞.火龍果的開發(fā)與發(fā)展前景[J].中國種業(yè)，2006，6（2）：1314.

[8] He X，Liu RH.Phytochemicals of apple peels：isolation，structure elucidation，and their antiproliferative and antioxidant activities[J].J Agric Food Chem，2008，56（21）：99059910.

[9] Lamperi L，Chiuminatto U，Cincinelli A，et al.Polyphenol levels and free radical scavenging activities of four apple cultivars from integrated and organic farming in different italian areas[J].J Agric Food Chem，2008，56（15）：65366546.

[10] Stintzing FC，Carle R.Functional properties of anthocyanins and betalains in plants，food，and in human nutrition[J].Trends FoodSci Tech，2004，15（1）：1938.

[11]Tenore GC，Novellino E，Basile A.Nutraceutical potential and antioxidant benefits of red pitaya（Hylocereus polyrhizus）extracts[J].J Funct Foods，2012，4（1）：129136.

（收稿日期：2016-05-25修回日期：2016-08-06）

（編輯：梁明佩）

鄭守歡 韋玉娜 黎瑜霜 魏海帆 李朝敢

【摘要】目的探討火龍果對衰老模型小鼠血清和肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性以及對丙二醛（MDA）含量的影響。

方法設(shè)立衰老模型組、火龍果皮組、火龍果肉組和正常對照組，每組12只小鼠列入統(tǒng)計(jì)分析，衰老模型小鼠每天分別給予火龍果的果皮和果肉（100 g·kg1·d1）喂養(yǎng)，40 d后處死小鼠，取血清及肝臟測定GSHPx、SOD活性和MDA含量。

結(jié)果與衰老模型組比較，火龍果皮組、火龍果肉組小鼠血清中的GSHPx活性顯著增高（P<0.01），MDA含量顯著降低（P<0.05或P<0.01）；火龍果皮組、火龍果肉組小鼠肝臟中SOD的活性顯著增高（P<0.01），火龍果肉組MDA含量顯著降低（P<0.05）。

結(jié)論火龍果具有增強(qiáng)抗氧化酶活性而發(fā)揮抗氧化作用。

【關(guān)鍵詞】火龍果；GSHPx；SOD；MDA

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2016.04.009

火龍果（Hylocereus undatus），又稱紅龍果、吉祥果和仙蜜果等，是仙人掌科（Cataceae）量天尺屬（Hylocere usundatus）植物果實(shí)，是近年來在我國備受關(guān)注的一種熱帶亞熱帶經(jīng)濟(jì)植物[1]。目前在我國海南、福建、廣西、廣東和貴州省等地被大面積種植，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值?；瘕埞矶际菍?，火龍果果肉和果皮富含植物多糖、植物蛋白質(zhì)及多種氨基酸、脂肪酸及礦物質(zhì)等，此外，還含有多種生物活性物質(zhì)，如多酚、黃酮類化合物、花青素等，而這些天然多酚、黃酮類化合物、花青素被實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有清除自由基和良好的抗氧化作用[2～3]。

衰老是一種生命過程的必然規(guī)律，是機(jī)體各種組織和器官功能的時(shí)間依賴性衰退，是各種生命成熟后都一定經(jīng)歷的最后階段，衰老不能抗拒，但是可以通過藥物干預(yù)延緩衰老，如通過保持機(jī)體具有足夠的抗氧化物質(zhì)，就能及時(shí)清除機(jī)體內(nèi)過量的自由基，保持機(jī)體健康和抗衰老[4]。由于火龍果是天然抗氧化劑的良好來源，因此本實(shí)驗(yàn)以火龍果果皮和果肉為原料，從抗氧化酶活性的角度探討火龍果的抗氧化作用。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1藥物及試劑

新鮮火龍果，紅皮白肉，采購于廣西百色市；D半乳糖購于武漢博士德生物工程有限公司；谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及動(dòng)物分組

60只健康昆明種小白鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)：SYXK20110010）。小鼠被隨機(jī)分成4個(gè)實(shí)驗(yàn)組：衰老模型組、火龍果皮組、火龍果肉組和正常對照組，每組15只。

1.3衰老模型的建立及給藥

采用皮下注射D半乳糖（150 mg/kg）建立衰老小鼠模型，正常對照組小鼠皮下注射等量生理鹽水。在造模的同時(shí)，火龍果皮組、火龍果肉組小鼠按體重劑量100 g·kg1·d1分別喂食火龍果皮和火龍果肉，連續(xù)注射和喂養(yǎng)40 d。

1.4血清GSHPx、SOD活性和MDA含量的測定

每只小鼠摘眼球取血液于1.5 ml EP管中，經(jīng)過37℃恒溫水浴靜置30 min后，3000 rpm離心10 min獲得血清，根據(jù)相應(yīng)試劑盒操作說明書分別測定GSHPx、SOD活性和MDA含量。

1.5肝臟GSHPx、SOD活性和MDA含量的測定

小鼠取血后，迅速斷椎處死，及時(shí)摘取肝臟，先用4℃預(yù)冷的生理鹽水清洗肝臟表面血液，再用干凈的濾紙吸干表面水分，稱重，用玻璃勻漿器于冰水浴中進(jìn)行手工勻漿，再加入9倍體積的生理鹽水稀釋制成10%肝勻漿，以3000 rpm離心10 min，根據(jù)相應(yīng)試劑盒操作說明書分別取上清液部分測定GSHPx、SOD活性和MDA含量。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)過程中每組小鼠因?yàn)榉N種原因均有意外死亡，因此以每組12只實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，各組和對照組兩兩比較采用最小顯著差法（LSD法），檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05。

2結(jié)果

2.1火龍果對小鼠血清GSHPx、SOD活性和MDA含量的影響

與正常對照組比較，火龍果肉組、火龍果皮組血清GSHPx活性均顯著升高（P<0.05或0.01）；而衰老模型組血清GSHPx活性顯著降低（P<0.05）；火龍果皮組血清MDA含量顯著降低（P<0.05）。與衰老模型組比較，火龍果肉組、火龍果皮組血清GSHPx活性均顯著升高（P<0.01），而MDA含量均顯著降低（P<0.05或0.01）。但火龍果肉組、火龍果皮組血清SOD活性與正常對照組比較以及與衰老模型組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2火龍果對小鼠肝臟GSHPx、SOD活性和MDA含量的影響

與正常對照組相比，火龍果肉組、火龍果皮組和衰老模型組肝臟MDA含量均有顯著升高（P<0.01）；同時(shí)衰老模型組肝臟SOD活性顯著降低（P<0.01）。與衰老模型組相比，火龍果肉組、火龍果皮組肝臟SOD的活性顯著升高（P<0.01）；火龍果肉組MDA含量顯著降低（P<0.05）。但火龍果肉組、火龍果皮組肝臟GSHPx活性與正常對照組相比以及與衰老模型組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3討論

在眾多研究抗衰老機(jī)制中，自由基學(xué)說被公認(rèn)為是衰老發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一[5]。自由基學(xué)說認(rèn)為，人體抗氧化防御體系中的各種抗氧化酶如GSHPx、SOD等和小分子非酶抗氧劑與機(jī)體自由基的產(chǎn)生在正常生理情況下是處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)中，一旦這種平衡被打破，機(jī)體內(nèi)包括氧自由基以及其活性衍生物就會(huì)產(chǎn)生過多，這類統(tǒng)稱為活性氧族（reactive oxygen species，ROS）物質(zhì)產(chǎn)生過多會(huì)使機(jī)體發(fā)生一系列的氧化反應(yīng)，使細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物如MDA等有害物質(zhì)，結(jié)果使細(xì)胞質(zhì)膜的生理功能遭受損害，細(xì)胞生命活力低下，導(dǎo)致組織器官功能減退，從而使機(jī)體進(jìn)入衰老過程[6]。因此，通過保持機(jī)體內(nèi)各種抗氧化酶活性，及時(shí)清除過量自由基，對于延緩衰老有著重要的意義。

火龍果的果肉和果皮中均含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，此外，還含有如黃酮類物質(zhì)、三萜類化合物等生理活性藥用成分[7]?；瘕埞械亩喾宇惢衔铮哂星宄^量自由基危害的功效[8～9]。紅皮白肉火龍果以及紅皮紅肉火龍果的果肉和果皮中都含有豐富的花青素，其中火龍果中的甜菜花青素（betacyanines）既可以作為著色劑，又具有減少和清除自由基的能力[10～11]。本研究結(jié)果表明，火龍果肉、果皮能顯著增高血清GSHPx活性和肝臟SOD活性，同時(shí)能顯著降低血清和肝臟MDA含量，提示火龍果具有提高抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生等而發(fā)揮抗氧化作用。但在本次實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，火龍果在提高血清SOD活性、肝臟GSHPx活性方面作用不明顯，這是否可能與產(chǎn)生SOD、GSHPx的組織器官有關(guān)，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

綜上所述，火龍果具有一定抗氧化、延緩衰老的作用。其抗氧化和延緩衰老方面的有效成分和作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]鄧仁菊，范建新，蔡永強(qiáng)，等.國內(nèi)外火龍果研究進(jìn)展及產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（6）：188192.

[2]廖芳，王光銀，陳來平，等.火龍果果皮色素的提取及抗氧化活性的研究[J].凱里學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，31（6）：6165.

[3]陳冠林，鄧曉婷，胡坤，等.火龍果的營養(yǎng)價(jià)值、生物學(xué)活性及其開發(fā)應(yīng)用[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，40（11）：20302033.

[4]楊翠榮.衰老的機(jī)理與藥物抗衰老作用的分析[J].北方藥學(xué)，2014，11（3）： 163，120.

[5]周文麗，張建鵬，馮偉華，等.腦衰老機(jī)制與腦疾病的關(guān)系[J].生命的化學(xué)，2008，28（4）：435438.

[6]黃麗娟，黃彥峰，王映，等.茴香提取液對糖尿病大鼠血清NO、MDA和SOD的影響[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，38（1）：1416.

[7]趙志平，楊春霞.火龍果的開發(fā)與發(fā)展前景[J].中國種業(yè)，2006，6（2）：1314.

[8] He X，Liu RH.Phytochemicals of apple peels：isolation，structure elucidation，and their antiproliferative and antioxidant activities[J].J Agric Food Chem，2008，56（21）：99059910.

[9] Lamperi L，Chiuminatto U，Cincinelli A，et al.Polyphenol levels and free radical scavenging activities of four apple cultivars from integrated and organic farming in different italian areas[J].J Agric Food Chem，2008，56（15）：65366546.

[10] Stintzing FC，Carle R.Functional properties of anthocyanins and betalains in plants，food，and in human nutrition[J].Trends FoodSci Tech，2004，15（1）：1938.

[11]Tenore GC，Novellino E，Basile A.Nutraceutical potential and antioxidant benefits of red pitaya（Hylocereus polyrhizus）extracts[J].J Funct Foods，2012，4（1）：129136.

（收稿日期：2016-05-25修回日期：2016-08-06）

（編輯：梁明佩）