高效液相色譜法測定八爪金龍及組方制劑中巖白菜素的含量

摘要：為測定八爪金龍及其組方制劑開喉劍中的有效成分巖白菜素，研究建立高效液相色譜（HPLC）法，以甲醇∶水（25∶75，V/V）為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測波長274 nm。結(jié)果表明，溶液中巖白菜素在0.585 6～58.560 0 μg/mL時(shí)有良好的線性關(guān)系（r=0.999 5），平均回收率為103.17%，RSD為0.28%，該方法操作簡單、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可行，可用于開喉劍及組方藥材八爪金龍中巖白菜素的含量測定。

關(guān)鍵詞：八爪金龍；開喉劍噴霧劑；巖白菜素；高效液相色譜

中圖分類號：O657.7+2；R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）01-0186-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.01.049

八爪金龍[Ardisia crispa （Thunb.） A. DC.]又名百兩金、八爪龍、八爪根、鐵雨傘、高八爪、開喉箭（四川），主要分布在湖北、四川、貴州、江西、廣西等地。為紫金科植物百兩金或矮莖朱砂根的根莖或全草，《貴州草藥》有記載，稱其辛微苦澀，平，能清熱，利咽化瘀，對慢性咽炎有較好療效，被苗族奉為喉科良藥，清熱排濕，消腫止痛，為貴州民間常用的治療咽喉的中草藥，具有明顯的抑制甲型流感病毒作用，能顯著抑制革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的生長，對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌、枯草桿菌、變形桿菌抑制作用更為明顯，具有明顯抗炎、鎮(zhèn)痛和解熱作用。巖白菜素（Bergeninum）是八爪金龍的成分之一，屬于異香豆素類化合物，具有良好的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎、護(hù)肝、抗病毒和神經(jīng)保護(hù)作用[1]，選擇巖白菜素類型的藥物活性成分作為八爪金龍質(zhì)量控制指標(biāo)具有科學(xué)意義和應(yīng)用前景。開喉劍噴霧劑由八爪金龍、山豆根、蟬蛻、薄荷腦等4味藥材組成，具有清熱解毒、消腫止痛的功效。已有對各種中藥如小兒止咳顆粒、喘膠囊、復(fù)方矮地茶片、虎耳草、巖白菜等的巖白菜素含量的測定的報(bào)道[2-11]，但鮮有對八爪金龍和開喉劍噴霧劑中的巖白菜素的超聲提取及定量分析的研究報(bào)道。本研究采用超聲提取八爪金龍和開喉劍噴霧劑中的巖白菜素，并用高效液相色譜（HPLC）法測定其含量。

1 材料

1.1 測試樣品 八爪金龍，產(chǎn)地廣西桂林；開喉劍噴霧劑，貴州三力制藥有限責(zé)任公司提供。

1.2 儀器 LC2000D型高效液相色譜儀，CQ-100B-ST型超聲提取器，玻璃砂芯過濾裝置（FD.JH.JS），HZY-A200型電子天平。

1.3 試劑 甲醇為色譜純，水為經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過的純化水，巖白菜素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號111532。

2 試驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱型號Luna-5u-c18（2）-100A（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫30 ℃，流動(dòng)相甲醇∶水（25∶75，V/V），流速1.0 mL/min；檢測波長274 nm。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取適量巖白菜素對照品，置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，稀釋，配置成0.732 mg/mL的溶液，測得色譜見圖1（A）。

2.3 樣品溶液的制備

八爪金龍粉末0.40～0.45 g，開喉劍溶液2.00～2.10 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，放置30 min，超聲波處理40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾。 精密量取續(xù)濾液5 mL，置于10 mL容量瓶中加甲醇至刻度，搖勻。與原續(xù)濾液分別置樣品瓶貼標(biāo)簽、密封保存。取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試液樣品。HPLC分離后的色譜見圖1（B、C）。

2.4 方法考察

2.4.1 線性關(guān)系的考察 量取上述對照品溶液0.06、0.08、0.20、0.40、1.00、2.00、4.00 mL置于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成濃度為0.585 6，2.928，5.856，29.28，58.56 μg/mL巖白菜素對照品溶液，分別進(jìn)樣10 μL。以巖白菜素濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性分析，得到回歸方程為y=25.79x+548.79，R2=0.999 5。結(jié)果表明，巖白菜素在0.585 6～58.56 μg內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取八爪金龍0.410 g，開喉劍2.010 g，按照樣品溶液制備的方式制備溶液，每次進(jìn)樣10 μL，共5次，時(shí)間間隔分別為0、1、2、4、8 h，記錄峰面積值。5次巖白菜素含量測定值基本不變，平均值分別為0.121%、0.073%，RSD分別為1.388%、1.370%，結(jié)果表明樣品溶液至少在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣10 μL，5次進(jìn)樣測得八爪金龍中巖白菜素含量平均值為0.118%，RSD=1.695%，開喉劍中巖白菜素含量平均值為0.073%，RSD=0.968%，結(jié)果表明試驗(yàn)方法精密度良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取八爪金龍樣品和開喉劍樣品各5份，分別約0.4、2.0 g，按樣品溶液制備方式制備溶液，進(jìn)樣，記錄峰面積值。測得峰面積的RSD分別為1.586%、0.865%，結(jié)果表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的八爪金龍和開喉劍樣品各為0.2、1.0 g，共5份，分別加入對照品，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，八爪金龍和開喉劍的平均回收率分別為103.2%（n=3）、100.7%（n=3），具有良好的準(zhǔn)確度。具體見表1、表2。

2.5 樣品含量的測定

按照“2.2”、“2.3”的方法分別制備對照品和樣品溶液，進(jìn)樣各10 μL，測定其峰面積，計(jì)算樣品中巖白菜素的含量，結(jié)果表明，開喉劍和八爪金龍中巖白菜素的含量分別為0.072%～0.073%、0.115%～0.125%。具體見表3、表4。

3 小結(jié)與討論

根據(jù)巖白菜素在甲醇中溶解、在乙醇或水中微溶的特性，考慮操作容易等原因，采用甲醇作為提取溶劑，考察超聲提取法的適合溫度、功率以及時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)果表明，超聲提取法操作簡單、省時(shí)、提取效率高且周期短[12-15]，具有良好的應(yīng)用前景，且試驗(yàn)可在室溫進(jìn)行，設(shè)備簡單，操作簡便，是提取八爪金龍中巖白菜素的一種有效方法。本研究得到的對八爪金龍和開喉劍噴霧劑中巖白菜素的超聲提取和分析方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性符合定量分析要求，色譜分離良好，操作簡便，可作為該藥材與中藥制劑的含量測定方法。

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