雙生子胃黏膜組織中IL-17 表達(dá)水平的研究

孟欣穎，周長(zhǎng)宏，汪韶潔，馬 健，王 濤，董全江，逄增昌

1.青島市市立醫(yī)院(東區(qū))干保二科，山東 青島266071;2.青島市疾病預(yù)防控制中心;3.青島市市立醫(yī)院東院區(qū)消化內(nèi)科

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤。在我國(guó)，胃癌的發(fā)生率和死亡率位居所有惡性腫瘤的前三位［1］。據(jù)青島市一項(xiàng)惡性腫瘤住院構(gòu)成的統(tǒng)計(jì)，胃癌已成為第2 位的高發(fā)惡性疾?。?］。因此，了解胃癌的發(fā)病機(jī)制以達(dá)到進(jìn)一步防治的目標(biāo)迫在眉睫。胃黏膜的慢性炎癥是導(dǎo)致胃癌發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制，白介素-17(interleukin-17，IL-17)是近年來研究較多的促炎癥因子，不僅參與了胃黏膜慢性炎癥的形成，還在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用［3-4］。雙生子是研究遺傳和環(huán)境因素相互作用的良好模型，已廣泛應(yīng)用于多種疾病的研究。本研究通過對(duì)青島市區(qū)雙生子的胃黏膜組織進(jìn)行IL-17 表達(dá)水平的檢測(cè)，旨在闡明遺傳和環(huán)境因素對(duì)胃黏膜組織中IL-17 表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 青島市內(nèi)4 區(qū)共35 對(duì)雙生子接受胃鏡檢查，經(jīng)卵型鑒定［5］，區(qū)分單卵(monozygotic，MZ)雙生子和異卵(dizygotic，DZ)雙生子。MZ 雙生子共23對(duì)，男5 對(duì)，女18 對(duì)，平均年齡(54.1 ±8.2)歲;DZ 雙生子共12 對(duì)，其中同性別5 對(duì)，均為女性，不同性別7對(duì)，平均年齡(54.5 ±6.4)歲。對(duì)于本研究的各項(xiàng)調(diào)查內(nèi)容，雙生子均知情同意。

1.2 標(biāo)本采集 胃黏膜組織標(biāo)本來自胃鏡活檢組織。胃鏡觀察中有典型病變的取自病變處，無典型病變的均取自胃竇部。標(biāo)本采集后經(jīng)4%多聚甲醛固定，石蠟包埋待檢。

1.3 胃黏膜組織中IL-17 的檢測(cè) 石蠟包埋的組織標(biāo)本以5 μm 厚度連續(xù)切片，經(jīng)脫臘、梯度乙醇水化，檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)微波修復(fù)15 min，3%過氧化氫封閉10 min，PBS 洗，一抗室溫孵育1 h，一抗稀釋濃度為:兔抗人IL-17 多克隆抗體-1∶150(北京博奧森生物)，PBS 洗滌，加入通用型超敏二抗室溫孵育15 min，PBS 洗滌，DAB 顯色沖洗，蘇木精復(fù)染，脫水、透明并樹膠封片。

1.4 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的判定 IL-17 陽(yáng)性顆粒呈深棕色或黃褐色，主要定位于細(xì)胞的胞漿和/或胞膜。按細(xì)胞染色深淺計(jì)分:無顯色為0 分，淡黃色為1分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。高倍鏡下計(jì)數(shù)5 個(gè)視野中1 000 個(gè)細(xì)胞，按染色細(xì)胞陽(yáng)性率計(jì)分:陰性為0 分，陽(yáng)性細(xì)胞率＜25%為1 分，25% ～50%為2 分，50% ～75%為3 分，≥75%為4 分。兩分相加，0 分為陰性(-)，2 ～3 分為弱陽(yáng)性(+)，4 ～5 分為中度陽(yáng)性(++)，6 ～7 分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)算Kappa 系數(shù)判斷一致性。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MZ 和DZ 雙生子胃黏膜組織中IL-17 的表達(dá)在MZ 和DZ 雙生子的胃黏膜組織中，IL-17 的表達(dá)水平相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表1)。

表1 MZ 和DZ 雙生子胃黏膜組織中IL-17 的表達(dá)Tab1 Expression of IL-17 in gastric mucosal tissues in MZ and DZ

2.2 MZ 和DZ 雙生子胃黏膜組織中IL-17 表達(dá)與炎癥程度的相關(guān)性 MZ 和DZ 雙生子的胃黏膜組織中，IL-17 的表達(dá)水平與黏膜炎癥程度呈正相關(guān)，即在炎癥呈中-重度的胃黏膜組織中，IL-17 的表達(dá)水平明顯高于輕度炎癥的組織(P ＜0.01，見表2)。

表2 MZ 和DZ 雙生子胃黏膜組織中IL-17 表達(dá)與炎癥程度的相關(guān)性Tab 2 Correlation between expression of IL-17 and degree of inflammation in gastric mucosal tissues in MZ and DZ

2.3 MZ 和DZ 雙生子胃黏膜組織中IL-17 表達(dá)一致性的比較 通過計(jì)算Kappa 系數(shù)判斷MZ 和DZ 雙生子兩位成員間胃黏膜組織中IL-17 表達(dá)的一致性。MZ雙生子兩位成員的胃黏膜組織中，IL-17 表達(dá)水平一致的為7 對(duì)(30.4%)，Kappa 系數(shù)為0.019;DZ 雙生子兩位成員的胃黏膜組織中，IL-17 表達(dá)水平一致的為4 對(duì)(33.3%)，Kappa 系數(shù)為0。IL-17 表達(dá)水平一致率在MZ 和DZ 雙生子中比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

3 討論

雙生子是研究遺傳和環(huán)境因素作用于機(jī)體的理想模型，MZ 雙生子所攜帶的基因完全一致，而DZ 雙生子的相同基因?yàn)?0%，通過對(duì)兩者患某種病變一致性的比較，可以區(qū)分遺傳與環(huán)境因素對(duì)該病變作用的大小。在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，慢性炎癥的存在，尤其是幽門螺桿菌導(dǎo)致的胃黏膜的慢性炎癥是胃癌發(fā)生的重要機(jī)制［6］。在我們既往的研究［7］中發(fā)現(xiàn)，促炎癥因子IL-17 在慢性胃炎患者的胃黏膜組織中表達(dá)增強(qiáng)，并且與炎癥程度呈正相關(guān)，表明IL-17 在胃黏膜的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。那么，胃黏膜組織中IL-17的表達(dá)是否受遺傳因素影響呢?關(guān)于這點(diǎn)，目前還未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

在本研究中，我們選取雙生子作為研究對(duì)象，檢測(cè)MZ 和DZ 雙生子的胃黏膜組織中IL-17 的表達(dá)，探討遺傳因素是否影響胃黏膜組織中IL-17 的表達(dá)水平，進(jìn)而影響胃黏膜的炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，MZ和DZ 雙生子的胃黏膜組織中IL-17 的表達(dá)水平無明顯差異，IL-17 的表達(dá)水平與胃黏膜組織炎癥的程度相關(guān)，這與我們以往的研究相一致。無論是MZ 雙生子還是DZ 雙生子，雙生子中兩位成員胃黏膜組織中IL-17 表達(dá)水平的一致性均較低，提示雙生子胃黏膜組織中IL-17 的表達(dá)水平可能更多地受環(huán)境因素的影響，而受遺傳因素的影響有限。

在我國(guó)食管/賁門癌高發(fā)區(qū)進(jìn)行的一系列雙生子研究也有類似發(fā)現(xiàn)［8］，即雙生子兩位成員食管或賁門癌檢出率的一致性較低，且食管或胃黏膜組織病理學(xué)表現(xiàn)的一致性也較低，這些結(jié)果均提示環(huán)境因素造成上述改變的可能大于遺傳因素。目前一些研究結(jié)果顯示，隨著年齡的增長(zhǎng)，遺傳因素所起的作用逐漸變小，而環(huán)境因素對(duì)疾病的影響逐漸增加［9］。在后天的環(huán)境因素中，DNA 的甲基化及組蛋白的乙酰化造成的基因表觀遺傳學(xué)改變，可能是導(dǎo)致一些疾病發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制［10］。由此可見，后天環(huán)境因素對(duì)疾病的影響不容忽視，積極尋找可能的環(huán)境致病因素往往為疾病的防治提供了可能。由此可見，未來應(yīng)進(jìn)一步探討影響IL-17 表達(dá)的環(huán)境因素，如飲食習(xí)慣、生活方式等，以期對(duì)胃癌的防治提供有實(shí)踐意義的措施。

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