脾酪氨酸激酶在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及對血管內(nèi)皮生長因子-C的影響

脾酪氨酸激酶在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及對血管內(nèi)皮生長因子-C的影響

趙云鵬趙小剛叢波孫啟峰彭傳亮郭嘉仲贠燦華郝迎濤

(山東大學(xué)第二醫(yī)院胸外科，山東濟(jì)南250033)

摘要〔〕目的研究非小細(xì)胞肺癌組織中脾酪氨酸激酶(Syk)的表達(dá)及其與血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)表達(dá)的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法，檢測山東大學(xué)第二醫(yī)院手術(shù)切除的70例非小細(xì)胞肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織中Syk、VEGF-C的表達(dá)。結(jié)果非小細(xì)胞肺癌組織中Syk、VEGF-C的表達(dá)與正常肺組織中及癌旁組織Syk、VEGF-C的表達(dá)有顯著差異(P<0.05)，分別為5.7%、95.7%、100%，57.1%、10.0%、7.1%，Syk與VEGF-C的表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(r=-1.000，P=0.000)。結(jié)論Syk的表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能下調(diào)VEGF-C的表達(dá)從而發(fā)揮抑制作用。

關(guān)鍵詞〔〕脾酪氨酸激酶；血管內(nèi)皮生長因子-C；非小細(xì)胞肺癌

中圖分類號〔〕R734.2〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

基金項目：山東省科技攻關(guān)計劃資助項目(2009GG10002030)

通訊作者：趙小剛(1969-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事胸外科疾病的基礎(chǔ)及臨床研究。

第一作者：趙云鵬(1987-)，男，碩士，醫(yī)師，主要從事胸外科疾病的基礎(chǔ)及臨床研究。

脾酪氨酸激酶(Syk)是一種非受體酪氨酸激酶，目前被認(rèn)為是一種候選抑癌基因。Coopman等〔1〕首先發(fā)現(xiàn)并報道了Syk在不同乳腺組織中的表達(dá)差異，這其中包括正常乳腺細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞等。其后Syk在胃癌〔2〕、胰腺癌〔3〕、食管癌〔4〕等惡性腫瘤中的表達(dá)及意義均有研究。在Syk與肺癌方面的研究方面，Su等〔5〕的研究表明，COX-2可能通過EP1和HER-2/Neu受體途徑上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-C的表達(dá)，從而通過上述途徑導(dǎo)致肺腺癌的淋巴轉(zhuǎn)移。Jennifer等〔6〕認(rèn)為，Syk與HER-2/neu是一對功能相反的基因，由此推測Syk相關(guān)信號通路可能通過影響淋巴管生成因子VEGF-C/VEGFR-3通路起作用，從而抑制腫瘤淋巴管生成。本文擬探討Syk與非小細(xì)胞肺癌的關(guān)系及其與VEGF-C表達(dá)的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1臨床資料2009年1月至2011年12月于山東大學(xué)第二醫(yī)院術(shù)中切除的70例原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本，標(biāo)本包括肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織，常規(guī)石蠟包埋，切片?；颊咴谛g(shù)前均未接受過任何抗腫瘤治療。病理結(jié)果(按1981WHO標(biāo)準(zhǔn))分別為肺腺癌(28例)，肺鱗癌(36例)及肺大細(xì)胞癌(6例)。其中男54例，女16例，年齡40～75歲。其中高分化者20例，中分化26例，低分化18例，未分化6例，PTNM分期根據(jù)《原發(fā)性肺癌診療規(guī)范(2011年版)》，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為13例、33例、19例、5例。全部標(biāo)本均在手術(shù)中收集，用于實驗的癌組織均取自于癌腫，且其中不含壞死物質(zhì)，癌旁組織取材據(jù)腫瘤邊緣2 cm，正常肺組織取材嚴(yán)格距腫瘤邊緣5 cm以上，且病理結(jié)果中均未顯示有癌細(xì)胞。

1.2Syk、VEGF-C蛋白表達(dá)水平測定采用SP法。兔抗人Syk多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗體購自美國ZYMED公司，HistoStain免疫組化試劑盒購自上海麥約爾生物技術(shù)有限公司。用已知陽性標(biāo)本作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。由兩位病理科醫(yī)師分別雙盲閱片，Syk及VEGF-C陽性者胞質(zhì)中可見棕黃色顆?；蜃睾稚w粒，每張切片隨機選取10個等倍視野(×200)，計數(shù)整張切片中著色的癌細(xì)胞或者癌旁細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，當(dāng)陽性胞質(zhì)染色的細(xì)胞<5%時，定為“-”，5%～25%為“+”，25%～50%為“”，>50%為“”。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS16.0軟件進(jìn)行χ2檢驗或Fisher確切概率檢驗及Spearman等級相關(guān)檢驗。

2結(jié)果

2.1Syk、VEGF-C在肺癌組織、癌旁組織和正常肺組織中的表達(dá)及相關(guān)性見圖1。肺癌組織中Syk蛋白陽性表達(dá)率〔4例(5.7%)〕明顯低于癌旁組織〔68例(95.7%)〕和正常肺組織〔70例(100%)，P<0.05〕，癌旁組織和正常肺組織Syk陽性表達(dá)率無顯著性差異(P=0.248)，肺癌組織中VEGF-C蛋白陽性表達(dá)率〔40例(57.1%)〕明顯高于癌旁組織〔7例(10.0%)〕和正常肺組織〔5例(7.1%)，P<0.05〕，癌旁組織和正常肺組織VEGF-C陽性表達(dá)率無顯著性差異(P=0.546)。Syk與VEGF-C的表達(dá)在肺組織從正常組織、癌旁組織到肺癌組織這一過程中呈負(fù)相關(guān)(r=-1.000，P=0.000)。

正常肺組織

肺鱗癌組織

肺腺癌組織

肺大細(xì)胞癌組織

2.2 Syk陽性表達(dá)與性別、年齡、組織類型、分化程度及分期的關(guān)系不同性別、年齡的肺癌患者Syk表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。Syk在不同非小細(xì)胞肺癌組織類型、分化程度、分期的患者中的表達(dá)無差異(P>0.05)。見表1。

表1　Syk的陽性表達(dá)與不同臨床病理特征的相關(guān)性〔 n(%)〕

3討論

蛋白酪氨酸激酶是一個重要的靶分子〔7〕，能夠促進(jìn)一些重要蛋白質(zhì)的磷酸化，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長，分化，和死亡等過程中有著重要作用。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)〔8〕，原癌基因和癌基因產(chǎn)物半數(shù)以上的都具有酪氨酸激酶的活性。

目前國內(nèi)外關(guān)于Syk在肺癌中的研究報道較少。蘭芬等〔9〕的研究結(jié)果表明：Syk在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)顯著低于正常肺組織，且其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、腫瘤大小、分期無關(guān)。段林燦等〔10〕研究結(jié)果顯示肺腺癌患者血清Syk水平與淋巴結(jié)受累程度成負(fù)相關(guān)。由于有不少研究表明，在胰腺癌〔3〕、食管鱗癌〔4〕、子宮內(nèi)膜癌〔11〕、宮頸鱗癌〔12〕等惡性腫瘤中不同分期的病人其Syk的表達(dá)有顯著性差異，為進(jìn)一步判斷Syk在不同分期非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)是否有顯著性差異，我們又將Ⅰ、Ⅱ期合并，Ⅲ、Ⅳ期合并，分析后發(fā)現(xiàn)其仍無統(tǒng)計學(xué)差異，究其原因可能是由于非小細(xì)胞肺癌中Syk表達(dá)很低，70例研究對象相對偏少，因此，我們認(rèn)為其差異是否具備實際意義還需更大的樣本量驗證或采用其他實驗手段進(jìn)一步研究確認(rèn)。

根據(jù)Su〔5〕等的研究、Jennifer等〔6〕的研究以及Abtahian等〔13〕關(guān)于Syk/SLP-76缺陷的胚胎鼠淋巴管可出芽形成大量的新生淋巴管道的報道，可推測Syk相關(guān)信號通路可能通過影響淋巴管生成因子VEGF-C/VEGFR-3通路起作用，在從而抑制腫瘤淋巴管生成。國內(nèi)方芳等〔14〕提示乳腺癌中Syk的下調(diào)可能使VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)增高。本實驗結(jié)果顯示：Syk與VEGF-C的表達(dá)在肺組織從正常到癌旁組織、肺癌組織這一過程中呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，Syk在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能會下調(diào)VEGF-C的表達(dá)從而發(fā)揮抑制作用。

4參考文獻(xiàn)

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〔2013-07-04修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)