Er：YAG激光根管預(yù)備聯(lián)合Prontosan凝膠根管封藥對(duì)根管糞腸球菌的殺滅效果

Er：YAG激光根管預(yù)備聯(lián)合Prontosan凝膠根管封藥對(duì)根管糞腸球菌的殺滅效果

耿濤

(邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第二附屬醫(yī)院,河北邢臺(tái)054000)

關(guān)鍵詞〔〕糞腸球菌；Er：YAG激光；Prontosan凝膠；清除率

中圖分類號(hào)〔〕R4〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

第一作者：耿濤(1980-)，女 ，碩士，主治醫(yī)師，主要從事口腔內(nèi)科學(xué)、口腔修復(fù)學(xué)方面的研究。

根管治療是牙髓病和根尖周病國(guó)際上最常用的有效治療方法〔1〕。然而，臨床上很多患者完善根管充填后出現(xiàn)再感染，其主要原因與殘留在根管內(nèi)的細(xì)菌相關(guān)，主要是糞腸球菌〔2〕。Er：YAG激光是一種新近出現(xiàn)的牙體治療激光，在根管感染控制方面具有很好的臨床療效〔3〕。本課題使用Er：YAG激光照射根管壁后，使用Prontosan凝膠作為根管消毒劑，與傳統(tǒng)根管預(yù)備方法及目前臨床常用根管消毒藥物，如甲醛甲酚合劑(FC)、樟腦酚(CP)及氫氧化鈣制劑(氫氧化鈣丙二醇糊劑)行常規(guī)對(duì)照，以期對(duì)Er：YAG激光和Prontosan凝膠的抗糞腸球菌性能作出初步評(píng)價(jià)，為臨床應(yīng)用提供參考。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)儀器與試劑儀器：Er：YAG激光治療機(jī)、Protaper鎳鈦根備儀、CO2培養(yǎng)箱、天平、S-3000N型掃描電子顯微鏡、冷凍干燥機(jī)。試劑：0.9%生理鹽水、3%雙氧水、牛心腦浸液、糞腸球菌(ATCC29212)、FC、CP、氫氧化鈣制劑(氫氧化鈣丙二醇糊劑)、Prontosan凝膠。

1.2標(biāo)本來源隨機(jī)選取該院2012年9月至2014年1月口腔門診新鮮拔除的單根管前磨牙120顆，均滿足根管與根尖孔發(fā)育完全、無充填體或近髓齲壞、牙根無裂痕、就診前未做過牙髓相關(guān)治療〔4〕。隨后去除牙根周圍的牙結(jié)石和軟組織附著、截除牙冠與拔除牙髓，使用K銼(ISO10到15號(hào))精確測(cè)量工作長(zhǎng)度(WL，本試驗(yàn)定義距根尖孔1mm的距離)，按照廠家的指導(dǎo)使用Protaper預(yù)備所有根管到F2，用0.9%生理鹽水和3%雙氧水交替沖洗根管。離體牙根樣本置于牛心腦浸液(BMI肉湯)的試管中121℃高溫高壓滅菌20min靜置5%CO2培養(yǎng)箱(37℃)內(nèi)，24 h后觀察體重指數(shù)(BMI)肉湯無混濁，以確定滅菌完全。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1糞腸球菌感染模型建立〔5〕復(fù)蘇糞腸球菌并接種于BMI肉湯中，制備為0.5mol/L的標(biāo)準(zhǔn)糞腸球菌液，將已滅菌牙根置于糞腸球菌液5%CO2培養(yǎng)箱(37℃)內(nèi)培養(yǎng)24 h，每3 d換1次新鮮菌液，4 w后隨機(jī)抽取6個(gè)樣本進(jìn)行掃描電鏡觀察，確認(rèn)糞腸球菌感染模型是否成功建立。

1.3.2實(shí)驗(yàn)分組及處理方案按照隨機(jī)數(shù)字法將成功建立糞腸球菌感染模型的120粒牙根分為A組(Er：YAG激光+FC)、B組(Er：YAG激光+CP)、C組〔Er：YAG激光+氫氧化鈣制劑(氫氧化鈣丙二醇糊劑)〕、D(Er：YAG激光+Prontosan凝膠)、E組(生理鹽水)五組，每組牙根24粒，從五組中隨機(jī)選取12粒作為相應(yīng)的陰性對(duì)照，剩余的12粒分別采取對(duì)應(yīng)組的相應(yīng)處理。最后將所有牙根的培養(yǎng)皿置于5%CO2培養(yǎng)箱(37℃)內(nèi)培養(yǎng)1w。

1.3.3細(xì)菌檢測(cè)25#H型銼去除根管內(nèi)消毒劑，無菌生理鹽水沖洗，無菌吸潮紙尖干燥后，用G鉆均勻磨取不同深度(0～100、100～200、200～300μm)根管內(nèi)層牙本質(zhì)粉末約4mg，用滅菌筆帽狀物接住，用分析天平稱重4mg置于含有5mlBMI肉湯的滅菌藍(lán)蓋小瓶?jī)?nèi)，5%CO2培養(yǎng)箱(37℃)內(nèi)培養(yǎng)72 h，分別觀察所有滅菌藍(lán)蓋小瓶?jī)?nèi)菌落的形成情況并用S-3000N型掃描電子顯微鏡進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，計(jì)算各段根管部位的糞腸球菌清除率，清除率=1-N/M×100%(N為處理后糞腸球菌數(shù)，M為基線糞腸球菌數(shù))〔6〕。

2結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)總體情況120粒離體牙根樣本經(jīng)高溫高壓滅菌后，所有BMI肉湯均無混濁，達(dá)到滅菌完全；接種糞腸球菌4w后，所有牙根樣本的根管壁表面均可看到糞腸球菌在根管壁表面呈生物膜樣結(jié)構(gòu)附著，有些樣本還可看到部分糞腸球菌侵入至小管深層，以上現(xiàn)象均提示糞腸球菌感染根管模型建立成功；將根管內(nèi)層牙本質(zhì)粉末置于含有5mlBMI肉湯的滅菌藍(lán)蓋小瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)72h后，所有滅菌藍(lán)蓋小瓶?jī)?nèi)可見邊緣整齊、表面光滑濕潤(rùn)的灰白色菌落，菌落量各異。

2.2各組糞腸球菌清除效果分析見表1。各組糞腸球菌清除率隨牙本質(zhì)深度的增加而逐漸下降，A～D組不同牙本質(zhì)深度的糞腸球菌清除率均高于E組；對(duì)同一深度而言，牙本質(zhì)深度0～100μm，A～D組的糞腸球菌清除率差異無顯著意義(P>0.05)；牙本質(zhì)深度100～200μm與200～300μm中，D組的糞腸球菌清除率顯著高于其他組(P<0.05)。

表1　各組糞腸球菌清除率比較 ±s)

3討論

根管治療術(shù)是目前治療根尖周病和牙髓病的首選方法，在臨床上受到廣泛應(yīng)用。治療成功的首要條件就是根管內(nèi)感染源的控制，根管內(nèi)細(xì)菌有效地清除可顯著提高治療的成功率〔7，8〕。研究發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌是根管內(nèi)感染和再發(fā)感染的主要致病菌，根管治療失敗的患牙內(nèi)糞腸球菌的檢出率高達(dá)47%～77%〔9，10〕。糞腸球菌是革蘭陽(yáng)性兼性厭氧菌，為腸球菌屬的代表種菌，菌體呈圓形或橢圓形，直徑0.5～1.01μm，大多數(shù)成雙或短鏈狀排列，能在10℃或45℃pH9.6或含6.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，并能耐65℃ 30min，是健康人體的上呼吸道、口腔或腸道的常駐菌，也是重要的條件致病菌。糞腸球菌引起根管感染的機(jī)制有：(1)糞腸球菌具有強(qiáng)滲透能力，可侵入牙本質(zhì)小管內(nèi)部；(2)糞腸球菌可單獨(dú)或與其他細(xì)菌混合形成生物膜，有效抵抗宿主免疫反應(yīng)和外界因素的滲入；(3)糞腸球菌可通過表面蛋白質(zhì)如Esp、Ace、聚集物質(zhì)等黏附于牙本質(zhì)或其他細(xì)菌，同時(shí)還可釋放透明質(zhì)酸、酶明膠酶等毒力因子，引起白細(xì)胞的聚集及釋放炎癥因子，造成根尖周圍組織及牙髓組織的破壞和炎癥反應(yīng)〔11〕。鑒于糞腸球菌的特性以及藥物的細(xì)胞毒性、免疫原性等副作用，目前的機(jī)械和化學(xué)治療已不能完全徹底清除根管內(nèi)的糞腸球菌〔12〕。

激光醫(yī)學(xué)在近年來牙髓病治療中的應(yīng)用廣泛，已被廣泛應(yīng)用于治療的各個(gè)方面。Er：YAG(波長(zhǎng)2.94μm)激光是一種新近出現(xiàn)的牙體治療激光，其原理為通過水吸收其能量致使細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的水分蒸發(fā)，細(xì)胞壁破裂而達(dá)到殺滅細(xì)菌的作用。另外在其沖洗根管過程中產(chǎn)生的大量氣泡可推動(dòng)液體的流動(dòng)而加快反應(yīng)，提高沖洗藥物的滲透性而達(dá)到良好的殺菌效果〔13〕。Er：YAG激光照射根管壁可以熔化根管內(nèi)玷污層，封閉牙本質(zhì)根管口，同時(shí)可以去除部分有機(jī)基質(zhì)，導(dǎo)致牙本質(zhì)滲透性降低，殺滅根尖部位的細(xì)菌，增加牙根的抗吸收能力。國(guó)內(nèi)外的研究表明，Er：YAG激光兼有CO2激光和Nd：YAG激光的優(yōu)點(diǎn)，其切除效率高于CO2激光，而損傷程度大大小于后兩種激光，并有一定的抑菌作用〔8，13〕。Prontosan凝膠是浸潤(rùn)傷口覆蓋層以濕潤(rùn)和清潔傷口，防止生物膜的形成以抑制細(xì)菌滋生，具有很強(qiáng)的收斂、抑菌作用〔14〕。采用Er：YAG激光根管預(yù)備聯(lián)合Prontosan凝膠根管封藥具有更強(qiáng)的抑菌作用。

本研究說明牙本質(zhì)深度是藥物滅菌效果的一個(gè)重要影響因素，這和之前的研究結(jié)果相似〔15〕。

綜上所述，Er：YAG激光根管預(yù)備聯(lián)合Prontosan凝膠根管封藥能有效清除根管各深度的糞腸球菌，相比FC、CP及氫氧化鈣制劑(氫氧化鈣丙二醇糊劑)效果更優(yōu)。

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〔2013-12-03修回〕

(編輯袁左鳴)