細(xì)菌感染兔發(fā)熱時(shí)相白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞及其直徑的變化

細(xì)菌感染兔發(fā)熱時(shí)相白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞及其直徑的變化

李妤蓉張文菊程瑞彩張潔莉劉明

(邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第二附屬醫(yī)院，河北邢臺(tái)054000)

摘要〔〕目的探討白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞(NE)體積(V)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、白細(xì)胞介素(IL)-8等參數(shù)在急性細(xì)菌感染兔發(fā)熱時(shí)相中的變化。方法建立金黃色葡萄球菌感染兔模型，利用Beckman CouIter LH750全自動(dòng)血液分析儀VCS技術(shù)和顯微鏡計(jì)數(shù)WBC檢測(cè)急性細(xì)菌感染兔(n=5)及對(duì)照組(n=5)的耳緣靜脈EDTA-K2全血，統(tǒng)計(jì)分析WBC總數(shù)、NEV及NE的直徑。結(jié)果與對(duì)照組比較，感染組在發(fā)熱寒戰(zhàn)期、高峰期WBC、NE直徑、CRP、IL-8差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別是P<0.01，P<0.05，P<0.01，P<0.01)。結(jié)論細(xì)菌感染早期(發(fā)熱寒戰(zhàn)期)兔耳緣靜脈血WBC低、NE直徑減小，因此WBC、NE大小、CRP三者綜合分析對(duì)急性細(xì)菌感染性疾病早期診斷及療效觀察有重要臨床價(jià)值。

關(guān)鍵詞〔〕細(xì)菌感染模型；中性粒細(xì)胞；VCS技術(shù)

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R34〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

第一作者：李妤蓉(1964-)，女，教授，主任檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)研究。

參與機(jī)體炎癥反應(yīng)的眾多炎癥細(xì)胞中，中性粒細(xì)胞(NE)是數(shù)量最大、功能最強(qiáng)的免疫細(xì)胞，具有很強(qiáng)的趨化、變形、黏附、吞噬和殺菌作用〔1，2〕。在炎癥介質(zhì)誘導(dǎo)下，骨髓釋放白細(xì)胞(WBC)增加，NE由儲(chǔ)存池向循環(huán)池游走增多，有些不成熟WBC也被釋放，出現(xiàn)外周血WBC總數(shù)和NE比率增高〔3〕。但是在部分病例中，WBC總數(shù)反而降低，甚至出現(xiàn)危急值，此時(shí)僅用WBC總數(shù)與NE比率來(lái)診斷急性細(xì)菌感染較困難〔4〕。本文通過(guò)細(xì)菌感染動(dòng)物模型研究發(fā)熱時(shí)相WBC、NE體積(NEV)、NE直徑的變化，尋找一種快速、準(zhǔn)確、客觀的診斷指標(biāo)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)分組10只幼齡新西蘭兔購(gòu)于河北醫(yī)科大動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，分為感染組和對(duì)照組2組，每組5只。

1.2兔感染發(fā)熱模型制作依據(jù)家兔肺炎雙球菌感染發(fā)熱模型〔5〕方法。用凝固酶陽(yáng)性金黃色葡萄球菌菌量6×107個(gè)皮內(nèi)注射免疫幼齡新西蘭兔造模。

1.3體溫測(cè)量每間隔2 h測(cè)一次體溫。所用測(cè)溫計(jì)為人用肛表，插入直腸7.0 cm以上，持續(xù)時(shí)間為表上讀數(shù)穩(wěn)定1 min。測(cè)量前常溫飼養(yǎng)在籠內(nèi)，隨意攝食、飲水和活動(dòng)。測(cè)量時(shí)固定于暴露頭尾盒內(nèi)，盡量避免動(dòng)物掙扎、躁動(dòng)，以免體溫變化。所用細(xì)菌為本院微生物實(shí)驗(yàn)室提供的凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌。感染前、經(jīng)增菌、鑒定、再增菌等程序，最后獲得血清肉湯菌液，經(jīng)硫酸鋇比濁法定量。對(duì)照組注射液除葡萄球菌外一切與感染組條件一致。

1.4標(biāo)本采集14：00注射，兩組注射前、注射后檢測(cè)體溫后采集耳緣靜脈血1.5 ml于EDTA抗凝管中，做血細(xì)胞分析、C反應(yīng)蛋白(CRP)、白細(xì)胞介素(IL)-8測(cè)定，同時(shí)制血涂片、瑞氏染色、油鏡下血細(xì)胞形態(tài)分析，重點(diǎn)檢查NE形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。

1.5儀器及試劑Beckman-Coulter LH750全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，Omlipo全自動(dòng)特定蛋白分析儀及配套試劑和質(zhì)控品，奧林巴斯顯微鏡。

2結(jié)果

和對(duì)照組比較，感染組在寒戰(zhàn)期、高峰期WBC總數(shù)及NE百分率差別非常顯著(P<0.01)；高熱期CRP、IL-8差別非常顯著(P<0.01)；退熱期WBC總數(shù)、NE百分率、CRP、IL-8差別不明顯(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　兩組24 h體溫、WBC總數(shù)、NE直徑、CRP、IL-8對(duì)比 ( n=5)

3討論

機(jī)體在細(xì)菌感染后，常引起反應(yīng)性的WBC總數(shù)和NE增多，同時(shí)伴隨的NE核左移和中毒性改變也與疾病的療效和預(yù)后有關(guān)〔6〕。長(zhǎng)期以來(lái)，血常規(guī)中的WBC和NE作為臨床判斷血液細(xì)菌感染的主要指標(biāo)，但有些細(xì)菌感染患者WBC和NE并不高，以此為依據(jù)診斷可能會(huì)貽誤治療時(shí)機(jī)〔7，8〕。

感染發(fā)熱4 h(寒戰(zhàn)期)，感染組精神怠倦、顫抖，身體蜷縮，有的兔子出現(xiàn)腹瀉；WBC總數(shù)降低；NE率在23%～51%，可見(jiàn)小NE，直徑在9～11 μm，核左移，嗜中性顆粒粗大，CRP達(dá)10 mg/L；之后，隨著體溫的升高進(jìn)入高峰期，WBC總數(shù)漸漸上升，NE數(shù)增多可達(dá)90%以上，核左移明顯，嗜中性顆粒粗大，體積增大，形態(tài)呈多形性，直徑在10～17 μm，可見(jiàn)晚幼粒和晚幼紅細(xì)胞；CRP、IL-8明顯升分別可高達(dá)30 mg/L、0.9 mmol/L以上。寒戰(zhàn)期WBC總數(shù)減低，原因可能是由于細(xì)胞因子和交感神經(jīng)的作用，引起血管收縮和血流減少，粒細(xì)胞由軸流移到邊集，邊緣池粒細(xì)胞增多，循環(huán)池粒細(xì)胞數(shù)減低〔9〕；細(xì)菌內(nèi)毒素、病毒可一過(guò)性抑制骨髓釋放粒細(xì)胞等，致循環(huán)池粒細(xì)胞減少；某些重度細(xì)菌感染時(shí)外周性粒細(xì)胞活性增強(qiáng)且趨化黏附于組織血管壁〔10〕；活化粒細(xì)胞膜變形能力減低，大多被滯留在肺毛細(xì)血管；外周血WBC聚集等，均可導(dǎo)致外周血WBC電子細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)假性減少，也就是外周血中WBC總數(shù)和NE比率不升高反而降低〔11〕。寒戰(zhàn)期血容量不足可能是致NEV縮小的主要原因〔12〕。

高峰期由于動(dòng)脈、毛細(xì)血管擴(kuò)張，血管通透性倍增，繼之血流減慢，嚴(yán)重者發(fā)性血流停滯，有利于WBC黏附于血管內(nèi)皮并滲出到炎癥部位〔13〕。同時(shí)，細(xì)菌感染時(shí)骨髓在炎癥因子刺激下不成熟粒細(xì)胞釋放增加，如中性桿狀核粒細(xì)胞和晚幼粒細(xì)胞〔14〕。同時(shí)外周邊緣池中NE在炎癥介質(zhì)作用下活化，活化的NE主要表現(xiàn)在偽足形成，更好發(fā)揮黏附、吞噬功能。外周血中出現(xiàn)體積、形態(tài)不同的不成熟粒細(xì)胞、活化粒細(xì)胞以及成熟粒細(xì)胞，導(dǎo)致平均NEV增大、體積大小不一、細(xì)胞異質(zhì)性增大〔15〕。

綜上，在急性發(fā)熱時(shí)WBC、NE大小、CRP三者綜合分析對(duì)急性細(xì)菌感染的早期診斷有非常大的價(jià)值。細(xì)胞因子在細(xì)菌感染中對(duì)NE遷移、形態(tài)變化的影響還需進(jìn)一步試驗(yàn)證明。

4參考文獻(xiàn)

1賈蓓，錢(qián)元恕.中性粒細(xì)胞在細(xì)菌感染中的免疫調(diào)節(jié)作用〔J〕.國(guó)外醫(yī)藥·抗生素分冊(cè)，2004；25(2)：61-3.

2王劍超，馬春芳，呂國(guó)才，等.中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)在急性細(xì)菌感染篩查中的初步應(yīng)用〔J〕.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009；32(2)：158-9.

3郭志雄，彭政，陳聰.白細(xì)胞VCS參數(shù)在細(xì)菌及病毒感染的鑒別臨床應(yīng)用研究〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2013；23(17)：4327-9.

4孫紅，林云華，馬雅英.中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)在急性細(xì)菌感染中的初步應(yīng)用〔J〕.浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)，2011；16(4)：304-5，312.

5熊立凡.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：36-49.

6張家明，黃勝，盧粵，等.中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)在細(xì)菌感染性疾病早期診斷及療效中的應(yīng)用價(jià)值〔J〕.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012;31(1)：21-4.

7張麗霞，謝而付，陸琳，等.中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞VCS參數(shù)在MDS和AA患者中的變化及意義〔J〕.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012；34(24)：2947-8.

8張麗霞，高麗，陸琳，等.中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞VCS參數(shù)在巨幼細(xì)胞貧血中的研究〔J〕.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013；28(3)：589-91.

9賴(lài)其偉，雷小平，鐘佩怡，等.C反應(yīng)蛋白定量與中性粒細(xì)胞比值、白細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合測(cè)定在細(xì)菌感染炎癥診斷中的應(yīng)用〔J〕.中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011；8(34)：98-9.

10孫紅，朱杰，林云華.中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)在細(xì)菌感染與應(yīng)激性疾病中的應(yīng)用〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012；27(12)：1027-30.

11樂(lè)華文，張玨，章曉鷹.中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)在細(xì)菌感染中的診斷價(jià)值〔J〕.診斷學(xué)理論與實(shí)踐，2013；12(4)：228-30.

12付士義.中性粒細(xì)胞體積分布寬度在菌血癥患者診斷中的應(yīng)用〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2013；17(9)：1660-2.

13俞蕾，翁文浩，施惠蘭，等.中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)在呼吸系統(tǒng)細(xì)菌感染性疾病中的變化及臨床應(yīng)用〔J〕.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012；30(1)：596-8.

14呂美艷，王明山，楊麗紅，等.細(xì)菌感染性疾病患者白細(xì)胞VCS參數(shù)的變化及臨床意義〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2007；22(5)：578-80.

15胡型忠，徐克，林曉，等.中性粒細(xì)胞新參數(shù)NEUT-X、NEUT-Y在細(xì)菌感染中的應(yīng)用價(jià)值研究〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012；22(5)：1095-8.

〔2014-03-11修回〕

(編輯苑云杰)