丹銀提取物對血管性癡呆模型大鼠海馬長時程增強的影響

丹銀提取物對血管性癡呆模型大鼠海馬長時程增強的影響

張敏李永江潘婭陳粲

(貴陽醫(yī)學院生理學教研室， 貴州貴陽550004)

摘要〔〕目的探討丹銀提取物對血管性癡呆(VD)模型大鼠海馬長時程增強(LTP)的影響。方法采用改良的4-VO法建立VD模型大鼠，術(shù)后給予丹銀提取物治療，用Morris水迷宮檢測大鼠學習記憶能力，在體記錄大鼠海馬LTP。結(jié)果經(jīng)丹銀提取物治療后，VD模型大鼠學習記憶能力明顯改善。LTP實驗：模型組與對照組比較，高頻刺激后峰電位(PS)幅值和興奮性突觸后電位(EPSP)斜率均明顯減小(P<0.01)，用藥組與模型組比，高頻刺激后PS幅值和EPSP斜率均增大(P<0.01)。結(jié)論丹銀提取物能改善VD大鼠學習和記憶能力，其機制可能與其促進VD模型大鼠海馬病理性突觸可塑性的恢復有關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕血管性癡呆；銀杏葉提取物；丹酚酸B；長時程增強

中圖分類號〔〕R743〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：貴陽市科技局資助項目(T2006-12)

第一作者：張敏(1973-)，女，副教授，碩士，碩士生導師，主要從事神經(jīng)疾病研究。

血管性癡呆(VD)是指各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合征，以記憶、認知功能缺損為主，是我國最常見的癡呆之一〔1〕，但其確切發(fā)病機制尚不明了,也缺乏特效的療法。研究發(fā)現(xiàn),VD大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元之間突觸數(shù)量及形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著變化〔2〕,而海馬齒狀回長時程增強(LTP)是突觸可塑性變化的典型表現(xiàn)形式之一〔3〕。中醫(yī)藥在本病的治療方面具有一定優(yōu)勢，不僅能明顯改善近期臨床癥狀，而且可延緩病程進展，提高生活質(zhì)量。本實驗觀察銀杏葉提取物聯(lián)合丹參提取物(丹銀提取物)對VD模型大鼠學習記憶及LTP化的影響,以探討丹銀提取物對VD病的促智機制。

1材料和方法

1.1材料健康、雄性SD大鼠60只，體重為300～350 g，由貴陽醫(yī)學院動物中心提供，使用許可證號：SYXY(黔)2002-0001。丹酚酸B(60%)和銀杏葉提取物(黃酮 ≥24%、內(nèi)脂≥6%)購自西安鴻生生物技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1動物分組將60只SD大鼠隨機分成3組：VD模型組(模型組)、對照組、用藥組，每組20只，因?qū)嶒炦^程中有大鼠死亡，故最終對照組15只，模型組10只，用藥組14只。

1.2.2VD模型的制作采用改良Pulsinelli四血管阻斷法建立VD動物模型〔4〕。大鼠麻醉后行背側(cè)頸部正中切口，用電凝針插入翼小孔灼斷雙側(cè)椎動脈，造成永久性閉塞； 24 h后再夾閉雙側(cè)頸總動脈5 min×3次，每次間隔1 h。對照組大鼠不燒灼椎動脈及夾閉頸總動脈，其余步驟同前。

1.2.3治療造模后用藥組給予銀杏葉提取物96 mg/kg和丹酚酸B 36 mg/kg分別溶于2 ml蒸餾水中灌胃。對照組、模型組分別給予相同容量的生理鹽水灌胃。灌胃1次/d，連續(xù)4 w。

1.2.4水迷宮實驗各組大鼠于用藥后第3周開始進行Morris水迷宮實驗。實驗的第1～6天進行定向航行實驗，第7天進行空間探索實驗。

1.2.5LTP實驗刺激及記錄方法〔5〕各組大鼠于Morris水迷宮實驗完成后(實驗第4周)進行LTP實驗。使用BL-420生物機能實驗系統(tǒng)先給予波寬0.1 ms的單脈沖(方波)刺激，在海馬DG區(qū)記錄誘發(fā)群峰電位(PS)的產(chǎn)生，刺激強度逐漸增大，直到PS波幅不再增高時的刺激強度為最大刺激強度。然后用1/2最大刺激強度的單刺激連續(xù)刺激并記錄30 min，1次/min，為測試刺激，之后采用相同刺激強度的高頻刺激(HFS)，其波寬為0.1 ms，頻率100 Hz ，5個脈沖/串，串間隔0.2 s，脈沖總數(shù)100，最后用與測試刺激相同的單刺激作為檢驗刺激，持續(xù)記錄90 min。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS11.5進行SNK檢驗。

2結(jié)果

2.1Morris 水迷宮實驗如表1所示，在第1～6天的Morris水迷宮定向航行實驗中，各組的平均逃避潛伏期均呈日漸縮短的趨勢，模型組與對照組比較，平均逃避潛伏期在實驗進行的第2～6天顯著延長(P<0.05，P<0.01)；用藥組與模型組比較，實驗的第2～6天平均逃避潛伏期均縮短(P<0.05，P<0.01)。如表2所示，在第7天的Morris水迷宮空間探索實驗中，模型組與對照組比較，第3象限活動時間明顯縮短、穿越站臺次數(shù)明顯減少(P<0.01)。用藥組與模型組比較，第3象限活動時間延長、穿越站臺次數(shù)增多(P<0.01)。

2.2海馬長時程增強實驗PS幅值變化如表3所示，對照組在HFS后PS幅值明顯增大，且表現(xiàn)為持續(xù)性增加，PS幅值相對值最高達194%；模型組在HFS后PS幅值增大程度較??；用藥組PS幅值在HFS后迅速且持續(xù)性增加，90 min時達到186%水平； HFS后模型組與對照組相比，PS幅值明顯減小(P<0.01)；用藥組與模型組相比，PS幅值明顯增大(P<0.01)。

表1　各組大鼠定向航行實驗每日平均逃避潛伏期 ± s,s)

與對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.05,4)P<0.01

表2　各組大鼠空間探索實驗第3象限活動時間

與對照組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.01，表3同

2.3LTP實驗EPSP斜率變化如表4所示，對照組在HFS后EPSP斜率迅速增加，最高達20.6%；模型組EPSP斜率在HFS后維持在100%左右的較低水平，到90 min時減小到100%以下水平；用藥組EPSP斜率在HFS后增加，最高時達到199%； HFS后模型組與對照組相比EPSP斜率明顯減小(P<0.01)；用藥組與模型組比，EPSP斜率明顯增大(P<0.05，P<0.01)。

表3　各組大鼠海馬齒狀回HFS后各時點

表4　各組大鼠海馬齒狀回HFS后各時點

與對照組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01

3討論

VD的臨床表現(xiàn)主要以記憶、認知功能缺損為主,VD大鼠海馬缺血損傷，學習記憶下降。本實驗結(jié)果顯示模型組大鼠學習記憶能力較對照組明顯降低,用藥組學習記憶能力較模型組提高,表明采用改良四血管阻斷法能成功模擬VD大鼠缺血后學習記憶能力減退。

研究表明，動物空間學習記憶能力的增強或損傷與其海馬LTP活動的提高與降低密切相關(guān)〔6,7〕，提示海馬LTP是反映學習記憶路徑形成的神經(jīng)模式及神經(jīng)元生理活動的一個重要指標。本實驗以HFS前PS幅值和EPSP斜率為標準(HFS前的數(shù)值為1,即100%),記錄HFS后不同時間點的相對PS幅值和EPSP斜率，并以此反映海馬齒狀回LTP的誘導和維持，PS幅值和EPSP斜率增大都反映了突觸后細胞同步活動的增強。研究表明,VD大鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)多組參數(shù)發(fā)生變化是影響海馬LTP的維持和誘導的組織學基礎(chǔ),突觸可塑性依賴于不同突觸前、突觸后神經(jīng)元機制和突觸周圍的膠質(zhì)細胞〔8〕。

丹參具有活血化淤、通經(jīng)活絡(luò)之功效，丹酚酸B是從丹參中分離出的水溶性酚酸類化合物，是丹參中重要的有效成分之一〔9〕。丹酚酸B透過血腦屏障后，具有很強的抗氧化作用，對腦缺血和缺血再灌注引起的腦損傷發(fā)揮保護作用，可縮小缺血區(qū)面積，改善腦缺血引起的學習記憶和行為學障礙〔10〕。銀杏葉提取物(Egb)主要成分為黃酮類和萜內(nèi)酯化合物等，對腦組織及腦神經(jīng)細胞的活性有保護作用。研究表明〔11〕，Egb可以擴張腦血管，增加腦血流量，促進血液循環(huán)，對抗腦缺血性損傷；同時可調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)含量，減少對神經(jīng)細胞的損傷，并可通過促進海馬膽堿的再攝取，減少M型膽堿受體和α2腎上腺受體及遞質(zhì)的丟失，從而發(fā)揮改善學習和記憶能力的功能。本實驗表明丹銀提取物可以改善VD大鼠的學習記憶，其機制可能與其易化VD大鼠海馬LTP有關(guān)。

4參考文獻

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〔2014-03-17修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)