高效液相色譜法測定鹽酸氟西汀的含量

·論著·

高效液相色譜法測定鹽酸氟西汀的含量

吳荷琴，陳朝霞(常州四藥制藥有限公司，江蘇 常州 213004)

[摘要]目的建立測定鹽酸氟西汀含量的高效液相色譜法。方法選用Agilent Eclipse XDB-C8柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：四氫呋喃-甲醇-三乙胺緩沖液(取三乙胺10 ml，置1 000 ml量筒中，加水980 ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.0)(30:10:60)；流速為1.0 ml/min;檢測波長：227 nm;進樣量：10 μl；柱溫：25 ℃。結(jié)果方法的線性范圍為55.17～165.51 μg/ml(r=0.999 9)；最低檢測限：0.15 μg/ml;回收率在99.9%～100.0%之間，重復性RSD為0.1%(n=6)。結(jié)論方法簡便靈敏，結(jié)果準確可靠，可用于鹽酸氟西汀的質(zhì)量控制。

[關鍵詞]鹽酸氟西汀；含量測定；高效液相色譜法

[作者簡介]吳荷琴，大專，工程師.研究方向：藥品質(zhì)量控制.Tel:13915832101；E-mail:784431028@qq.com

[中圖分類號]R917[文獻標志碼]A

DOI[]10.3969/j.issn.1006-0111.2015.01.015

[收稿日期]2013-05-22[修回日期]2014-04-07

Determination of fluoxetine hydrochloride by HPLC

WU Heqin，CHEN Zhaoxia(Changzhou Siyao Pharmaceutical Limited Company，Changzhou 213004，China)

Abstract[]ObjectiveTo establish an HPLC method for assay determination of fluoxetine hydrochloride.MethodsAgilent Eclipse XDB-C8 (4.6 mm × 250 mm，5 μm) was used，mobile phase was tetrahydrofuran-methanol-triethylamine buffer (to 10 ml of triethylamine in a 1 000 ml flask，added 980 ml of water，pH was adjust to 6.0 by phosphoric acid) (30:10:60),flow rate was 1.0 ml/min,detection wavelength was 227 nm,injection volume was 10 μl,column temperature was 25 ℃.ResultsLinearity range was 55.17-165.51 μg/ml (r=0.999 9),minimum detection limit was 0.15 μg/ml,accuracy was between 99.9%-100.0%,repeatability RSD was 0.1% (n=6).ConclusionThe method was accurate and reliable，which could be applied for quality control of fluoxetine hydrochloride.

[Key words]fluoxetine hydrochloride；assay；HPLC

鹽酸氟西汀(fluoxentine hydrochloride)是一種選擇性的5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)，能有效地抑制神經(jīng)元從突觸間隙中攝取5-羥色胺，增加間隙中可供實際利用的這種神經(jīng)遞質(zhì)，從而改善情感狀態(tài)，治療抑郁性精神障礙[1]。鹽酸氟西汀含量測定有化學滴定法(指示劑)和高效液相色譜法[2-4]?；瘜W滴定法指示劑的靈敏度較低。英國藥典2011版[5]、歐洲藥典7.0[6]、美國藥典35版[7]中采用高效液相色譜法測定鹽酸氟西汀含量。筆者綜合不同國家藥典特點，進行了條件優(yōu)化，確定了本文方法，以三乙胺磷酸緩沖液、四氫呋喃和甲醇為流動相直接測定鹽酸氟西汀含量，并按照中國藥典的要求進行了方法學驗證[8]。本法線性范圍寬，靈敏度高，方法簡便、準確，適用于鹽酸氟西汀的質(zhì)量控制，為將來收載于中國藥典打下基礎。

1儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國)；AG135電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；TOLEDO 320 pH 計 (瑞士梅特勒-托利多公司)。鹽酸氟西汀(常州四藥制藥有限公司，批號：X07011、X07021、X07031)；鹽酸氟西汀對照品(批號：G0F085)由美國藥典委員會提供，購自上海東方科技實業(yè)有限公司，四氫呋喃、甲醇和三乙胺色譜純均購自Merck公司，水為超純水。

2溶液的制備

2.1　對照品溶液

取鹽酸氟西汀對照品適量，精密稱定，用流動相溶解并稀釋制成濃度分別為550 μg/ml和110 μg/ml的溶液，分別作為對照品貯備液和對照品溶液。

2.2　供試品溶液

取鹽酸氟西汀11 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。

3色譜條件和系統(tǒng)適用性

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C8柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：四氫呋喃-甲醇-三乙胺緩沖液(取三乙胺10 ml，置1 000 ml量筒中，加水980 ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.0)(30:10:60)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：227 nm； 進樣量：10 μl；柱溫：25 ℃。

4方法學驗證

4.1　專屬性試驗

取濃度為110 μg/ml的鹽酸氟西汀對照品溶液分別進行酸、堿、高溫、光照、氧化破壞試驗，結(jié)果表明，在上述色譜條件下，鹽酸氟西汀與破壞后產(chǎn)生的降解產(chǎn)物均能較好分離，結(jié)果如圖1所示。

圖1　鹽酸氟西汀專屬性試驗色譜圖 A.酸降解;B.堿降解;C.高溫降解;D.光照降解;E.氧化降解

4.2　線性范圍

精密量取對照品儲備液適量，用流動相稀釋得到濃度分別為55.17、82.27、110.34、132.41、165.51 μg/ml的溶液，按上述色譜條件進樣測定鹽酸氟西汀峰面積。以鹽酸氟西汀峰面積(Y)為縱坐標，以溶液濃度(X)為橫坐標，進行線性回歸，得到回歸方程為Y=21.371 3X-38.253 2 (r=0.999 9)。結(jié)果表明，在鹽酸氟西汀濃度為55.17～165.51 μg/ml(n=5)的范圍內(nèi)，線性關系良好。

4.3　定量限和檢測限

取鹽酸氟西汀對照品溶液，用流動相逐級稀釋，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，以信噪比10:1時的濃度作為定量限，結(jié)果表明本法的定量限為0.5 μg/ml；以信噪比3:1時的濃度作為鹽酸氟西汀檢測限，其檢測限為0.15 μg/ml。

4.4　精密度試驗

4.4.1重復性取同批樣品6份，精密稱定，用流動相溶解并稀釋制成110 μg/ml的鹽酸氟西汀溶液，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，計算測得含量的精密度，鹽酸氟西汀含量平均值為99.9%，RSD為0.1%(n=6)，結(jié)果表明重復性良好。

4.4.2中間精密度由第2個分析員在不同日期、不同高效液相色譜儀上按照“4.4.1”項進行重復性試驗。2名分析員所得12個含量結(jié)果的RSD為0.2%，結(jié)果表明本方法中間精密度良好。

4.5　穩(wěn)定性試驗

取“2.2”項下的供試品溶液，分別于配制后0、1、8、24 h測定鹽酸氟西汀峰面積，RSD為0.3%，表明供試品溶液在室溫條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

4.6　回收率試驗

取本品9份，均精密稱定，分別用流動相溶解并稀釋制成每毫升中含鹽酸氟西汀約88、110、132 μg的溶液，每個濃度重復配制3次，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，計算回收率。結(jié)果低、中、高3種濃度的平均回收率分別為99.9%、100.0%和99.9%。

4.7　耐用性試驗

保持色譜條件不變，更換色譜柱，分別用Zorbax Eclipse XDB-C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Phenomenex C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)和Lichrosphere C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)按“4.4.1”項方法測定本品含量，結(jié)果分別為99.7%、100.2%和99.9%，表明方法耐用性良好。

5含量測定

取3個不同批號樣品，按“2.2”項方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，鹽酸氟西汀含量測定結(jié)果見表1。另取3批樣品約0.3 g，均精密稱定，分別用冰乙酸溶解，用0.1 mol/L高氯酸滴定液滴定，計算含量，結(jié)果與HPLC法基本一致(見表1)。

表1　兩種方法測定鹽酸氟西汀含量的結(jié)果比較(%)

實驗表明，用高效液相色譜法對鹽酸氟西汀含量進行測定，本法線性范圍寬、檢測限低，利于更好

地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

【參考文獻】

[1]周亦衛(wèi)，張圩，王建平，等.抗抑郁新藥——鹽酸氟西汀[J].上?；るs志，1998，23(22)：28-30.

[2]國家藥品監(jiān)督管理局標準(試行).鹽酸氟西汀質(zhì)量標準[S].[WS-551(X-434)-98].

[3]呂竹芬，謝清春，申樓.HPLC測定鹽酸氟西汀膠囊的含量[J].廣東藥學雜志，2005，15(3)：13-15.

[4]熊鳳梅，木合塔爾·吐爾洪，木尼熱·阿布都克力木，等.用毛細管電泳電化學發(fā)光法測定鹽酸氟西汀的含量[J].藥物分析雜志，2008，28(3)：440-442.

[5]The British Pharmacopeial Convention.British Pharmacopeia (6th ed)[S].2011:938-939.

[6]The European Pharmacopeial Convention.European Pharmacopeia[S].(7 th ed)，2011:2048-2049.

[7]The United States Pharmacopeial Convention.U.S.Pharmacopeia[S].(35 th ed)，2012:3241-3242.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版 二部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:194-195.

[本文編輯]陳靜