高效液相色譜法測定克拉維丁搽劑中醋酸地塞米松含量

·論著·

高效液相色譜法測定克拉維丁搽劑中醋酸地塞米松含量

常明泉，陳林，何秀麗，陳芳 (湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院， 湖北 十堰 442000)

[摘要]目的測定克拉維丁搽劑中醋酸地塞米松的含量。方法用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-水-冰醋酸(80:20:0.5)；檢測波長為240 nm；進樣量20 μl；柱溫30 ℃；流速1 ml/min。結(jié)果醋酸地塞米松在2.00 ～64.00 μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，Y=0.405 2X+0.804 2(r=0.999 9)，平均回收率為99.3%，RSD=0.93%(n=9)。結(jié)論該法便捷，重現(xiàn)性好，適用于克拉維丁搽劑中醋酸地塞米松的含量測定。

[關(guān)鍵詞]克拉維丁搽劑；醋酸地塞米松；高效液相色譜法

[基金項目]湖北省重大科學(xué)技術(shù)鑒定成果(登記號：EK2012D 150018000359)；太和科研基金資助項目(2009D34)

[作者簡介]常明泉，學(xué)士，副主任藥師.研究方向：制劑及質(zhì)量控制.Tel：13986912958；E-mail:907622985@qq.com

[通訊作者]陳林，博士，教授.研究方向：中草藥化學(xué).Tel:13986912958；E-mail:907622982@qq.com

[中圖分類號]R917[文獻標志碼]A

DOI[]10.3969/j.issn.1006-0111.2015.01.014

[收稿日期]2014-01-24[修回日期]2014-05-23

Determination of dexamethasone acetate in Kelaweiding liniment by HPLC

CHANG Mingquan，CHEN Lin，HE Xiuli， CHEN Fang(Taihe Hospital Affiliated to Hubei Medical College，Shiyan 442000，China)

Abstract[]ObjectiveTo establish the quantitative determination method of dexamethasone acetate in Kelaweiding liniment by HPLC.MethodsColumn：Diamonsil-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm),mobile phase：methanol-water-glacialaceticacid (80:20:0.5),flow rate：1.0 ml/min,UV detection wavelength：240 nm,injection volume ：20 μl,column temperature：30 ℃.ResultsThe standard curve was linear within the range of 2.00-64.00 μg/ml，linear equation was Y=0.405 2X+0.804 2(r=0.999 9).The average recovery was 99.3% with RSD 0.93% (n=9).ConclusionThis method was simple，stable and could be used to assay dexamethasone acetate in Kelaweiding liniment.

[Key words]Kelaweiding liniment；dexamethasone acetate；HPLC

克拉維丁搽劑是湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院的一個在研新制劑[1]，該制劑內(nèi)含克拉霉素、維生素B2、醋酸地塞米松、鹽酸丁卡因，具有抗菌消炎、止疼、促進潰瘍愈合的作用。用于新生兒科肛門、腋窩部位皮膚潰破、紅腫，也用于口腔科由于病毒感染、免疫力低下或缺乏維生素等原因引起的多種內(nèi)源性口腔潰瘍疾病。醋酸地塞米松是腎上腺皮質(zhì)激素類藥，具有抗炎和免疫抑制作用，能抑制結(jié)締組織的增生、降低毛細血管壁和細胞膜的通透性、減少炎性滲出量、抑制組胺及其他毒性物質(zhì)的形成和釋放、促進潰瘍愈合的作用。制劑中的維生素B2、克拉霉素、鹽酸丁卡因可按文獻[2~4]方法測定。為了全面控制制劑質(zhì)量、確保臨床療效及用藥安全有效，本測定擬用高效液相色譜法，對制劑中的醋酸地塞米松進行含量測定。

1儀器與試藥

1.1　儀器

戴安U-3000型高效液相色譜儀(美國戴安公司)；UP5200HE超聲儀(熊貓集團南京電子計量有限公司，500 W，50 Hz)；AUW-1200電子天平(日本島津，精度：0.000 01 g，)；WGA-UNI-10型超純水器(北京普析通儀器有限責(zé)任公司，功率：300 W)。

1.2　試藥

醋酸地塞米松對照品(中國藥品生物制品研究院，批號 100122-200805，含量100.0%)；克拉維丁搽劑(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院制備，規(guī)格：100 ml，批號：20130410，20130411，20130412)，冰醋酸為分析純，甲醇分別為分析純和色譜純。

2方法與結(jié)果

2.1　色譜條件 [5-7]

色譜柱C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-水-冰醋酸(80:20:0.5)；檢測波長240 nm；進樣量20 μl，流速1 ml/min，柱溫30 ℃。

2.2　溶液的制備

2.2.1對照品溶液精密稱取醋酸地塞米松對照品7.50 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解、定容，即得0.15 mg/ml對照品儲備液，精密吸取該溶液1 ml于10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得15.00 μg/ml對照品溶液。

2.2.2供試品溶液稱取克拉維丁搽劑樣品2 g于燒杯內(nèi)，加甲醇約10 ml，置超聲震蕩儀上超聲約5 min，溶液轉(zhuǎn)移至25 ml容量瓶內(nèi)，再分2次加甲醇(每次6 ml)于燒杯中超聲2 min，集中洗滌液于容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜置1 h，用適宜注射器抽取上清液，然后用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液稱取不含醋酸地塞米松的克拉維丁搽劑2 g 于燒杯內(nèi)，按供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.3　系統(tǒng)適用性試驗

分別取“2.2”項下的各溶液20 μl，在“2.1”色譜條件下進樣，記錄色譜圖，理論塔板數(shù)按醋酸地塞米松峰計算應(yīng)不低于3 500，對照品、樣品吸收峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度分別為1.80、1.78(均>1.50)，拖尾因子為0.98。結(jié)果除陰性樣品溶液外，對照品溶液、供試品溶液在同一時間均有同樣色譜峰出現(xiàn)，結(jié)果見圖1。

圖1　醋酸地塞米松高效液相色譜圖 A.對照品溶液；B.供試品溶液 ；C.陰性溶液；1.醋酸地塞米松吸收峰

2.4　曲線方程的建立

取醋酸地塞米松對照品適量，加甲醇制備成每毫升含醋酸地塞米松2.00、4.00、8.00、16.00、32.00、64.00 μg的溶液，取上述各溶液用0.45 μm微孔濾膜濾過，在“2.1”色譜條件下進樣，以濃度為橫坐標，峰面積值為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為：Y=0.405 2X+0.804 2，r=0.999 9，醋酸地塞米松在2.00～64.00 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5　精密度試驗

取“2.2”項下的對照品溶液，在“2.1”色譜條件下連續(xù)進樣5次，記錄峰面積值，均值為4.172 3，RSD為0.75%，說明儀器精密度良好。

2.6　穩(wěn)定性試驗

取“2.2”項下的供試品溶液，在“2.1”色譜條件下分別在0、3、6、12、24 h進樣，記錄峰面積值，均值為4.160 8，RSD為1.91%，說明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7　重復(fù)性試驗

平行稱取5份樣品(批號 20130410)，每份2 g于燒杯中，按“2.2”中供試品溶液項下的方法制備溶液，在“2.1”色譜條件下進樣，測定峰面積值，計算含量，結(jié)果測得平均含量為0.147%(mg/g)，RSD為1.98%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8　加樣回收率試驗

稱取不含醋酸地塞米松的克拉維丁搽劑2 g 于燒杯中，共9份，每3份1組，分別按低、中、高比例各加入濃度適宜的對照品溶液適量，按“2.2”中供試品溶液的制備方法制備溶液，在“2.1”色譜條件下進樣，測定峰面積值，計算回收率，見表1。

表1　克拉維丁搽劑中醋酸地塞米松加樣回收率試驗結(jié)果( n=9)

2.9　含量測定

取樣品 3 批，各稱取2 g于燒杯中，按 “2.2 ”中供試品溶液的制備方法制備溶液，在“2.1”色譜條件下進樣，測定峰面積，按外標法計算醋酸地塞米松的含量，結(jié)果見表 2。

表2　克拉維丁搽劑中醋酸地塞米松含量測定結(jié)果( n=3)

3討論

3.1　超聲利于醋酸地塞米松溶出

克拉維丁搽劑是以白及溶膠為分散介質(zhì)的一種制劑，各種藥物均以粉末狀分散于白及溶膠中，制備供試液時為了充分保證涂劑中醋酸地塞米松的檢出，取樣后先加入適量甲醇在超聲儀上超聲約5 min，隨后分次加入甲醇超聲洗滌燒杯，以使醋酸地塞米松能夠從樣品中充分提取、溶解。

3.2　析出多糖減小黏附性

克拉維丁搽劑由多種成分組成，其中的白及溶膠具有一定的黏性[8]，多糖是水溶性物質(zhì)，不溶于甲醇，加入甲醇經(jīng)超聲醋酸地塞米松溶解后，多糖被析出沉淀，用微孔濾膜抽取上清液過濾時則可攔截漂移的沉淀物，減小對色譜柱的黏附性。

3.3　優(yōu)選流動相縮短保留時間

參考文獻試驗時曾方法[5-7]分別以乙腈-水(40:60)、甲醇-水(66:34)為流動相檢測，在40 min的相同保留時間內(nèi)，前者檢出率只有86.4%，后者檢出率為96.7%，兩者在后續(xù)進樣時在醋酸地塞米松出峰前均有一較大的雜質(zhì)峰出現(xiàn)，影響分離效果。后來配制甲醇-水-冰醋酸(80:20:0.5)做流動相，使用該流動相檢測時平均回收率達到99.3%，峰型對稱，無拖尾現(xiàn)象，樣品分離度良好，說明該流動相對樣品中醋酸地塞米松洗脫效果好，并能較好地克服樣品中因少許多糖的存在保留時間過長的現(xiàn)象。該方法用于克拉維丁搽劑中醋酸地塞米松的含量測定，操作便利、專屬性強，結(jié)果重現(xiàn)性好。

【參考文獻】

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[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版二部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：316.

[4]湖北省食品藥品監(jiān)督管理局.湖北省醫(yī)療機構(gòu)制劑質(zhì)量匯編(上冊)[Z].2009：295-296.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版二部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1120-1121.

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[本文編輯]顧文華