超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜法快速篩查茶葉中的204 種農(nóng)藥殘留

余 璐， 宋 偉， 呂亞寧， 趙暮雨，周芳芳， 胡艷云， 鄭 平*

（1. 安徽農(nóng)業(yè)大學茶與食品科技學院，安徽 合肥230036；2. 安徽出入境檢驗檢疫局，安徽 合肥230022；3. 食品安全分析與檢測安徽省重點實驗室，安徽 合肥230022）

茶葉中的農(nóng)藥殘留問題一直是各國關(guān)注的焦點。許多國家及國際組織均對茶葉中的農(nóng)藥殘留制定了最大殘留限量（MRLs），例如，日本肯定列表制度規(guī)定與茶葉有關(guān)的農(nóng)藥種類有276 種，歐盟有453 種，中國有28 種［1-3］。隨著人們對食品安全的日益重視，各國規(guī)定的檢測項目還在不斷增加。因此，迫切需要發(fā)展一種高通量的農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)。

目前，氣相色譜-四極桿質(zhì)譜法（GC-Q／MS）和液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-QQQ／MS）由于選擇性好、靈敏度高而廣泛應用于茶葉中的農(nóng)藥多殘留分析［4-8］。但以四極桿作為質(zhì)量分析器的GC-Q／MS 和LC-QQQ／MS 均為低分辨質(zhì)譜，當分析復雜樣品時，往往對質(zhì)荷比接近的干擾物不能有效地區(qū)分，常出現(xiàn)假陽性結(jié)果。同時在選擇離子掃描（SIM）或多反應監(jiān)測（MRM）掃描模式下，由于儀器掃描速率不高導致離子駐留時間有限，限制了一次同時掃描的化合物數(shù)量，無法真正實現(xiàn)高通量篩查。在采用LC-QQQ／MS 分析幾百種農(nóng)藥時，往往需要把化合物分成幾組進行分別檢測［9-11］，降低了分析速度。而在全掃描模式時，其靈敏度低，分辨率差，不能準確定性［12］。此外，GC-Q／MS 和LCQQQ／MS 的定性分析必須依賴標準物質(zhì)。而標準物質(zhì)的配制和使用，增加了實驗成本和分析的工作量。近年來高分辨質(zhì)譜的應用為農(nóng)藥多殘留分析提供了可靠的依據(jù)。

高分辨的飛行時間質(zhì)譜（TOF／MS）具有質(zhì)量范圍廣、分辨率和質(zhì)量精度較高、分析速度快的特點。與低分辨質(zhì)譜不同，TOF／MS 可通過全掃描獲得化合物的精確質(zhì)量數(shù)和可能的化學分子式，大大提高了復雜背景下的抗干擾能力，使檢測結(jié)果更加準確可靠。并且TOF／MS 的掃描速率高，理論上同時掃描的目標物數(shù)量無上限，可真正實現(xiàn)一次掃描幾百種農(nóng)藥的高通量檢測［13-15］。TOF／MS 還可建立特定化合物數(shù)據(jù)庫，結(jié)合樣品采集的精確質(zhì)量數(shù)、保留時間、同位素比值等信息，通過軟件進行自動檢索和分析確證，從而實現(xiàn)不使用標準品對目標化合物進行快速鑒定［16，17］。因此，TOF／MS 是對復雜樣品中痕量化合物進行定性分析的有效手段，可滿足高通量快速篩查和定量分析的需求，在農(nóng)藥多殘留檢測方面具有良好的應用前景。

本實驗以茶葉為研究對象，以固相萃取法為凈化手段，采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF／MS）儀，建立了茶葉中204 種農(nóng)藥的快速篩查方法。該方法基于UPLC-Q-TOF／MS技術(shù)建立了204 種農(nóng)藥的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫和譜圖庫，利用數(shù)據(jù)庫對質(zhì)譜檢測結(jié)果的檢索進行篩查分析，從而實現(xiàn)了無需標準品對照，一次進樣就可完成茶葉中204 種農(nóng)藥的同時篩查與確證。該方法具有快速、靈敏、準確的特點，為茶葉中農(nóng)藥的高通量快速檢測提供了可靠的分析平臺。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

Agilent 1290-6540 超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜儀（美國Agilent 公司）；ZORBAX SBC18 柱（100 mm×2.1 mm，3.5 μm）（美國Agilent公司）；勻漿機（德國IKA 公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士BUCHI 公司）；甲酸、甲醇、甲苯和乙腈均為色譜純（美國TEDIA 公司）；石墨化炭黑-N-丙基乙二胺復合固相萃取柱（Carb-PSA，6 mL，500 mg，SUPELCO 公司）；無水硫酸鈉為分析純；實驗用水均為超純水（電阻率為18.2 MΩ·cm）。

204 種農(nóng)藥標準品：純度≥98%，購自德國Dr.Ehrenstorfer 公司。

標準溶液的配制：i）農(nóng)藥單標準溶液：準確稱取各農(nóng)藥標準品10 mg（精確至0.01 mg），分別置于10 mL 的棕色容量瓶中，根據(jù)其溶解性選擇甲醇、乙腈、丙酮等溶劑［2，13，15］溶解并定容至刻度，于4 ℃避光保存。ii）農(nóng)藥混合標準溶液的配制：按照每種農(nóng)藥的化學性質(zhì)和保留時間把農(nóng)藥分成A、B、C、D 4組。根據(jù)單標準溶液的濃度，準確量取適量單標準溶液至100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，于4℃避光保存。

茶葉樣品為實驗室日常送檢樣品。

1.2 樣品前處理

稱取1 g（精確至0.01 g）茶葉于50 mL 離心管中，加入15 mL 乙腈，13 500 r／min 均質(zhì)提取1 min，4 200 r／min 離心5 min，吸取上層清液于雞心瓶中。殘渣用15 mL 乙腈重復提取一次，離心。合并上清液，40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL 左右，待凈化。

Carb-PSA 柱中加入約2 cm 高的無水硫酸鈉，用4 mL 乙腈-甲苯（3 ∶1，v／v）預洗柱，用下面連接的雞心瓶收集流出液，將流出液轉(zhuǎn)移至Carb-PSA柱，并用乙腈-甲苯（3 ∶1，v／v）洗滌雞心瓶3 次（每次2 mL），將洗滌液也移入柱中；在柱上裝上50 mL貯液器，用25 mL 乙腈-甲苯（3 ∶1，v／v）淋洗柱，收集所有流出液于雞心瓶中，在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL，用氮氣吹干，用1.5 mL 乙腈-0.1% 甲酸水（2 ∶8，v／v）定容液溶解，過0.2 μm 濾膜，濾液供儀器測定。

1.3 UPLC-Q-TOF／MS 條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18柱；流動相：A 相為5 mmol／L 乙酸銨-0.1% （v／v）甲酸水溶液，B 相為乙腈。梯度洗脫程序：0 ～3.00 min，1% B ～30% B；3.00～6.00 min，30% B ～40% B；6.00 ～9.00 min，40% B；9.00 ～15.00 min，40% B ～60% B；15.00 ～19.00 min，60% B ～90% B；19.00 ～23.00 min，90% B；23.00～23.01 min，90% B ～1% B，保持4 min。流速：0.4 mL／min；柱溫：40 ℃；進樣量：10 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧電離（ESI）源，正離子模式；干燥氣溫度：325 ℃；干燥氣流速：10 L／min；霧化器壓力：276 kPa；鞘流氣溫度：325 ℃；鞘流氣流速：11 L／min；毛細管電壓：4 000 V；掃描方式：正離子全掃描；全掃描范圍：m／z 50 ～1 600；碎裂電壓：140 V。

UPLC-Q-TOF／MS 配置了雙噴霧器電噴霧源，可以連續(xù)導入?yún)⒈热芤簩x器質(zhì)量軸進行實時校正。參比溶液中含嘌呤（C5H4N4，其離子精確相對分子質(zhì)量為121.050 873 0）和HP-0921 （C18H18O6N3P3F24，其離子精確相對分子質(zhì)量為922.009 798），能夠?qū)崟r對測定的目標物進行質(zhì)量數(shù)校正，給出離子的準確質(zhì)量。

1.4 數(shù)據(jù)庫的建立

1.4.1 一級精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫的建立（TOF／MS 模式）

本實驗在上述色譜分離條件下對204 種農(nóng)藥的標準溶液進行分析，獲得204 種農(nóng)藥的保留時間、精確相對分子質(zhì)量、母離子以及離子化形式。通過在系統(tǒng)自帶軟件中輸入每種農(nóng)藥的名稱、分子式、精確相對分子質(zhì)量和保留時間，建立了204 種農(nóng)藥的一級精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫。

1.4.2 二級譜圖庫的建立（Q-TOF／MS 模式）

一級精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫建立完成后，在不同碰撞能量下對204 種農(nóng)藥進行再次測定，采集二級譜圖庫所需數(shù)據(jù)，然后通過PCDL 軟件，建立204 種農(nóng)藥的二級譜圖庫，包括母離子、保留時間、不同碰撞能量下的二級質(zhì)譜圖等信息。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取方法的選擇

目前，茶葉中農(nóng)殘檢測常采用乙腈作為提取試劑。經(jīng)研究證明，乙腈極性較大，穿透能力強，能提取范圍較寬、種類較多的農(nóng)藥樣品。且相對其他試劑而言，乙腈提取的色素等雜質(zhì)較少［4，9，18］。因此，本實驗選用乙腈作為提取試劑。

針對茶葉樣品前處理，目前日本官方分析方法以及大部分文獻［9，19-22］報道采用茶葉加水浸泡，然后采用有機溶劑萃取的方式。而也有少量文獻［5，11，23］報道采用直接加入有機試劑均質(zhì)提取的方式。因此本實驗對這兩種提取方式進行了考察。結(jié)果表明，加水浸泡后，農(nóng)藥的提取效率并沒有得到顯著改善，提取回收率為51.03% ～153.26%；且隨著加水浸泡，茶葉中的一些水溶性色素或水溶性雜質(zhì)（如茶多酚、茶堿等）也被提取出來，使基質(zhì)干擾加大，導致噻蟲啉、啶蟲脒、抑霉唑、雙酰草胺、抗蚜威、萎銹靈等農(nóng)藥的響應普遍偏低，降低了碎片離子的匹配程度，從而在篩查過程中出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。本實驗采用不加水直接用乙腈提取樣品。另外，本實驗對均質(zhì)、手動渦旋和振蕩器振蕩3 種提取方式進行了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，均質(zhì)的提取效率最高，對204種農(nóng)藥的提取回收率為64.30% ～122.47%，基質(zhì)干擾相對較?。惶崛r間最短，明顯優(yōu)于其他方法；且對204 種農(nóng)藥均能準確定性。這是因為高速均質(zhì)可以破壞樣品組織，使提取試劑與目標物充分接觸，從而提高萃取效率。綜合考慮各種因素，本實驗采用乙腈均質(zhì)提取的方法。

2.2 凈化方法的選擇

茶葉基體復雜，含有大量的色素、生物堿、有機酸等，不僅會干擾目標物的分析，而且會對色譜柱和質(zhì)譜造成致命的損害，故需要有效的凈化方法去除雜質(zhì)干擾。本實驗采用乙腈-甲苯（3 ∶1，v／v）作為洗脫液，比較了常用于農(nóng)殘檢測的4 種固相萃取小柱：Cleanert TPT 柱、Carb-PSA 柱、Florisil 柱和Envi-Carb 柱。以基質(zhì)效應較大的7 種農(nóng)藥為例，測試結(jié)果見圖1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)lorisil 柱或Envi-Carb 柱的回收率高于Carb-PSA 柱與Cleanert TPT柱。Carb-PSA 柱與Cleanert TPT 柱的回收率結(jié)果較為相近，其204 種農(nóng)藥的加標回收率分別在65.2% ～119.5% 與70.3% ～116.4% 范圍內(nèi)。從凈化效果看，F(xiàn)lorisil 柱去除色素的能力較差；Envi-Carb 柱雖可去除大部分色素，但去除其他干擾物的能力一般，凈化效果較差。Carb-PSA 柱是雙NH2結(jié)構(gòu)，具有較高的離子交換容量，能夠有效去除茶葉中如色素、有機酸等極性雜質(zhì)，樣品提取液譜圖上的雜質(zhì)峰較少，基質(zhì)效應更小。綜合來看，雖然Florisil 柱或Envi-Carb 柱的回收率較高，但大量雜質(zhì)也同時隨之洗脫下來，凈化效果較差。而Carb-PSA柱與Cleanert TPT 柱的凈化效果較好，且204 種農(nóng)藥的回收率均滿足實驗要求。另外，考慮到Carb-PSA 柱的使用成本較Cleanert TPT 柱要低，故實驗采用Carb-PSA 固相萃取小柱凈化。

圖1 7 種農(nóng)藥在不同固相萃取柱上的回收率對比Fig.1 Recoveries of the seven pesticides on different SPE columns

通過洗脫曲線對洗脫溶劑的用量進行了優(yōu)化。在空白樣品中加入50 μg／kg 混合標準品后進行洗脫，比較了5、10、15、20、25、30 mL 洗脫溶劑對204種農(nóng)藥回收率的影響，部分農(nóng)藥的洗脫曲線見圖2。結(jié)果表明，當洗脫溶劑體積≤10 mL 時，大部分農(nóng)藥的回收率隨著洗脫溶劑體積的增加而增大。當洗脫溶劑體積≥15 mL 時，只有吡蚜酮（pymetrozine）和嘧螨醚（pyrimidifen）的回收率繼續(xù)增加，其余農(nóng)藥的回收率均趨于平穩(wěn)。洗脫溶劑體積為25 mL 時，204 種農(nóng)藥的回收率為70.34% ～118.38%，且全部趨于平穩(wěn)，故選擇洗脫溶劑的用量為25 mL。

2.3 定性分析

圖2 洗脫溶劑用量對部分農(nóng)藥回收率的影響Fig.2 Effect of eluent volume on the recoveries of a part of pesticides

在實際樣品分析中，樣品先進行一級全掃描測定，測定結(jié)果通過已建立的一級精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫進行自動檢索，軟件根據(jù)實測離子與數(shù)據(jù)庫中的精確質(zhì)量偏差、保留時間、同位素分布和同位素比例4 個因素的匹配程度進行打分，經(jīng)優(yōu)化，將檢索得分≥70的農(nóng)藥確定為疑似農(nóng)藥。以茶葉空白樣品中添加10 μg／kg 噻嗪酮為例，圖3a 為噻嗪酮的一級提取離子流色譜圖，圖3b 為一級質(zhì)譜圖，圖3c 為軟件自動檢索后噻嗪酮的一級匹配結(jié)果。由圖3c 可知，噻嗪酮的質(zhì)量偏差均小于5×10-6（5 ppm），滿足歐盟的定性要求，可以作為定性依據(jù)。且保留時間（圖3a）、同位素比例及其分布（圖3b）與數(shù)據(jù)庫中的理論值也均匹配良好，一級檢索得分為97.50，從而確定噻嗪酮為疑似農(nóng)藥。由此可見，本實驗可以根據(jù)精確質(zhì)量偏差、保留時間、同位素分布和同位素比例對樣品中的204 種農(nóng)藥進行快速篩查。

圖3 噻嗪酮的（a）提取離子色譜圖、（b）一級質(zhì)譜圖和（c）一級匹配結(jié)果Fig.3 （a）extracted ion chromatogram，（b）MS spectrum and （c）MS matched results of buprofezin

篩查出的疑似農(nóng)藥還需利用二級質(zhì)譜的碎片離子進行進一步確證。樣品經(jīng)二次測定后，將樣品的碎片離子信息與譜圖庫中碎片離子信息進行匹配，給出鏡像對比結(jié)果。經(jīng)優(yōu)化，二級檢索得分≥60 的農(nóng)藥確定為目標農(nóng)藥。圖4 為噻嗪酮的二級質(zhì)譜鏡像對比結(jié)果，圖4 中可以明顯看到主要的特征碎片與譜圖庫均匹配良好，噻嗪酮的二級得分為94.93，故確定樣品中含有噻嗪酮。參照歐盟2002／657／EC［24］規(guī)定：當使用高分辨質(zhì)譜時，每個離子可獲得2 個定性位點。而UPLC-Q-TOF／MS 通過全掃描獲得一級母離子的精確質(zhì)量數(shù)和二級碎片離子信息，噻嗪酮可獲得22 個定性位點，完全滿足定性要求（限用化合物確認需最少3 個定性位點），可實現(xiàn)在無對照標準品的情況下進行篩查與確證。此外，噻嗪酮通過UPLC-Q-TOF／MS 獲得的定性位點遠遠高于LC-MS／MS 的4 個位點，從而大大降低了出現(xiàn)假陽性結(jié)果的概率，提高了定性結(jié)果的可信度。

圖4 茶葉樣品中噻嗪酮的二級質(zhì)譜鏡像結(jié)果Fig.4 MS2 spectral difference results of buprofezin in a tea sample

為了考察本實驗所建立的篩查方法的可靠性，采用已建立的一級精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫和二級譜圖庫對添加了204 種農(nóng)藥的茶葉樣品進行自動檢索。結(jié)果見表1，204 種農(nóng)藥均與一級精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫檢索匹配良好，質(zhì)量偏差均小于5 ppm，檢索得分均高于70。而二級譜圖庫檢索得分高于60 的占91.7% ；少部分農(nóng)藥得分低于60，這可能是由于添加的農(nóng)藥濃度較低或基質(zhì)導致有相近質(zhì)量數(shù)的干擾造成的，但其譜圖中主要的特征離子均匹配良好。在實際樣品分析中，這種情況會經(jīng)常出現(xiàn)，一般通過扣除背景來減少樣品基質(zhì)對定性匹配的干擾。在采用該方法對基質(zhì)加標樣品的分析中，二級檢索得分低于60 的農(nóng)藥，扣除背景后得分均高于60，從而確定為目標農(nóng)藥。

由此可見，本實驗建立的篩查方法是準確可靠的，能夠在無對照標準品的情況下完成茶葉中204種農(nóng)藥的篩查與確證。

表1 204 種農(nóng)藥的分子式、保留時間、精確質(zhì)量數(shù)、質(zhì)量數(shù)偏差和檢索得分Table 1 Formulae，retention times，accurate masses，mass errors and automated retrieval scores of the 204 pesticides

表1 （續(xù)）Table 1 （Continued）

表1 （續(xù)）Table 1 （Continued）

表1 （續(xù)）Table 1 （Continued）

表1 （續(xù)）Table 1 （Continued）

2.4 基質(zhì)效應的評價

基質(zhì)效應是指樣品中除了目標分析物以外的其他成分對待測物測定值的影響，也就是指基質(zhì)對分析方法準確性的干擾。本文分別用基質(zhì)空白液和溶劑配制了一系列不同質(zhì)量濃度（5、10、20、50、100 μg／L）的混合標準溶液，以峰面積對應的質(zhì)量濃度分別做標準曲線，然后比較這兩條標準曲線斜率的差異，從而判斷基質(zhì)效應的強弱。計算公式如下：基質(zhì)效應（ME）＝［（基質(zhì)匹配標準曲線的斜率／溶劑標準曲線的斜率）-1］×100%。結(jié)果如圖5 所示，茶葉中只有3 種農(nóng)藥出現(xiàn)了基質(zhì)增強效應，其余201種農(nóng)藥的ME 值均為負，所以為基質(zhì)抑制效應。本實驗茶葉中204 種農(nóng)藥中有114 種農(nóng)藥表現(xiàn)了中等基質(zhì)效應，74 種農(nóng)藥表現(xiàn)強基質(zhì)效應。中等和強基質(zhì)效應占總數(shù)的92.16%，由此可見茶葉具有較強的基質(zhì)效應。因此，分析目標化合物時選用空白茶葉配制的基質(zhì)標準曲線進行定量更為準確。

圖5 204 種農(nóng)藥在茶葉中的農(nóng)藥基質(zhì)效應分布Fig.5 Distribution of matrix effects （ME）of the 204 pesticides in tea

目前，基質(zhì)效應的產(chǎn)生機制還不是十分清楚，在液相色譜-質(zhì)譜分析中，一般認為基質(zhì)效應是由質(zhì)譜檢測器的離子化過程引起的。在形成帶電噴霧滴時，非揮發(fā)性的基質(zhì)組分與分析物離子競爭產(chǎn)生，非揮發(fā)性基質(zhì)組分將霧滴吸在一起，阻止其分裂成更小的微滴［25］。通常情況下使用電噴霧離子源（EIS）作為電離源時，更容易出現(xiàn)離子化抑制現(xiàn)象，最終導致基質(zhì)抑制效應。此外，還有很多其他因素也會影響基質(zhì)效應，如樣品基質(zhì)的種類和濃度，待測物的化學結(jié)構(gòu)和性質(zhì)等，待測物在樣品中的濃度，檢測器及接口類型等［26］。

2.5 方法的線性關(guān)系、定量限、回收率和精密度

將204 種農(nóng)藥的混合標準溶液用空白樣品提取液稀釋配制成5、10、20、50、100 μg／kg 的系列基質(zhì)標準溶液，在建立的分析條件下對其進行測定，以峰面積（y）對質(zhì)量濃度（x）做標準曲線。由表2 可以看出，204 種農(nóng)藥均線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99。

表2 茶葉中204 種農(nóng)藥的相關(guān)系數(shù)（r2）、添加回收率、相對標準偏差和定量限（n＝6）Table 2 Correlation coefficients （R2），spiked recoveries，RSDs and LOQs of the 204 pesticides in tea （n＝6）

表2 （續(xù)）Table 2 （Continued）

表2 （續(xù)）Table 2 （Continued）

表2 （續(xù)）Table 2 （Continued）

歐盟、日本、國際法典委員會（CAC）規(guī)定茶葉中農(nóng)藥的MRLs 分別為0.01 ～30.0、0.01 ～30.0、0.10 ～50.0 mg／kg，沒有明確規(guī)定的農(nóng)藥殘留限量均采用0.01 mg／kg 的一律標準［10］。按10 倍信噪比計算定量限，茶葉中204 種農(nóng)藥的定量限均小于10 μg／kg（見表2），滿足各國農(nóng)藥殘留限量標準的要求。以嘧菌環(huán)胺（cyprodinil）、苯線磷亞砜（fenamiphos sulfoxide）、噻唑磷（fosthiazate）、稻瘟靈（isoprothiolane）4 種農(nóng)藥為例，其在接近定量限的加標茶葉樣品（添加水平為1 μg／kg）中的提取離子流圖見圖6。向茶葉空白樣品中添加204 種農(nóng)藥的混合標準溶液，添加水平分別為10、20、50 μg／kg，然后按照本實驗方法進行提取、凈化和檢測，每個加標水平重復6 次測定，204 種農(nóng)藥的平均回收率為68.1% ～117.2%，相對標準偏差（RSD）為3.1% ～18.9% （見表2）。

圖6 茶葉空白樣品中添加水平為1 μg／kg 的嘧菌環(huán)胺、苯線磷亞砜、噻唑磷和稻瘟靈的提取離子流圖Fig.6 Extracted ion chromatograms of cyprodinil，fenamiphos sulfoxide，fosthiazate and isoprothiolane spiked in blank tea at 1 μg／kg

2.6 實際樣品的檢測

應用本文所建立的篩查方法對日常送檢的10份茶葉樣品進行了204 種農(nóng)藥殘留的快速篩查檢測，檢測結(jié)果見表3。結(jié)果表明，其中的8 份茶葉樣品共檢出15 種農(nóng)藥。8 份樣品中檢出農(nóng)藥的一級檢索得分均高于70，二級檢索得分高于60 的農(nóng)藥占89.7%。低于60 的農(nóng)藥，經(jīng)背景扣除后，二級得分均提高到60 以上，故達到了確證要求。例如，樣品1 中避蚊胺的二級檢索得分為49.11，其扣除背景前的鏡像對比結(jié)果見圖7a，背景中主要的特征離子均匹配較好，但由于樣品中含有m／z 110.071 3、138.065 9 和195.087 2 共3 個干擾離子，使匹配程度降低，二級檢索得分較低。背景扣除后（見圖7b），3 個干擾離子被成功扣除，二級檢索得分提高為87.22，從而確定含有避蚊胺。為了驗證結(jié)果，取4 份陽性樣品，用GB／T 23205-2008 方法進行再次檢測，測得結(jié)果與本方法結(jié)果基本一致，證明了本方法的有效性。

圖7 茶葉中避蚊胺（a）扣除背景前和（b）扣除背景后碎片離子的鏡像對比結(jié)果Fig.7 Comparison of spectral difference results of （a）before and （b）after background subtraction of diethyltoluamide in a tea sample

從表3 可以看出，噻嗪酮、啶蟲脒和三唑磷的檢出率較高，8 份樣品按GB 2763-2014《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》衡量，所有檢出農(nóng)藥均未超標；按歐盟限量標準衡量，只有樣品6 中三唑磷的檢出含量為54.07 μk／kg，超出了歐盟規(guī)定的最大殘留限量，其余農(nóng)藥均未超標。由此可知，雖然茶葉樣品中農(nóng)藥的檢出率較高，但大部分農(nóng)藥的殘留水平偏低，滿足我國限量要求。

表3 10 份實際樣品的測試結(jié)果Table 3 Detected results of ten real samples

3 結(jié)論

本實驗建立了茶葉中204 種農(nóng)藥的UPLC-QTOF／MS 快速篩查方法。利用目標化合物特征離子的精確質(zhì)量數(shù)、保留時間、同位素比例等信息，結(jié)合數(shù)據(jù)庫的檢索，實現(xiàn)了無需對照標準品同時篩查和確認茶葉中204 種農(nóng)藥。204 種農(nóng)藥在5 ～100 μg／kg 范圍線性良好，平均回收率為68.1% ～117.2%。該方法快速、準確，分析通量高，可以為茶葉中多農(nóng)殘的快速篩查和質(zhì)量控制提供重要的方法依據(jù)。

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