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    黃芪多糖組分-A1對豚鼠自身免疫性腦脊髓炎的抑制作用

    2015-12-25 03:36:38郭喜霞,賈梅,齊恒田
    中國老年學雜志 2015年1期

    黃芪多糖組分-A1對豚鼠自身免疫性腦脊髓炎的抑制作用

    郭喜霞賈梅1齊恒田2尹雅玲3潘國聘4趙繁榮4李鵬4

    (新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院,河南新鄉(xiāng)453003)

    摘要〔〕目的探討黃芪多糖組分-A1(APS-A1)是對自身免疫性腦脊髓炎的抑制作用。方法用2.5、5、10 mg/kg 的APS-A1對自身免疫性腦脊髓炎豚鼠模型灌胃28 d。檢測神經(jīng)功能評分,血清含量,血漿白細胞介素(IL)-1、IL-2、IL-6、IL-10的含量及血漿神經(jīng)肽Y(NPY)、阿片受體β-內(nèi)啡肽(β-EP)的含量,并對神經(jīng)元進行形態(tài)學觀察。結(jié)果APS-A1劑量依賴性地抑制自身免疫性腦脊髓炎豚鼠神經(jīng)功能評分下降、生化指標、神經(jīng)遞質(zhì)及形態(tài)學等各項指標的變化(P<0.05)。結(jié)論APS-A1具有抑制自身免疫性腦脊髓炎的作用。

    關(guān)鍵詞〔〕黃芪多糖;自身免疫;腦脊髓炎

    中圖分類號〔〕R733.7〔

    基金項目:河南省科技廳科技攻關(guān)項目(132102310247)

    通訊作者:李鵬(1980-),男,副教授,碩士,主要從事天然藥物活性成分研究。

    1濮陽市衛(wèi)生學校2新鄉(xiāng)醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院

    3新鄉(xiāng)醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院4新鄉(xiāng)醫(yī)學院藥學院

    第一作者:郭喜霞(1982-),女,住院醫(yī)師,碩士,主要從事兒科學研究。

    1材料與方法

    1.1實驗動物英國種短毛豚鼠,雄性,清潔級,4周齡,體質(zhì)量(200±20)g(河南省實驗動物中心提供,許可證號為SYXK-豫-005-0012)。動物房溫度控制范圍為18℃~22℃,環(huán)境潔凈度為500 000~8 000級,相對濕度控制范圍為40%~50%,換氣次數(shù)控制范圍為20次/h,氣流速度控制范圍為0.15~0.2 m/s,多級定向控制空氣壓差控制范圍為10~15%,自動定時器控制光照周期(7:30~19:00為光照期,19:00~07:30為黑暗期),常規(guī)豚鼠飼料(河南省實驗動物中心提供,許可證號為SYXK-豫-005-0012)及二次凈化水飼養(yǎng)。

    1.2藥品APS-A1(實驗室自備分離、純化);醋酸潑尼松(武漢述元科技發(fā)展有限公司)。

    1.3儀器及試劑Synergy H4全功能酶標儀(美國伯騰儀器有限公司); FACScan 型流式細胞儀(美國 Becton-Dickinson公司);IL-1、IL-2、IL-6、IL-10 ELISA 試劑盒(美國R-D公司);神經(jīng)肽Y(NPY) 放射免疫試劑盒(天津杰瑞公司);阿片受體β-內(nèi)啡肽(β-EP)放射免疫試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司);轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、一氧化氮合酶(NOS)、CD3免疫組化試劑盒(長沙力康生物有限公司)。

    1.4方法

    1.4.1EAE豚鼠模型制備豚鼠氯胺酮麻醉(5 ml/kg,腹腔注射),在無菌操作下,打開腹腔、胸腔,剪斷兩側(cè)肋骨,用鈍頭針從心尖略偏左進針至主動脈,生理鹽水灌注600 ml,4%多聚甲醛灌注固定。頭部沿枕骨大孔處剪斷,剝?nèi)∧X和脊髓,去掉脊膜與馬尾,稱重,按照1∶3的質(zhì)量比加入生理鹽水并制備成25%的豚鼠全脊髓勻漿。豚鼠全脊髓勻漿和完全弗氏佐劑以2∶1 比例充分乳化制備成穩(wěn)定的豚鼠全脊髓勻漿抗原乳劑待用。豚鼠氯胺酮麻醉(5 ml/kg,腹腔注射),將豚鼠全脊髓勻漿抗原乳(1 ml/kg)皮下注入豚鼠兩個后足墊皮內(nèi),同時左后肢足背皮下注射百日咳原漿液(2 ml/kg),誘導(dǎo) EAE 模型。免疫后每籠6只常規(guī)飼養(yǎng)。

    1.4.2分組及處理豚鼠隨機分5組,6只/組。①正常對照組:后足墊皮內(nèi)注射等量生理鹽水(1 ml/kg);②EAE模型組:按照本實驗操作規(guī)定,注射豚鼠全脊髓勻漿抗原乳劑(1 ml/kg);③ 醋酸潑尼松組:注射豚鼠全脊髓勻漿抗原乳劑(1 ml/kg)后當日灌胃醋酸潑尼松(2 ml·kg-1·d-1);④ APS-A1低濃度組:注射豚鼠全脊髓勻漿抗原乳劑(1 ml/kg)后當日灌胃APS-A1(2.5 ml·kg-1·d-1);⑤ APS-A1中濃度組:注射豚鼠全脊髓勻漿抗原乳劑(1 ml/kg)后當日灌胃APS-A1(5 ml·kg-1·d-1);⑥ APS-A1高濃度組:注射豚鼠全脊髓勻漿抗原乳劑(1 ml/kg)后當日灌胃APS-A1(10 ml·kg-1·d-1)。第28天乙醚麻醉,指標檢測。

    1.4.3EAE神經(jīng)功能評分從建模當天起觀察每日發(fā)病情況,測體重1次/d,記錄發(fā)病潛伏期、癥狀持續(xù)時間、發(fā)病率及病死率,并進行神經(jīng)功能評分。EAE神經(jīng)功能評分:0分:無明顯異常;1分:尾部張力障礙;2分:后肢中度無力或麻痹;3分:后肢癱瘓,尿便失禁;4分:部分或完全前肢癱瘓;5分:瀕死或死亡。每天進行3次神經(jīng)功能評分,取均值作為每只豚鼠每天的神經(jīng)功能評分。

    1.4.5酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測IL-1、IL-2、IL-6、IL-10按照ELISA試劑盒操作,450 nm單波長下,酶標儀讀取標準管及測試管OD值。

    1.4.6放射免疫法檢測血漿NPY、β-EP的含量按照放射免疫試劑盒說明書要求操作,4℃冰箱過夜24 h,加入分離劑并充分混勻,室溫放置20 min,4℃恒溫3 000 r/min 離心20 min,棄去上清液。在γ計數(shù)儀上檢測血清NPY、β-EP的含量。

    1.4.7免疫組化檢測腦組織TGF-β、MMP-2、NOS、CD3的含量按照免疫組化試劑盒說明書要求操作。200倍光鏡下,每張切片隨機選取5個視野,每個視野計數(shù)50個細胞,計數(shù)胞質(zhì)呈棕黃色的陽性細胞。

    1.4.8光鏡下觀察神經(jīng)元形態(tài)豚鼠免疫后第28天乙醚麻醉,取出豚鼠腦,多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片(3~4 μm),HE染色,光學顯微鏡下觀察。

    1.4.9電鏡下觀察神經(jīng)元形態(tài)豚鼠免疫后第28天乙醚麻醉,取出豚鼠腦3~4塊,每塊1 mm大小,制作電鏡切片,透射電鏡下觀察。

    1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析及SNK-q多重比較分析。

    2結(jié)果

    2.1EAE豚鼠神經(jīng)功能評分EAE組豚鼠神經(jīng)功能評分最高為2.5分,豚鼠相繼出現(xiàn)進食減少、蜷縮少動、精神萎靡、皮毛干枯、大小便失禁、四肢無力及進行性全身癱瘓,部分豚鼠死亡;醋酸潑尼松組神經(jīng)功能評分最高為0.45分,與同日EAE模型組比較有明顯差異(P<0.05); APS-A1高濃度組神經(jīng)功能評分最高為0.50分,與同日EAE模型組比較有明顯差異(P<0.05)。見圖1。

    2.3血漿IL-1、IL-2、IL-6、IL-10的含量EAE模型組外周血IL-1、IL-2、IL-6、IL-10含量明顯升高;與EAE模型組比較,醋酸潑尼松與APS-A1高濃度組的IL-1、IL-2、IL-6、IL-10均有明顯差異(P<0.05)。見表2。

    2.4血漿神經(jīng)遞質(zhì)NPY、β-EP的含量EAE模型組外周血神經(jīng)遞質(zhì)NPY、β-EP的含量明顯升高;醋酸潑尼松組與APS-A1高濃度組明顯抑制EAE豚鼠NPY、β-EP升高,與EAE模型組比較有明顯差異(P<0.05)。見表2。

    組別CD+4細胞數(shù)CD+8細胞數(shù)CD+4/CD+8正常對照組43.65±1.682)3)25.76±1.562)3)1.66±0.272)3)EAE模型組53.76±2.651)18.65±0.871)2.86±0.361)醋酸潑尼松組45.54±1.561)2)3)24.64±2.061)2)3)1.97±0.231)2)3)APS-A1低濃度組51.44±2.041)3)18.64±2.141)3)2.86±0.291)3)APS-A1中濃度組44.46±2.111)2)23.33±1.751)2)2.44±0.261)2)APS-A1高濃度組46.94±1.441)2)3)25.89±1.682)3)1.95±0.361)2)3)

    與正常對照組比較:1)P<0.05;與EAE模型組比較:2)P<0.05;與APS-A1中濃度組比較:3)P<0.05,下表同

    2.5腦組織TGF-β、MMP-2、NOS、CD3 含量EAE模型組豚鼠腦組織TGF-β降低、MMP-2升高、NOS升高、CD3升高;醋酸潑尼松組與PAS-A1高濃度組明顯抑制豚鼠腦組織TGF-β降低、MMP-2升高、NOS升高、CD3升高,與EAE模型組比較有明顯差異(P<0.05)。見表3。

    組別IL-1IL-2IL-6IL-10NPYβ-EP正常對照組1.78±0.352)3)6.65±1.062)3)3.76±0.352)3)633.76±32.652)3)398.34±21.732)3)316.78±23.842)3)EAE模型組4.97±0.671)3)12.76±1.671)3)7.84±1.071)3)1229.54±98.661)3)585.65±56.741)3)178.98±16.491)3)醋酸潑尼松組7.77±0.981)2)3)9.56±1.031)2)3)4.57±0.881)2)3)1045.77±87.761)2)3)417.69±23.681)2)3)329.15±30.221)2)3)APS-A1低濃度組5.98±0.641)3)9.36±0.851)3)7.87±0.651)3)1165.33±65.651)3)521.27±35.991)3)198.45±21.971)3)APS-A1中濃度組5.78±0.431)2)9.76±1.361)2)5.65±0.641)2)1176.69±89.951)2)497.89±29.681)245.58±32.721)APS-A1高濃度組8.76±0.841)2)3)11.55±1.271)2)3)4.84±0.961)2)3)1246.98±112.051)2)3)422.16±32.781)2)3)347.24±33.261)2)3)

    組別TGF-βMMP-2NOSCD3正常對照組20.65±3.332)3)6.76±1.472)3)13.65±1.232)3)12.60±1.292)3)EAE模型組12.67±0.691)3)32.73±2.731)3)36.63±4.051)3)36.56±5.451)3)醋酸潑尼松組17.87±0.831)2)3)7.17±1.471)2)3)16.55±2.551)2)3)12.37±1.751)2)3)APS-A1低濃度組14.65±0.641)3)25.77±4.721)3)32.83±4.661)3)32.35±3.981)3)APS-A1中濃度組15.58±0.491)15.54±3.901)22.40±3.651)25.64±2.671)APS-A1高濃度組17.56±0.641)2)3)10.53±1.971)2)3)16.96±1.961)2)3)14.96±1.761)2)3)

    圖1 各實驗組EAE神經(jīng)功能評分

    2.6光鏡下神經(jīng)元形態(tài)EAE豚鼠大腦皮層神經(jīng)元腫脹,并有炎細胞浸潤,部分神經(jīng)元胞體變小或呈三角形,基質(zhì)疏松伴明顯微空泡形成;醋酸潑尼松組和高濃度的APS-A1組明顯抑制神經(jīng)元凋亡現(xiàn)象。見圖2。

    A.正常對照組;B.EAE模型組;C.醋酸潑尼松組;D.APS-A1低濃度組;E.APS-A1中濃度組;F.APS-A1高濃度組 圖2 豚鼠大腦神經(jīng)元光鏡圖像(HE,400×)

    2.7電鏡下神經(jīng)元形態(tài)EAE豚鼠大腦皮層神經(jīng)元皺縮、膜結(jié)構(gòu)不清;胞核固縮,染色質(zhì)聚集成團、異染色質(zhì)增多,高爾基體增多,線粒體腫脹,嵴融合并出現(xiàn)空泡變性。醋酸潑尼松和高濃度的APS-A1組明顯抑制神經(jīng)元凋亡現(xiàn)象。見圖3。

    A.正常對照組;B.EAE模型組;C.醋酸潑尼松組;D.APS-A1低濃度組;E.APS-A1中濃度組;F.APS-A1高濃度組 圖3 豚鼠大腦神經(jīng)元電鏡圖像(8 000×)

    3討論

    EAE在兒童中的發(fā)病幾率較高,目前,糖皮質(zhì)激素是治療EAE的常用藥物,具有抑制免疫應(yīng)答、抗炎、抗毒、抗休克作用〔5〕。本研究結(jié)果顯示,APS-A1(10 g·kg-1·d-1)能夠推遲EAE發(fā)病時間,抑制EAE豚鼠神經(jīng)功能下降,與醋酸潑尼松(2 g·kg-1·d-1)效果接近。

    TGF-β對細胞的生長、分化和免疫功能都有重要的調(diào)節(jié)作用?;罨娜薓MP-2直接攻擊血管基底膜,引起炎細胞浸潤。NOS參與調(diào)節(jié)NO生成,NO是先天性免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)性效應(yīng)分子,作為一種信息傳遞物質(zhì)維持正常的生理功能。CD3僅存在于T細胞表面,參與T細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。本結(jié)果顯示,APS-A1(10 g·kg-1·d-1)抑制EAE豚鼠TGF-β、MMP-2、NOS、CD3的變化。APS-A1的作用與醋酸潑尼松類似,治療EAE前景較好,其具體的作用機制有待進一步研究。

    4參考文獻

    1Kwon HJ,Park YD.Determination of astragalin and astragaloside content in Radix Astragali using high-performance liquid chromatography coupled with pulsed amperometric detection〔J〕.J Chromatogr A,2011;12(16):1201-9.

    2Kim MS,Kim SH.Inhibitory effect of astragalin on expression of lipopolysaccharide -induced inflammatory mediators through NF-κB in macrophages〔J〕.Arch Pharm Res,2011;34(12):2101-7.

    3Kim GE,Kang HK,Seo ES,etal.Glucosylation of the flavonoid,astragalin by Leuconostoc mesenteroides B-512FMCM dextransucrase acceptor reactions and characterization of the products〔J〕.Enzyme Microb Technol,2012;50(1):50-6.

    5Barnes D,Hughes RA,Morris RW,etal.Randomised trial of oral and intravenous methylprednisolone in acute relapses of multiple sclerosis〔J〕. Lancet,1997;349 (9056):902-6.

    6Maimone D,Reder AT.Soluble CD8 levels in the CSF and serum of patient 25 with multiple sclerosis〔J〕.Neurology,1999;41(6):851-4.

    7Panerai AE,Sacerdote P.Beta-endorphin in the immune system:a role at last〔J〕? Immunol Today,1997;18(7):317-9.

    〔2012-12-20修回〕

    (編輯安冉冉/曹夢園)

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