• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    堿木素焦油的抑菌活性及機(jī)理

    2015-12-24 07:38:10初雷霞江金茂趙永坡許文耀江茂生
    關(guān)鍵詞:醛酸木素焦油

    初雷霞,江金茂,趙永坡,許文耀,江茂生

    (1.福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,福建福州350002;2.福建南紙股份有限公司,福建南平353000;3.福建農(nóng)林大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院,福建福州350002)

    從天然產(chǎn)物尤其是植物中開發(fā)高效、低毒、環(huán)境兼容性好的天然產(chǎn)物殺菌劑是近幾年農(nóng)藥研究的熱點(diǎn)[1],已得到的有抑菌作用的活性物質(zhì)如萜類化合物、皂苷類、酚類、生物堿及多肽類物質(zhì)等[2].但有關(guān)天然產(chǎn)物殺菌機(jī)理的報(bào)道較少[3].

    課題組前期對(duì)竹材進(jìn)行熱解獲得高得率的竹焦油,并且發(fā)現(xiàn)竹焦油對(duì)植物病原菌物和病原細(xì)菌皆有很好的抑制活性[4].鑒于堿木素是造紙工業(yè)的主要副產(chǎn)物,其中僅含少量纖維素和半纖維素,價(jià)廉且來(lái)源極為廣泛,本文以堿木素為原料,熱解制備出液化產(chǎn)物堿木素焦油,研究其對(duì)植物病原菌物的抑制效果和抑制敏感菌的作用機(jī)理,為將堿木素焦油工業(yè)化開發(fā)為一種新型天然產(chǎn)物殺菌劑奠定基礎(chǔ),也為天然產(chǎn)物殺菌劑的作用機(jī)理研究提供參考.

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    將制漿廢液中的堿木素酸沉、烘干后,參照江茂生等[4]的方法,用自制固定床熱解設(shè)備進(jìn)行熱解,將收集的餾出液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,得堿木素焦油,再用丙酮溶解配制成10%的母液,低溫貯藏備用.

    1.2 供試病原菌物

    16種供試植物病原菌物如表1,由福建農(nóng)林大學(xué)植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供.

    表1 供試病原菌物及其受抑制率Table 1 The tested phytopathogenic fungi and its inhibitory ratios

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 堿木素焦油對(duì)供試菌抑制作用的測(cè)定 采用菌絲生長(zhǎng)抑制法進(jìn)行測(cè)定.配制含1000 μg·mL-1堿木素焦油的PSA平板,以含等量溶劑的PSA作對(duì)照;在培養(yǎng)基上接種直徑0.5 cm的供試菌菌餅,置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng).每個(gè)處理3次重復(fù).待對(duì)照菌絲生長(zhǎng)至平板直徑2/3時(shí),測(cè)量各處理的菌絲生長(zhǎng)直徑,計(jì)算抑制率.

    1.3.2 堿木素焦油對(duì)P.capsici抑制作用的測(cè)定 參照文獻(xiàn)[5],將堿木素焦油與甲霜靈分別配制成5個(gè)系列濃度的帶毒培養(yǎng)基,分別接種直徑0.5 cm的菌餅,置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng).每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù).待對(duì)照菌絲生長(zhǎng)至平板直徑的2/3時(shí),測(cè)量各處理菌絲生長(zhǎng)直徑,計(jì)算抑制率.

    參照文獻(xiàn)[6],將堿木素焦油與甲霜靈分別配制成5個(gè)系列濃度;制備濃度為1×105個(gè)·mL-1P.capsici孢子囊懸浮液;分別取各濃度的藥劑與孢子囊懸浮液各1 mL混勻,吸取一滴置于凹玻片中央,28℃保濕培養(yǎng),6 h后檢查孢子囊的萌發(fā)情況,計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率.

    將抑制率轉(zhuǎn)換為機(jī)率值,采用SPSS 19.0軟件計(jì)算出抑制機(jī)率值與藥劑濃度對(duì)數(shù)的毒力回歸方程,求出EC50、EC90及其95%置信區(qū)間.計(jì)算置信區(qū)間時(shí),采用黃昌華[7]的建議,將對(duì)照平均菌落直徑毫米數(shù)作為供試生物個(gè)體數(shù)(n).

    1.3.3 堿木素焦油對(duì)P.capsici有氧呼吸抑制作用的測(cè)定 采用改裝的Wasburg微量氣體呼吸儀測(cè)定不同濃度堿木素焦油處理下P.capsici的氧呼吸速率.將供試菌活化后,取直徑為0.5 cm的菌餅置于含藥的PS培養(yǎng)基中,利用NaOH吸收P.capsici呼出的CO2,通過(guò)數(shù)顯微壓差儀測(cè)定P.capsici在28℃恒溫條件下的氧呼吸量.每5 min記錄1次因呼吸代謝消耗氧氣導(dǎo)致的壓力減少值,連續(xù)記錄120 min.以不加藥同條件下P.capsici的氧呼吸量為對(duì)照.

    1.3.4 堿木素焦油對(duì)P.capsici細(xì)胞膜作用的測(cè)定 采用電導(dǎo)率法測(cè)定堿木素焦油對(duì)P.capsici胞內(nèi)電解質(zhì)滲出量的影響.采用PS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)P.capsici至對(duì)數(shù)期,收集菌絲.分別取1 g菌絲,加入到30 mL不同濃度(0、62.5、125、250、500、1000 μg·mL-1)的藥劑中并使菌絲分散懸浮,立即測(cè)定菌絲懸浮液的電導(dǎo)率隨時(shí)間的變化情況.

    取上述不同濃度堿木素焦油處理P.capsici 24 h后的菌懸液,過(guò)濾,采用考馬斯亮藍(lán)法[8]測(cè)定濾液中的蛋白質(zhì)含量,采用DNS法[8]測(cè)定濾液中的還原糖含量,分析堿木素焦油對(duì)P.capsici胞內(nèi)蛋白質(zhì)和還原糖滲出量的影響.

    1.3.5 堿木素焦油對(duì)P.capsici胞外纖維素酶及多聚半乳糖醛酸酶活性抑制作用的測(cè)定 參照孫文秀[9]的方法稍作改動(dòng)進(jìn)行測(cè)定.將 P.capsici接種到 Czapek-Dox 液體培養(yǎng)基(KNO32.0 g,KCl 0.5 g,F(xiàn)eSO40.01 g,K2HPO41.0 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,維生素 B10.2 g,L-天冬酰胺 0.5 g,果膠 10 g,蒸餾水 1000 mL)中靜置(28℃)培養(yǎng)7 d后抽濾得到濾液,離心(6000 r·min-1×30 min),取上清液,即為粗酶液.

    分別取1 mL酶液,加入計(jì)量堿木素焦油與酶作用5 min;加入2.5 mL緩沖液,45℃水浴下預(yù)熱10 min;加1 mL 1%CMC-Na,酶解反應(yīng)120 min;立即加入1.5 mL DNS,100℃煮沸5 min,流水冷卻,補(bǔ)加水定容至20 mL;以加同劑量藥且不含底物的處理溶液作為參比液,540 nm波長(zhǎng)下測(cè)定不同濃度藥劑處理的酶反應(yīng)體系的光密度.將酶反應(yīng)底物換成1%果膠,其他操作步驟相同.根據(jù)還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出酶反應(yīng)降解CMC-Na、果膠產(chǎn)生的還原糖量.以45℃、pH=5.0的條件下分解多糖1 h每產(chǎn)生1 mg單糖為一個(gè)酶活單位[9],計(jì)算堿木素焦油作用后的纖維素酶和多聚半乳糖醛酸酶活性.

    2 結(jié)果與分析

    2.1 堿木素焦油對(duì)供試菌的抑制作用

    由表1可以看出,堿木素焦油濃度在1000 μg·mL-1時(shí),對(duì)16種病原菌物均有一定的抑制作用,抑制率為43.75% -100%.其中,對(duì)15種病原菌物的抑制率在60%以上,對(duì) P.capsici、B.paeoniae、C.higginsianum、R.solani、S.rolfsii的抑制率可達(dá) 100%;對(duì) G.candidum 的抑制率最低,為 43.75%.可見,堿木素焦油對(duì)植物病原菌物的抑制作用具有一定的廣譜性.

    通過(guò)多重比較發(fā)現(xiàn),堿木素焦油對(duì)不同屬的菌株 P.capsici、B.paeoniae、C.higginsianum、R.solani、S.rolfsii的抑制作用差異不顯著(P>0.05);對(duì)同一屬中,如Botrytis屬中的2個(gè)菌株,Colletotrichum屬中的C.glosoporioides、C.theae-sinensis和 C.higginsianum 3 個(gè)菌株,抑制作用的差異也不顯著(P >0.05).由此可知,堿木素焦油對(duì)植物病原菌物的抑制作用沒(méi)有明顯的屬特異性.但由于樣本數(shù)量有限,要得出其作用規(guī)律還需進(jìn)一步研究.

    2.2 堿木素焦油對(duì)P.capsici的毒力

    甲霜靈是防治由P.capsici引起的植物疫病的傳統(tǒng)藥劑.測(cè)定結(jié)果表明,堿木素焦油和甲霜靈對(duì)P.capsici菌絲生長(zhǎng)的毒力回歸方程分別為 y=1.65x+1.58(R2=0.9920)和 y=1.56x+0.97(R2=0.9805);對(duì)孢子萌發(fā)的毒力回歸方程分別為 y=1.80x+0.65(R2=0.9317)和 y=3.07x -4.52(R2=0.9256).由表 2可見,堿木素焦油對(duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的EC50及EC90均低于甲霜靈,菌絲對(duì)堿木素焦油的敏感性比孢子更強(qiáng).

    表2 堿木素焦油對(duì)P.capsici菌絲及孢子萌發(fā)的毒力Table 2 Virulence of alkali lignin tar on mycelium growth and spore germination of P.capsici

    2.3 堿木素焦油對(duì)P.capsici有氧呼吸的抑制作用

    測(cè)定結(jié)果(圖1)表明,當(dāng)用藥濃度為250 μg·mL-1時(shí),與對(duì)照相比,P.capsici的有氧呼吸明顯受到抑制,且隨藥劑處理時(shí)間的延長(zhǎng)作用增強(qiáng);當(dāng)用藥濃度達(dá)到1000 μg·mL-1時(shí),P.capsici的有氧呼吸活動(dòng)微弱,處理時(shí)間達(dá)120 min時(shí),氧氣的消耗量仍很少,表明P.capsici的有氧呼吸幾乎完全被抑制.

    2.4 堿木素焦油對(duì)P.capsici細(xì)胞膜的作用

    在菌絲量一定的情況下,菌絲懸浮液的電導(dǎo)率變化能夠體現(xiàn)菌絲細(xì)胞內(nèi)電解質(zhì)的滲透情況,從而間接反映菌絲細(xì)胞膜的透性變化.由圖2可見,對(duì)照組的電導(dǎo)率緩慢上升,約30 min后達(dá)到平穩(wěn);500和1000 μg·mL-1堿木素焦油均會(huì)快速提高P.capsici菌絲懸浮液的電導(dǎo)率;1000 μg·mL-1劑量下,菌懸液的電導(dǎo)率在前5 min內(nèi)迅速上升,約10 min后達(dá)到平穩(wěn).

    圖1 堿木素焦油對(duì)P.capsici有氧呼吸的影響Fig.1 Effects of alkali lignin tar on respiration of P.capsici

    圖2 堿木素焦油對(duì)P.capsici電導(dǎo)率的影響Fig.2 Effects of alkali lignin tar on cells conductivity of P.capsici

    由圖3-4可以看出,隨藥劑處理濃度的升高,P.capsici的蛋白質(zhì)及還原糖的滲透量均出現(xiàn)上升趨勢(shì);在處理濃度達(dá)到 500 μg·mL-1時(shí),P.capsici的蛋白質(zhì)滲透量顯著提高;當(dāng)濃度超過(guò) 250 μg·mL-1時(shí),P.capsici的還原糖滲透量顯著提高.

    細(xì)胞膜是一種選擇透過(guò)性膜,能夠保持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,正常生長(zhǎng)情況下,細(xì)胞膜內(nèi)外的物質(zhì)交換處于一個(gè)相對(duì)平衡的狀態(tài).P.capsici蛋白質(zhì)及還原糖的滲出趨勢(shì)與電解質(zhì)外滲變化結(jié)果,共同反映出堿木素焦油能夠作用于P.capsici的細(xì)胞膜,使P.capsici的細(xì)胞膜受損,通透性變大,從而使其胞內(nèi)蛋白質(zhì)及還原糖、電解質(zhì)等物質(zhì)透出,造成菌絲生長(zhǎng)緩慢乃至凋亡.

    圖3 堿木素焦油對(duì)P.capsici胞內(nèi)蛋白滲出量的影響Fig.3 Effects of alkali lignin tar on proteins penetration from cells of P.capsici

    圖4 堿木素焦油對(duì)P.capsici胞內(nèi)還原糖滲出量的影響Fig.4 Effects of alkali lignin tar on reducing sugar penetration from cells of P.capsici

    2.5 堿木素焦油對(duì)P.capsici纖維素酶及多聚半乳糖醛酸酶活性的抑制作用

    生物質(zhì)熱解焦油中一般含有大量的由木質(zhì)素分解產(chǎn)生的酚類物質(zhì)[4],具有很強(qiáng)的使蛋白質(zhì)和酶變性的性能.由圖5-6可以看出,隨藥劑處理濃度的升高,P.capsici纖維素酶及多聚半乳糖醛酸酶的活性呈現(xiàn)類似的遞降趨勢(shì).在125 μg·mL-1濃度處理下,堿木素焦油對(duì)這2種酶的活性有輕微抑制作用;當(dāng)濃度高于500 μg·mL-1時(shí),會(huì)顯著抑制這2種酶的活性,抑制率均達(dá)到40%以上,并且隨藥劑濃度升高抑制作用繼續(xù)增強(qiáng).纖維素酶及多聚半乳糖醛酸酶是P.capsici侵染寄主時(shí)釋放的主要酶[10],其活性受到抑制,可以推測(cè)堿木素焦油能夠降低P.capsici侵染寄主的能力.

    圖5 堿木素焦油對(duì)P.capsici纖維素酶活性的影響Fig.5 Effects of alkali lignin tar on cellulase enzyme activity of P.capsici

    圖6 堿木素焦油對(duì)P.capsici多聚半乳糖醛酸酶活性的影響Fig.6 Effects of alkali lignin tar on polygalacturonase enzyme activity of P.capsici

    3 結(jié)論

    本研究表明,堿木素焦油具有比較廣譜的抑菌作用,對(duì)供試的10個(gè)屬中的16種植物病原菌物均有不同程度的抑制作用.堿木素焦油對(duì)P.capsici菌絲及孢子萌發(fā)的EC50及EC90均低于甲霜靈.

    堿木素焦油對(duì)P.capsici有復(fù)合的抑菌作用靶位點(diǎn).它能夠通過(guò)抑制P.capsici的有氧呼吸代謝途徑導(dǎo)致其能量供應(yīng)受到限制,使細(xì)胞內(nèi)的各種需能代謝反應(yīng)無(wú)法完成;同時(shí),能夠破壞P.capsici的細(xì)胞膜,使其通透性變大,損失胞內(nèi)蛋白質(zhì)、還原糖、電解質(zhì),導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)環(huán)境紊亂;此外,能夠使纖維素酶及多聚半乳糖醛酸酶活性降低而抑制菌絲生長(zhǎng).因此,以造紙工業(yè)的副產(chǎn)物堿木素為原料,熱解制備堿木素焦油并開發(fā)為農(nóng)用殺菌劑,對(duì)于降低造紙工業(yè)污染及促進(jìn)堿木素的高值化利用具有重要意義.

    [1]GURJAR M S,ALI S,AKHTAR M,et al.Efficacy of plant extracts in plant disease management[J].Agricultural Sciences,2012,3(3):425 -433.

    [2]YAZDANI D,TAN Y H,ZAINAL ABIDIN M A,et al.A review on bioactive compounds isolated from plants against plant pathogenic fungi[J].Journal of Medicinal Plants Research,2011,5(30):6584 -6589.

    [3]劉海燕,高微微,樊瑛.植物源殺菌劑的研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2005,21(4):254-257.

    [4]江茂生,李玉玲,許文耀,等.竹焦油對(duì)植物病原細(xì)菌的抑制作用[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2012,41(5):464-468.

    [5]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY/T1156.2-2006農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則殺菌劑第2部分:抑制病原真菌菌絲生長(zhǎng)試驗(yàn)平皿法[S].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2006.

    [6]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY/T1156.1-2006農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則殺菌劑第1部分:抑制病原真菌孢子萌發(fā)試驗(yàn)凹玻片法[S].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2006.

    [7]黃昌華.農(nóng)藥試驗(yàn)中的問(wèn)題及解決辦法[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理,2001(增刊):35-36.

    [8]曹春蕾,崔寶凱,秦問(wèn)敏.桑木層孔菌液體培養(yǎng)過(guò)程中幾種胞外酶活性的變化[J].菌物學(xué)報(bào),2011,30(2):275-280.

    [9]孫文秀.辣椒疫霉致病遺傳變異、多聚半乳糖醛酸酶基因克隆及表達(dá)特性研究[D].濟(jì)南:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.

    [10]DOUAIHER M N,NOWAK E.Correlative analysis of Mycosphaerella graminicola pathogenicity and cell wall-degrading enzymes produced in vitro:the importance of xylanase and polygalacturonase[J].Plant Pathology,2006,56(1):79 - 86.

    猜你喜歡
    醛酸木素焦油
    澳新擬批準(zhǔn)來(lái)自轉(zhuǎn)基因米曲霉的多聚半乳糖醛酸酶和果膠酯酶作為加工助劑
    焦油渣干化處理的應(yīng)用與實(shí)踐
    葡萄糖醛酸內(nèi)酯制備和表征研究
    工業(yè)堿木素不同純化方法的效果比較
    鞍鋼鲅魚圈焦油渣回配裝置的應(yīng)用與改進(jìn)
    基于Mn摻雜ZnS量子點(diǎn)磷光內(nèi)濾效應(yīng)檢測(cè)β—葡萄糖醛酸酶
    新型含1,2,3-三氮唑的染料木素糖綴合物的合成
    重溶劑法TDI焦油殘?jiān)姆治雠c利用
    半纖維素側(cè)鏈降解酶
    ——α-葡萄糖醛酸酶的研究進(jìn)展*
    煙梗中木素的結(jié)構(gòu)分析
    成人午夜高清在线视频| 成年版毛片免费区| 午夜福利成人在线免费观看| 日本 欧美在线| 国产免费av片在线观看野外av| 国产乱人伦免费视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 舔av片在线| 久久亚洲精品不卡| 欧美不卡视频在线免费观看| 99热6这里只有精品| 超碰成人久久| 免费在线观看影片大全网站| 国产69精品久久久久777片 | 1024手机看黄色片| 久久久久久大精品| 搡老岳熟女国产| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲国产精品合色在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 神马国产精品三级电影在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 激情在线观看视频在线高清| 国产在线精品亚洲第一网站| 十八禁人妻一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 日韩有码中文字幕| 露出奶头的视频| 99re在线观看精品视频| 久久香蕉精品热| 国产午夜福利久久久久久| 久久久久久九九精品二区国产| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产免费av片在线观看野外av| 国产精品98久久久久久宅男小说| 黄色日韩在线| 一级毛片女人18水好多| 午夜激情欧美在线| 免费搜索国产男女视频| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲专区中文字幕在线| 一个人看视频在线观看www免费 | 成年人黄色毛片网站| 久久精品国产清高在天天线| 日韩精品青青久久久久久| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 69av精品久久久久久| 一二三四社区在线视频社区8| 久久久久久九九精品二区国产| 日韩国内少妇激情av| 日本一本二区三区精品| 欧美中文日本在线观看视频| 国产淫片久久久久久久久 | 欧美zozozo另类| 天堂√8在线中文| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲国产欧美一区二区综合| 九九热线精品视视频播放| 在线永久观看黄色视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 男插女下体视频免费在线播放| 淫秽高清视频在线观看| 在线永久观看黄色视频| 亚洲真实伦在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 国产精品国产高清国产av| 一本综合久久免费| 一级毛片精品| 两个人看的免费小视频| 午夜福利成人在线免费观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产成人精品无人区| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲片人在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 黄色日韩在线| 特级一级黄色大片| 国产精品野战在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 色综合婷婷激情| 国产久久久一区二区三区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 黄片大片在线免费观看| 亚洲九九香蕉| 一二三四社区在线视频社区8| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲一区二区三区色噜噜| 成年版毛片免费区| 国产成人精品久久二区二区免费| 看免费av毛片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美色视频一区免费| 亚洲国产欧美一区二区综合| 99国产综合亚洲精品| or卡值多少钱| 国产av不卡久久| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产欧美日韩一区二区三| 日韩欧美精品v在线| 我的老师免费观看完整版| 岛国在线观看网站| 99热精品在线国产| 成熟少妇高潮喷水视频| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品 国内视频| 日韩av在线大香蕉| 亚洲av成人av| 九色成人免费人妻av| 国产欧美日韩一区二区三| 日本与韩国留学比较| 亚洲电影在线观看av| 香蕉久久夜色| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 美女高潮的动态| 久久九九热精品免费| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲电影在线观看av| 亚洲专区字幕在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 一区二区三区国产精品乱码| 日本三级黄在线观看| e午夜精品久久久久久久| 免费看十八禁软件| 老鸭窝网址在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 草草在线视频免费看| 亚洲真实伦在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 在线观看66精品国产| 欧美日本视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 窝窝影院91人妻| 国产高清videossex| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 很黄的视频免费| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲av熟女| 99久久无色码亚洲精品果冻| or卡值多少钱| 长腿黑丝高跟| 国产精品久久久久久精品电影| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美日本亚洲视频在线播放| 悠悠久久av| 国产视频一区二区在线看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品电影一区二区三区| 中文字幕av在线有码专区| 成人精品一区二区免费| 欧美极品一区二区三区四区| 日韩av在线大香蕉| 国产91精品成人一区二区三区| 最好的美女福利视频网| 曰老女人黄片| 一本综合久久免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 两个人视频免费观看高清| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品电影一区二区在线| 天天一区二区日本电影三级| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲欧美激情综合另类| 性色avwww在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 婷婷六月久久综合丁香| 日韩精品青青久久久久久| 我的老师免费观看完整版| 一进一出抽搐gif免费好疼| 成人国产综合亚洲| 国产v大片淫在线免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产高清有码在线观看视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲国产精品久久男人天堂| 男女视频在线观看网站免费| 国产黄色小视频在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲,欧美精品.| 午夜a级毛片| 国产私拍福利视频在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 色吧在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 一区福利在线观看| 热99在线观看视频| 久久人人精品亚洲av| 精华霜和精华液先用哪个| 美女午夜性视频免费| 女同久久另类99精品国产91| 又紧又爽又黄一区二区| 国产免费男女视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 99久久综合精品五月天人人| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲无线在线观看| 日本a在线网址| 亚洲五月天丁香| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 桃红色精品国产亚洲av| 最近在线观看免费完整版| www.www免费av| 嫩草影院入口| 黄频高清免费视频| 免费高清视频大片| 天天添夜夜摸| 日本a在线网址| 男女视频在线观看网站免费| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲五月婷婷丁香| 午夜福利视频1000在线观看| 日本黄色片子视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美色欧美亚洲另类二区| 免费在线观看亚洲国产| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久热在线av| 成人精品一区二区免费| 香蕉久久夜色| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 成人鲁丝片一二三区免费| av片东京热男人的天堂| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 狂野欧美激情性xxxx| 两性夫妻黄色片| 美女 人体艺术 gogo| 首页视频小说图片口味搜索| 性欧美人与动物交配| 婷婷丁香在线五月| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 亚洲精品456在线播放app | 日本与韩国留学比较| 好男人电影高清在线观看| 男人舔奶头视频| 少妇丰满av| 欧美黄色片欧美黄色片| a级毛片a级免费在线| 色精品久久人妻99蜜桃| 后天国语完整版免费观看| 午夜激情欧美在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 最新美女视频免费是黄的| 精品久久久久久久久久免费视频| 超碰成人久久| av天堂中文字幕网| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黑人欧美特级aaaaaa片| 韩国av一区二区三区四区| 色老头精品视频在线观看| 亚洲电影在线观看av| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩免费av在线播放| 波多野结衣高清无吗| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 色吧在线观看| 成在线人永久免费视频| 国模一区二区三区四区视频 | aaaaa片日本免费| 国产视频内射| 日韩大尺度精品在线看网址| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产亚洲av高清不卡| 欧美日本亚洲视频在线播放| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 观看美女的网站| 桃红色精品国产亚洲av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲人成电影免费在线| 国产日本99.免费观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 中文在线观看免费www的网站| 一级毛片女人18水好多| 亚洲无线观看免费| 国产精品国产高清国产av| 国产精品久久久久久久电影 | 国产成人影院久久av| 成人无遮挡网站| 99久久综合精品五月天人人| 怎么达到女性高潮| 国产免费男女视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲欧美日韩无卡精品| 天堂动漫精品| 一个人免费在线观看电影 | 日本一二三区视频观看| 俺也久久电影网| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 手机成人av网站| 69av精品久久久久久| 国产成人精品无人区| 高清毛片免费观看视频网站| 国产97色在线日韩免费| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲人成网站高清观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲国产精品合色在线| 国产高清视频在线播放一区| 黄色女人牲交| 久久这里只有精品中国| 欧美午夜高清在线| 露出奶头的视频| 男女视频在线观看网站免费| 香蕉丝袜av| 色精品久久人妻99蜜桃| 少妇裸体淫交视频免费看高清| av视频在线观看入口| xxxwww97欧美| www.熟女人妻精品国产| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲专区国产一区二区| av国产免费在线观看| 天堂动漫精品| 18禁美女被吸乳视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 精品电影一区二区在线| 亚洲国产精品sss在线观看| 黄片小视频在线播放| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲av片天天在线观看| 悠悠久久av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 色综合站精品国产| 黄频高清免费视频| 精品欧美国产一区二区三| 午夜福利视频1000在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久精品人妻少妇| 国产91精品成人一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久中文字幕一级| 麻豆av在线久日| 欧美中文日本在线观看视频| 脱女人内裤的视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 熟女人妻精品中文字幕| 少妇的丰满在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲色图av天堂| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产成年人精品一区二区| 99国产综合亚洲精品| 男插女下体视频免费在线播放| www国产在线视频色| 怎么达到女性高潮| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 三级国产精品欧美在线观看 | 天天添夜夜摸| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲av免费在线观看| 亚洲九九香蕉| 欧美黑人巨大hd| 午夜激情福利司机影院| svipshipincom国产片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲18禁久久av| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 最好的美女福利视频网| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 免费观看人在逋| 99精品久久久久人妻精品| 日本一本二区三区精品| 熟女电影av网| 国产一区二区在线观看日韩 | 偷拍熟女少妇极品色| 三级毛片av免费| 免费看日本二区| 午夜精品一区二区三区免费看| 一级黄色大片毛片| 少妇丰满av| 搡老妇女老女人老熟妇| 色视频www国产| 免费一级毛片在线播放高清视频| 免费看光身美女| 日本 av在线| a级毛片a级免费在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲欧美激情综合另类| 最新美女视频免费是黄的| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品av久久久久免费| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 99国产精品99久久久久| 国产精品久久久久久久电影 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 黑人操中国人逼视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 免费av毛片视频| 中文字幕久久专区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 97超视频在线观看视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 高潮久久久久久久久久久不卡| 91字幕亚洲| 精品久久久久久久毛片微露脸| 三级毛片av免费| 欧美高清成人免费视频www| 日本黄大片高清| 国产精品精品国产色婷婷| 色视频www国产| 亚洲一区二区三区不卡视频| 日韩欧美精品v在线| 岛国在线免费视频观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一二三四在线观看免费中文在| 久久精品国产清高在天天线| 男人的好看免费观看在线视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久久色成人| 色av中文字幕| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲专区中文字幕在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国内揄拍国产精品人妻在线| av视频在线观看入口| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 1000部很黄的大片| 国产精品久久久av美女十八| 成人特级av手机在线观看| 热99re8久久精品国产| 国产激情偷乱视频一区二区| 日韩欧美精品v在线| 两个人视频免费观看高清| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 动漫黄色视频在线观看| 九色成人免费人妻av| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品乱码一区二三区的特点| 午夜a级毛片| 亚洲七黄色美女视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 中文字幕最新亚洲高清| 国内精品一区二区在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲18禁久久av| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲专区中文字幕在线| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产v大片淫在线免费观看| 一个人看的www免费观看视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美日韩一级在线毛片| 美女被艹到高潮喷水动态| 男人舔奶头视频| 天天添夜夜摸| 欧美色欧美亚洲另类二区| 曰老女人黄片| 最好的美女福利视频网| 日本免费a在线| 国产精品永久免费网站| av天堂中文字幕网| 国产一区二区在线av高清观看| x7x7x7水蜜桃| 99国产精品一区二区三区| 草草在线视频免费看| 舔av片在线| av黄色大香蕉| 欧美日韩黄片免| 久久久国产精品麻豆| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 精品福利观看| 成年女人永久免费观看视频| 99久久国产精品久久久| 亚洲最大成人中文| 久久精品影院6| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 欧美成狂野欧美在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 色噜噜av男人的天堂激情| 在线观看日韩欧美| 白带黄色成豆腐渣| www.999成人在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 麻豆国产97在线/欧美| 狂野欧美激情性xxxx| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 成年免费大片在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 99热只有精品国产| 这个男人来自地球电影免费观看| 伦理电影免费视频| 999精品在线视频| 亚洲av电影在线进入| 婷婷丁香在线五月| 老司机在亚洲福利影院| 在线免费观看的www视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 最新中文字幕久久久久 | 90打野战视频偷拍视频| 天堂影院成人在线观看| 97碰自拍视频| 欧美黑人巨大hd| 精品国内亚洲2022精品成人| av中文乱码字幕在线| 嫩草影院入口| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品影院久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产精品野战在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲五月天丁香| 级片在线观看| 日本与韩国留学比较| 美女cb高潮喷水在线观看 | 亚洲国产精品合色在线| 美女大奶头视频| 亚洲精华国产精华精| 99久久精品一区二区三区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 最近在线观看免费完整版| 香蕉久久夜色| 一a级毛片在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 激情在线观看视频在线高清| 久久香蕉国产精品| 色综合欧美亚洲国产小说| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产高清有码在线观看视频| 波多野结衣巨乳人妻| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲午夜理论影院| 亚洲激情在线av| av片东京热男人的天堂| 日韩精品中文字幕看吧| or卡值多少钱| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产一区二区三区视频了| 一夜夜www| 美女被艹到高潮喷水动态| 欧美午夜高清在线| 免费在线观看成人毛片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久香蕉国产精品| 亚洲精品456在线播放app | 九九热线精品视视频播放| av片东京热男人的天堂| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲欧美日韩高清在线视频| www.自偷自拍.com| 成人午夜高清在线视频| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲激情在线av| 99久国产av精品| 日本黄大片高清| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 久久久精品欧美日韩精品| 日本三级黄在线观看| 久久人人精品亚洲av| 精品熟女少妇八av免费久了| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲专区国产一区二区| 黄频高清免费视频| 看黄色毛片网站| 长腿黑丝高跟| 欧美中文综合在线视频| 亚洲国产看品久久| 男插女下体视频免费在线播放| 欧美日韩黄片免| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲最大成人中文| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日日夜夜操网爽| 88av欧美| 亚洲第一电影网av| 在线视频色国产色| 欧美色视频一区免费| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产午夜精品论理片| 成人特级av手机在线观看|