蒼耳子-鹽酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑的制備研究

趙大偉喬秀麗王斌孫麗梅杜麗榮王雙俠柴寶麗張騰霄

（1.綏化學院食品與制藥工程學院 黑龍江綏化 152061；2.黑龍江龍桂制藥有限公司 黑龍江綏化 152061）

蒼耳子-鹽酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑的制備研究

趙大偉1喬秀麗1王斌1孫麗梅1杜麗榮2王雙俠1柴寶麗1張騰霄1

（1.綏化學院食品與制藥工程學院 黑龍江綏化 152061；
2.黑龍江龍桂制藥有限公司 黑龍江綏化 152061）

以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188等為凝膠劑基質制備蒼耳子-鹽酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑，研究不同組成基質的蒼耳子-鹽酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑的制備，并測定其膠凝溫度、釋放度。結果顯示：以25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188為基質制備的鹽蒼耳子-酸洛美沙星溫度敏感原位凝膠劑在膠凝溫度、釋放度等均較為理想。

原位凝膠；泊洛沙姆407；泊洛沙姆188；蒼耳子；膠凝溫度

原位凝膠劑系指以基質和藥物制成的在通常狀況下為液體，但當施加藥物至患處后，由于環(huán)境因素的變化，如溫度、離子組成和濃度、酸堿度（pH）等因素發(fā)生改變，高分子基質的基團或電荷的作用發(fā)生變化，從而使作為高分子聚合物的凝膠基質的空間結構發(fā)生改變，表現為黏度增大，進而會產生相變，由溶液態(tài)轉變?yōu)榘牍虘B(tài)，通常稱為發(fā)生膠凝。由于凝膠劑給藥方便、無污染、吸收和見效快、具有緩釋效果等，目前日益為藥物制劑領域所重視。

菊科植物蒼耳（Xanthium sibiricum Patr.）是近年來越來越多地受到關注的一種藥用植物，目前作為中藥主要應用的蒼耳子是蒼耳的干燥成熟果實，蒼耳在我國大部分地區(qū)均有分布，在黑龍江省尤其分布廣泛，在田間地頭和草原等處生長較好，生物資源儲量巨大，蒼耳子作為中藥具有對風寒頭痛、鼻淵流涕、風疹、皮膚瘙癢、濕痹拘攣等較好作用而應用呈現普及之勢；現代藥理研究表明，蒼耳子具有抗菌消炎、緩解風濕癥狀、止血、降低和控制血糖、降血壓、提高呼吸系統(tǒng)興奮性等作用[1,2]。目前蒼耳子的化學成分主要有酯類、酚酸類、水溶性二萜苷、噻嗪雙酮、大黃酚類等[3,4]。鹽酸洛美沙星（Lomefloxacin Hydrochloride）屬人工合成的氟喹諾酮類廣譜抗生素，化學名為 (±)-1-乙基-6,8-二氟-1,4-二氫-7-(3-甲基-1-哌嗪基)-4-氧喹啉-3-羧酸鹽酸鹽。鹽酸洛美沙星對于多種革蘭陽性菌和格蘭陰性菌均有抑菌效果，目前在臨床上鹽酸洛美沙星主要用于多種部位的敏感菌感染，如尿路感染、支氣管感染、皮膚軟組織感染、骨關節(jié)感染、細菌性前列腺炎、細菌性痢疾等。鹽酸洛美沙星的抑菌機制是在于其能夠抑制細菌DNA螺旋酶的活性，進而抑制細菌DNA的合成，從而起到了抑菌作用。鹽酸洛美沙星作為開發(fā)研制較為成熟的廣譜抗生素目前應用的較為普及，而蒼耳子的抗炎、殺菌、止血功效也日漸受到重視，將鹽酸洛美沙星和蒼耳子提取物配伍使用，開發(fā)新型高效的可應用于人體多部位細菌感染、出血和炎癥的新型原位凝膠劑，對于中藥和化學藥物應用的相結合，實現中藥現代化是有益的嘗試和探索。本文主要探討以泊洛沙姆系列高聚物為主的不同組成的凝膠劑基質對于制備鹽酸洛美沙星-蒼耳子溫敏原位凝膠劑的可行性研究，具體探討凝膠劑基質的組成對于蒼耳子-鹽酸洛美沙星凝膠劑的膠凝溫度、鹽酸洛美沙星釋放度的影響，確定制備上述凝膠劑的適宜基質。

一、儀器與材料

HJ-3型恒溫磁力攪拌器(江蘇省金壇市環(huán)宇科學儀器廠)；MS105電子天平(瑞士梅特勒儀器（中國）有限公司)；HH-8型數顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇環(huán)宇科學儀器廠)；UV-5800PC型紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）。

泊洛沙姆407（湖北遠成賽創(chuàng)科技有限公司）；泊洛沙姆188（湖北遠成賽創(chuàng)科技有限公司）；鹽酸洛美沙星原料藥（錦州九洋藥業(yè)有限責任公司）；鹽酸洛美沙星對照品（中國藥品生物制品檢定所）；蒼耳子（黑龍江綏化市北林區(qū)采集）；溴甲酚綠（分析純，天津市恒興化學試劑有限責任公司）；氫氧化鈉（分析純，常州恒光化學試劑有限公司）；冰醋酸（分析純，天津市優(yōu)譜化學試劑有限公司）；醋酸鈉（分析純，天津市恒興化學試劑有限責任公司）；五效蒸餾水（自制）；無水乙醇（分析純，天津市濱?？频匣瘜W試劑有限公司）、氯仿（分析純，天津市康科德科技有限公司）；吐溫-80（化學純，天津市科密歐化學試劑有限公司）。

二、方法

（一）凝膠劑的制備。參考相關文獻[5]，將處方量的泊洛沙姆407等精確稱定，溶于一定量的冷水之中，置于冰箱中放置24h，將按處方量稱取的鹽酸洛美沙星原料藥0.50g以適量的蒸餾水配制成水溶液，在磁力攪拌器上與凝膠基質攪拌混合，將干燥后的蒼耳子粉碎成粗粉，以50%乙醇（5g：200mL）在回流裝置60℃提取3h，過濾，乙醇提取液濃縮，回收部分大部分乙醇，烘干，粉碎，過200目篩，取過篩后的極細粉與2mL吐溫-80混合，以適量水配制成溶液，緩緩加入凝膠基質之中，加水至100mL，以磁力攪拌器攪拌1h，混合均勻，即得。

（二）人工模擬淚液的配制。精確稱取碳酸氫鈉2.18g、氯化鉀1.38g、氯化鈉6.78g、氯化鈣0.084g以適量蒸餾水攪拌，使之溶解，再加入蒸餾水配制成1000mL溶液，即得人工模擬淚液[6]。

（三）人工模擬鼻液的配制。稱取氯化鉀3.06g、氯化鈉8.77g、氯化鈣1.18g加水溶解至1000mL溶液，即得人工模擬鼻液[7]。

（四）膠凝溫度的測定。以磁轉子法進行測定[8]。所制得的凝膠劑（或其與人工淚液或人工鼻液混合物）50mL于玻璃瓶中，瓶口加橡膠塞密封，在橡膠塞上打孔，插入溫度計，溫度計水銀球要求沒入液面之下，上述被測凝膠先冷藏至低溫，取出后置于磁力攪拌器上，開動攪拌，磁力粒攪拌轉速控制在150r/min，逐漸升高溫度，觀察到攪拌轉子轉速逐漸減低，待到磁力粒完全停止轉動后，記錄溫度。重復測定三次，取平均值。

（五）鹽酸洛美沙星釋放度的測定。以自制簡易裝置測定釋放度，取1000mL燒杯，盛放人工淚液500mL，取一端開口的玻璃管一只，加入制備好的凝膠劑1mL，開口用醋酸纖維素膜封好，開口向下，倒置懸掛于燒杯內下部，并且使玻璃管整體沒入液面之下，開動磁力攪拌器，調節(jié)轉速為120r/min，分別在5、10、20、30、60、90、120、240、480min后取樣測定鹽酸洛美沙星濃度，每次取樣1mL，取樣后要補足同體積的釋放介質。釋放度的計算式為下式：

，其中Qm為鹽酸洛美沙星的釋藥百分度，V總為介質的總體積，m為測定次數，Ci為開始第m次測定時，介質中鹽酸洛美沙星的濃度；Vi為每次測定的取樣量，V0為初始時凝膠劑樣品加入的體積，根據上式，可以計算凝膠劑在介質中的鹽酸洛美沙星釋藥百分度。

（六）鹽酸洛美沙星含量測定。參考相關文獻[9]，移取適量鹽酸洛美沙星溶液于分液漏斗中，加入溴甲酚綠的0.01mol/L氫氧化鈉溶液（1g溴甲酚綠以0.01mol/L氫氧化鈉溶液溶解形成1000mL溶液）2mL，醋酸-醋酸鈉緩沖溶液（pH=3.5）3mL，加適量的蒸餾水，使體積達到20mL，精確量取并加入氯仿20mL，振搖1min，使充分反應，靜置10min，充分分層，分出氯仿層，并以同法制備不含鹽酸洛美沙星溶液的空白氯仿相作為參比，在415nm處測其氯仿溶液的吸光度[9]。

（七）工作曲線的制備。以分光光度法進行測定含量，精確稱取鹽酸洛美沙星對照品0.0404g，在50mL容量瓶中以0.1mol/mL醋酸溶液適量使之溶解，以蒸餾水定容至50mL，從中移取10mL溶液于100mL容量瓶，以0.05mol/mL醋酸稀釋至刻度，得到鹽酸洛美沙星對照品溶液。分別移取鹽酸洛美沙星對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、10.0、14.0mL按2.6方法測定吸光度，制作工作曲線。

三、結果與分析

（一）膠凝溫度。分別制備了以泊洛沙姆407、泊洛沙姆407與泊洛沙姆188按不同比例混合的凝膠基質的含有鹽酸洛美沙星、蒼耳子提取物的凝膠劑，分別按2.4測定其膠凝溫度，結果見表1。

表1 膠凝溫度測定結果

結果表明，如果泊洛沙姆407單獨使用，膠凝溫度較低。目前泊洛沙姆407是原位凝膠應用的主流，濃度一般為20% -30%，一般適當配合使用泊洛沙姆188，泊洛沙姆188可以使泊洛沙姆407的膠凝溫度適當升高，可以有助于獲得膠凝溫度更為理想的原位凝膠。根據表1的數據結果，25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188，25%泊洛沙姆407和3%泊洛沙姆188相對較為理想，泊洛沙姆是由聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯(PPO)鏈段交替連接組成的一類高分子聚合物，兩種類型的結構單位在形成凝膠時發(fā)揮的作用是不同的，聚氧乙烯(PEO)具有相對的親水性，因此二者的比例可能決定泊洛沙姆的膠凝溫度，一般說來，PEO比例較高的話，膠凝溫度會相應升高，因為這會使泊洛沙姆形成的膠束結構的水溶液較為穩(wěn)定，粘度較低。而泊洛沙姆188中的PEO比例高于泊洛沙姆407。根據上述結果，選取了25%泊洛沙姆407和1%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和3%泊洛沙姆188三種基質制備原位凝膠劑并做進一步研究。

（二）加入人工淚液或人工鼻液后的膠凝溫度。將以25%泊洛沙姆407和1%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188三種基質制成的原位凝膠劑按40:7的比例和40:1的比例與人工淚液和人工鼻液混合，按2.4測定膠凝溫度，結果見表2。

表2 與人工淚液或人工鼻液混合后的膠凝溫度

結果表明，與人工淚液或人工鼻液混合后，三種基質原位凝膠劑的膠凝溫度都有所提高，初步分析原因可能是人工淚液和人工鼻液中離子強度較高，對于泊洛沙姆膠束溶液的穩(wěn)定具有一定的積極作用，因此，考慮這些因素，選用的凝膠劑基質泊洛沙姆407濃度不可過低，泊洛沙姆188使用量要適宜，25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188為基質制備的凝膠劑再與人工淚液和人工鼻液混合后膠凝溫度均較適宜，可選擇25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188為基質制備凝膠劑。

（三）鹽酸洛美沙星釋放度測定結果。以2.7方法制備工作曲線，線性關系方程為A=0.00876C+0.0019，r=0.9914。結果表明吸光度與鹽酸洛美沙星的濃度在2.02-56.56μg/mL間呈較好的線性關系。按2.6法測定人工淚液中25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188為基質制備的原位凝膠在不同采樣時間點的鹽酸洛美沙星含量，每次取樣1mL，至25mL容量瓶中，以蒸餾水定容。移取1mL，按2.6測定其吸光度，計算釋放度，結果見表3。

表3 鹽酸洛美沙星的釋放度

從表中數據可以看出，鹽酸洛美沙星-蒼耳子原位凝膠劑對于鹽酸洛美沙星有較好的緩釋效應，一次給藥可維持藥物釋放可達2—4小時。

四、結論

以泊洛沙姆407為基質，制備的原位凝膠膠凝溫度隨濃度增大而逐漸降低，若添加少量的泊洛沙姆188，可在濃度適中的情況下制得以泊洛沙姆407為主的基質的蒼耳子-鹽酸洛美沙星原位凝膠，由于在模擬人工淚液和模擬人工鼻液中原位凝膠劑的膠凝溫度會有不同程度的上升。因此，確定制備蒼耳子-鹽酸洛美沙星凝膠劑的基質為25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188，在人工淚液和人工鼻液中的膠凝溫度為33.1℃和31.9℃，在人工淚液中4h鹽酸洛美沙星基本釋放完全，初步確定以25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188為凝膠劑基質制備可應用于人體的蒼耳子-鹽酸洛美沙星原位凝膠劑具有可行性。

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[責任編輯 鄭麗娟]

R944

A

2095-0438（2015）08-0154-03

2015-04-28

趙大偉（1973-），男，黑龍江慶安人，綏化學院食品與制藥工程學院講師，碩士，研究方向:藥物制劑和天然產物提取。

黑龍江省教育廳科學技術研究項目（12531835）；綏化市科學技術項目（KJZD 20140114）。