三種鯻科魚(yú)類同工酶組織特異性及群體遺傳結(jié)構(gòu)分析

張健東，何國(guó)清，陳　剛，湯保貴，潘傳豪，周　暉，黃建盛

(1. 廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，中國(guó) 湛江524025；2．廣東省普通高校南海水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國(guó) 湛江　524025)

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三種鯻科魚(yú)類同工酶組織特異性及群體遺傳結(jié)構(gòu)分析

張健東1,2，何國(guó)清1，陳剛1,2，湯保貴1,2，潘傳豪1,2，周暉1,2，黃建盛1,2

(1. 廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，中國(guó) 湛江524025；2．廣東省普通高校南海水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國(guó) 湛江524025)

摘要采用聚丙烯酰胺垂直板不連續(xù)電泳法對(duì)3種鯻科魚(yú)類6種組織(腦、眼、心、腎、肝和肌肉)的9種同工酶(ADH，EST，GDH，LDH，MDH，ME，POD，SDH，SOD)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示具有明顯組織特異性．此外，對(duì)每種魚(yú)40個(gè)個(gè)體的肝臟的8種同工酶進(jìn)行群體遺傳結(jié)構(gòu)分析，共記錄15個(gè)基因位點(diǎn)，其中呈多態(tài)性的位點(diǎn)有 2個(gè)(m-Pod-1,s-Sod-1)，多態(tài)座位比例(P)為0.133，位點(diǎn)平均有效等位基因數(shù)(Ae)分別為1.004，0.997和1.015，平均每個(gè)位點(diǎn)預(yù)期雜合度(He)值分別為0.068，0.066和0.045，平均每個(gè)位點(diǎn)實(shí)際雜合度(Ho)值分別為0.098，0.083和0.08．與其他魚(yú)類研究結(jié)果相比較，表明3種鯻科魚(yú)類的遺傳多樣性居于中等水平．

關(guān)鍵詞鯻科魚(yú)類；同工酶；組織特異性；遺傳結(jié)構(gòu)

TheTissue-SpecificitiesofIsozymesandtheGenetic

鯻科魚(yú)類(Theraponidae) 屬硬骨魚(yú)綱(Osteichthyes)，鱸形目(Perciformes)，鱸亞目(Percoidei)，為熱帶區(qū)沿岸性魚(yú)類，主要分布于印度西太平洋地區(qū)及澳洲、新幾內(nèi)亞、印尼等沿岸海域[1]．常見(jiàn)種類有細(xì)鱗鯻(Therapon jarbua)、鯻(Terapon theraps)、列牙鯻(Pelates quadrilineatus)和尖吻鯻(Rhynchopelate oxyrhynchus)4種，在中國(guó)發(fā)現(xiàn)了4屬8種[2-4]，鯻科魚(yú)類肉質(zhì)鮮美香滑，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，有很大的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)潛力[5-6]．

同工酶在生物界廣泛存在，變異豐富，且呈共顯性遺傳，能比較客觀地代表基因組的變異，因而能較客觀地度量群體的遺傳變異大小，且實(shí)驗(yàn)條件較為簡(jiǎn)單，成本較低，結(jié)果快速可靠等優(yōu)點(diǎn)，該技術(shù)已成為一種經(jīng)濟(jì)有效的群體遺傳學(xué)研究手段，是近20年來(lái)檢測(cè)遺傳多樣性研究最普遍的方法[7-10]．本實(shí)驗(yàn)研究了3種鯻科魚(yú)類部分同工酶的組織特異性并探討其群體生化遺傳結(jié)構(gòu)，以期為該物種的種質(zhì)調(diào)查提供有價(jià)值的生化遺傳參數(shù)，同時(shí)也為種質(zhì)資源的合理開(kāi)發(fā)利用和遺傳育種等提供部分理論依據(jù)．

1材料與方法

1.1試驗(yàn)樣本

試驗(yàn)用魚(yú)采自湛江附近海域，通過(guò)《中國(guó)魚(yú)類系統(tǒng)檢索》[11]和世界魚(yú)類信息檢索系統(tǒng)(http://www.fishbase.org)中的形態(tài)學(xué)描述確定為鯻科的細(xì)鱗鯻、鯻和列牙鯻，各取5尾，細(xì)鱗鯻平均體長(zhǎng)15.45±1.18cm，平均體質(zhì)量52.03±11.07g；鯻平均體長(zhǎng)10.20±0.87cm，平均體質(zhì)量14.10±3.98g；列牙鯻平均體長(zhǎng)11.24±1.70cm，平均體質(zhì)量20.58±11.30g．

活體解剖取其心臟(H)、肝臟(L)、脾臟(S)、腎臟(K)、肌肉(M)、鰓(G)、眼(E)、腦(B)和鰭(F)9種組織或器官，0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0，4 ℃預(yù)冷)沖洗，編號(hào)裝袋，保存于-80 ℃冰箱．

1.2樣品制備

稱取適量組織，按1∶3g/mL比例加入4 ℃預(yù)冷的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0 )，用玻璃勻漿器冰浴中充分勻漿后置離心管中，于4 ℃，15 000r/min離心30min，取上清液，置于1.5mL離心管中(肝臟離心兩次，以去脂肪).加入等體積40%蔗糖及2.5μL溴酚藍(lán)指示劑混勻，-80 ℃超低溫冰箱中保存直至電泳前取出于-22 ℃冰箱中備用．

1.3電泳溶液配制

1.3.1電泳緩沖液配制

(1) 分離膠緩沖液TM1：Tris 72.6 g，加蒸餾水至180 mL,充分溶解，用1 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH值至8.9，定容到200 mL．

(2) 濃縮膠緩沖液TM2：Tris 6.05 g，加蒸餾水溶解至180 mL，用1 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至6.7，定容到200 mL．

(3) 電極緩沖液TG：Tris6g,Gly28.8g，蒸餾水溶解，調(diào)pH至8.3，定容到1L．

1.3.2凝膠制備

(1) 30%凝膠儲(chǔ)液配制：Acr90g,Bis2.4g，加蒸餾水至300mL，37 ℃溫浴溶解，查證pH<7.0，用0.45μm孔徑濾膜過(guò)濾除菌，棕色瓶4 ℃保存．

(2) 分離膠(30mL)和濃縮膠(10mL)配制方法見(jiàn)表1．

表1　分離膠和濃縮膠的配制

1.4電泳

采用聚丙烯酰胺垂直板不連續(xù)電泳法，所分析酶的名稱、縮寫(xiě)和編號(hào)見(jiàn)表2．

表2　實(shí)驗(yàn)所分析同工酶的名稱、編號(hào)及結(jié)構(gòu)

注：D-二聚體；M-單體；T-四聚體．

1.5染色

顯色方法參照小川和郎[12]等的方法稍做修改．按下列顯色系統(tǒng)進(jìn)行：

(1)乙醇脫氫酶(ADH)

染色液配制：0.05mol/LTris-HCl(pH8.0) 48mL，無(wú)水乙醇0.2mL，1%NAD1mL， 1%NBT1mL，染色前加1%PMS0.2mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示深藍(lán)色區(qū)帶．

(2)酯酶(EST)

染色液配制：0.1mol/LTris-HCl(pH7.1) 47mL，1%α-乙酸萘酯 1mL，1%β-乙酸萘酯 1mL，1%固藍(lán)RR鹽 1mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，室溫下直至顯示棕色或紅棕色區(qū)帶．

(3)葡萄糖脫氫酶(GDH)

染色液配制：0.1mol/LTris-HCl(pH8.0) 43mL，葡萄糖9g，1%NAD1mL， 1%NBT1mL，染色前加1%PMS0.2mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，室溫下直至顯示藍(lán)色區(qū)帶．

(4)乳酸脫氫酶(LDH)

染色液配制： 0.1mol/LTris-HCl(pH7.1) 43mL，1mol/L乳酸鈉(pH7.0) 5mL，1%NAD1mL， 1%NBT1mL，染色前加1%PMS0.2mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示藍(lán)紫色區(qū)帶．

(5)蘋(píng)果酸酶(ME)

染色液配制：0.05mol/LTris-HCl(pH8.0) 42mL，2mol/LDL-蘋(píng)果酸鈉(pH8.0) 5mL，10%MgCl20.5 mL，0.5%NADP 1 mL，1%NBT 1 mL，染色前加1%PMS 0.2 mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示深藍(lán)色區(qū)帶．

(6)蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)

染色液配制： 0.05mol/LTris-HCl(pH8.0) 43mL，2mol/LDL-蘋(píng)果酸鈉(pH8.0) 5mL，1%NAD1mL，1%NBT1mL，染色前加1%PMS0.2mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示深藍(lán)色區(qū)帶．

(7)過(guò)氧化物酶(POD)

染色液配制：ddH2O 43 mL，2%醋酸聯(lián)苯胺 5 mL，3%H2O22 mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，室溫下直至顯示藍(lán)色區(qū)帶，顯色很快，應(yīng)盡快固定，拍照．

(8)山梨醇脫氫酶(SDH)

染色液配制：0.2mol/LTris-HCl(pH8.0) 45mL，15% D-山梨醇 1mL，10%MgCl21 mL，1 mol/L EDTA 0.05 mL，1%NAD 1 mL，1%NBT 1 mL，染色前加1%PMS 0.2 mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示深藍(lán)色區(qū)帶．

(9)超氧化物歧化酶(SOD)

染色液配制：0.05mol/LTris-HCl(pH8.0) 49mL，1mol/LEDTA0.05mL，0.002g核黃素，1%NBT1mL，攪拌混勻．顯色：將膠板浸入染色液，室溫光照下反應(yīng)直至膠板底色變深而酶帶透明清晰．

1.6酶譜分析與遺傳學(xué)分析

(1) 酶譜分析對(duì)照片進(jìn)行處理后，確定酶譜基因位點(diǎn)和等位基因，并做好標(biāo)記記錄，同工酶的縮寫(xiě)、基因座位和等位基因的命名采用Shaklee等[13]推薦的方法．

(2)遺傳學(xué)分析中，多態(tài)位點(diǎn)比例、等位基因頻率、平均雜合度(Ho，He)和Hardy-Weinberg遺傳偏離指數(shù)等參照文獻(xiàn)[14]計(jì)算．

a. 多態(tài)位點(diǎn)比例(percentageofpolymorphicloci, P)：P=(k/n) × 100%，其中k為多態(tài)座位數(shù)，n為所測(cè)位點(diǎn)總數(shù)．

b. 等位基因頻率(allelefrequency, qi)：qi= (2nii+∑nij)/(2N) (i≠j)，其中nii為具有純合aiai基因型的個(gè)體數(shù)，nij為具有雜合aiaj基因型的個(gè)體數(shù)，N為總個(gè)體數(shù)．

f.Hardy-Weinberg遺傳偏離指數(shù)(Geneticdeviationindex, d)：d=(Ho- He) / He，其中Ho為位點(diǎn)實(shí)際雜合度，He為位點(diǎn)預(yù)期雜合度．

2結(jié)果與分析

2.1組織特異性

試驗(yàn)分析了3種鯻科魚(yú)類的9種同工酶(ADH，EST，GDH，LDH，MDH，ME，SOD，POD，SDH)，有明顯組織特異性．在6種器官與組織中肝臟的同工酶表達(dá)最多且較穩(wěn)定清晰，心、腎、腦次之，眼和肌肉較少(表3)．試驗(yàn)所分析酶中EST，LDH，MDH，POD，SOD在各器官組織中都有表達(dá)，ADH，GDH，SDH僅在肝臟中有表達(dá)．ME在3種魚(yú)間表達(dá)差異較大．部分同工酶在各組織中的表達(dá)情況見(jiàn)圖1～圖6．

圖中從左到右依次為細(xì)鱗鯻、列牙鯻、鯻；腦(B)；眼(E)；心臟(H)；腎(K)；肝臟(L)；肌肉(M)；下同圖1　3種鯻科魚(yú)類乙醇脫氫酶的組織分布Fig.1　Eelectrophorogram of ADH in tissues of three species Theraponidae

圖2　3種鯻科魚(yú)類酯酶的組織分布Fig.2　Eelectrophorogram of EST in tissues of three species Theraponidae

圖3　3種鯻科魚(yú)類葡萄糖脫氫酶的組織分布Fig.3　Eelectrophorogram of GDH in tissues of three species Theraponidae

圖4　3種鯻科魚(yú)類乳酸脫氫酶的組織分布Fig.4　Eelectrophorogram of LDH in tissues of three species Theraponidae

圖5　3種鯻科魚(yú)類蘋(píng)果酸酶的組織分布Fig.5　Eelectrophorogram of ME in tissues of three species Theraponidae

圖6　3種鯻科魚(yú)類超氧化物歧化酶的組織分布Fig.6　Eelectrophorogram of SOD in tissues of three species Theraponidae

3種鯻魚(yú)的酯酶非常豐富，可能由6個(gè)位點(diǎn)編碼，組織特異性明顯．所測(cè)6種組織中，肝臟和腎臟中的酶活性較強(qiáng)且酶帶較多．葡萄糖脫氫酶是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶，當(dāng)機(jī)體需要NADPH和磷酸核糖的時(shí)候，葡萄糖就會(huì)流入磷酸戊糖途徑，在3種鯻科魚(yú)類中僅在肝臟觀測(cè)到其活性．魚(yú)類的LDH為四聚體，在3種鯻科魚(yú)類各組織中廣泛存在，在心、肝、腦中活性較強(qiáng)．C位點(diǎn)僅在肝、眼等特異性組織中存在．

魚(yú)類的ME為四聚體，也可分為細(xì)胞質(zhì)型(s-ME) 和線粒體型(m-ME)兩種[15]．本研究中的3種鯻科魚(yú)類ME酶譜中，位點(diǎn)m-Me-1在肝臟中活性最強(qiáng)，腦、心臟和腎次之．鯻的所有被檢測(cè)組織中都有表達(dá)，在眼中最弱，而在細(xì)鱗鯻和列牙鯻的眼中沒(méi)有檢測(cè)到其活性．s-Me-1組織特異性較強(qiáng)，只在肝臟中有表達(dá)．

3種鯻科魚(yú)SOD有s-Sod-1和m-Sod-1兩位點(diǎn)，都為二聚體．s-Sod-1在6種組織中都有檢出，肝臟活性最強(qiáng)，肌肉中活性最弱； m-Sod-1在肝臟中活性最強(qiáng)，心臟中表達(dá)最弱．

2.2遺傳多樣性

依據(jù)組織特異性分析結(jié)果選取肝臟對(duì)3種鯻科魚(yú)類8種同工酶(EST，GDH，LDH，MDH，ME，POD，SDH，SOD)進(jìn)行群體遺傳結(jié)構(gòu)分析．

2.2.1酯酶(Esterase，EST)EST是催化酯類化合物水解并進(jìn)入中間代謝的重要酶系，認(rèn)為可能與機(jī)體的解毒作用密切相關(guān)[16]．魚(yú)類的EST多為單體，一般由兩個(gè)以上的位點(diǎn)編碼，多態(tài)現(xiàn)象相當(dāng)廣泛．從本實(shí)驗(yàn)的EST電泳圖譜中可以看出在6個(gè)位點(diǎn)中，Est-3和Est-4活性最強(qiáng)，Est-6表達(dá)最廣．

表3　3種鯻科魚(yú)類9種同工酶的組織表達(dá)情況

注：***: 強(qiáng);**: 中;*: 弱; 0: 無(wú)；xll：細(xì)鱗鯻；lyl：列牙鯻；la：鯻.

2.2.2葡萄糖脫氫酶(Glucosedehydrogenase，GDH)葡萄糖脫氫酶是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶，幫助脂肪酸和固醇合成．GDH為二聚體酶，由1個(gè)基因位點(diǎn)編碼．

2.2.3乳酸脫氫酶(Lactatedehydrogenase，LDH)LDH是參與糖酵解的酶，可使細(xì)胞在氧氣不足時(shí)仍能進(jìn)行正常的生理活動(dòng)[17]．魚(yú)類的LDH為四聚體，由A，B和C共3個(gè)位點(diǎn)控制，A和B兩個(gè)位點(diǎn)編碼的亞基能形成A4，A3B，A2B2，AB3和B45種多肽聚合體，C位點(diǎn)僅在肝、眼等特異性組織中存在．LDH在3種鯻科魚(yú)類各組織中廣泛存在，在心、肝、腦中活性較強(qiáng)．

2.2.4蘋(píng)果酸脫氫酶(Malatedehydrogenate，MDH)MDH是細(xì)胞中三羧酸循環(huán)重要的脫氫酶之一[18]．硬骨魚(yú)類的MDH分為上清液型(s-MDH) 和線粒體型(m-MDH)兩種，均為二聚體．在3種鯻科魚(yú)類的各組織中都有表達(dá)，組織間的特異性不明顯(圖7)．

2.2.5蘋(píng)果酸酶(Malicenzyme,ME)ME是生物氧化的重要酶類．魚(yú)類的ME為四聚體．本研究中的3種鯻科魚(yú)類ME酶譜中，位點(diǎn)Me-1在肝臟中活性最強(qiáng)，Me-2組織特異性較強(qiáng)，只在肝臟中有表達(dá)．

2.2.6過(guò)氧化物酶(Peroxidase，POD)該酶在H2O2的存在下催化一系列氧化反應(yīng)．一般認(rèn)為，植物的POD由一個(gè)位點(diǎn)控制，為單體或二聚體，近年來(lái)在魚(yú)類中的研究逐漸增多，大多認(rèn)為可能由兩個(gè)位點(diǎn)編碼且為二聚體[18]．鯻科魚(yú)類POD酶譜可能由6個(gè)位點(diǎn)控制，其中Pod-2和Pod-3表達(dá)的范圍比較廣也比較穩(wěn)定．在分析的6種組織中，心臟和腎臟活性最強(qiáng)，肝臟和腦、眼的活性次之，肌肉中不表達(dá)(圖8)．

圖7　鯻科魚(yú)類群體蘋(píng)果酸脫氫酶電泳圖Fig.7　Eelectrophorogram of MDH in species of Theraponidae

圖8　鯻科魚(yú)類群體過(guò)氧化物酶電泳圖Fig.8　Eelectrophorogram of POD in species of Theraponidae

2.2.7山梨醇脫氫酶(Sorbitoldehydrogenase，SDH)SDH與山梨醇代謝有關(guān)，除山梨醇外，還對(duì)一些糖醇的氧化有催化作用[19]．3種鯻科魚(yú)類的SDH只在肝臟中有檢出，由一個(gè)基因座位Sdh-1，2編碼(圖9)．

圖9　鯻科魚(yú)類群體山梨醇脫氫酶電泳圖Fig.9　Eelectrophorogram of SDH in species of Theraponidae

2.2.8超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)SOD能清除體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基O2-，是生物體防御氧化損傷的重要酶類，為二聚體酶，有兩個(gè)基因座位編碼，可分為線粒體型和上清液型[19]．

本研究共記錄了15 個(gè)基因座位，其中呈多態(tài)性的座位有2個(gè)(Pod-2、s-Sod-1)，多態(tài)座位比例(P)為0.133，位點(diǎn)平均有效等位基因數(shù)(Ae)分別1.004，0.997和1.015，平均每個(gè)位點(diǎn)預(yù)期雜合度(He)值分別為0.068，0.066和0.045，平均每個(gè)位點(diǎn)實(shí)際雜合度(Ho)值分別為0.098，0.083，0.08．s-Sod-1和pod-2遺傳偏離指數(shù)(d)大于零，等位基因頻率分布偏離Hardy-Weinberg平衡，表明該位點(diǎn)處于雜合子過(guò)剩狀態(tài)(表4) ．

3討論

3.1組織特異性

同工酶在不同組織器官中的特異性表達(dá)是基因及其調(diào)控機(jī)制對(duì)組織功能演化的響應(yīng)[17]，特異基因的表達(dá)產(chǎn)生了成體組織特異的同工酶，各種組織中同工酶的不同表達(dá)與各組織的代謝功能密切相關(guān)，即與特定組織的重要代謝途徑有關(guān)[18]．肝臟集消化、分泌、解毒等功能于一體，因此表達(dá)的同工酶也較豐富、復(fù)雜，試驗(yàn)所選9種酶全部在肝臟表達(dá)且活性較強(qiáng)即可證明．

在本研究中，乙醇脫氫酶(ADH)、葡萄糖脫氫酶(GDH)和山梨醇脫氫酶(SDH)只在肝臟中檢出，說(shuō)明3種鯻科魚(yú)類的的乙醇代謝、膦酸戊糖途徑和山梨醇代謝主要在肝臟中進(jìn)行，這與肝臟的氧化乙醇成乙醛、脂肪酸和固醇合成、糖醇的氧化等生理功能密切相關(guān)．此外蘋(píng)果酸酶(ME)的s-Me-1位點(diǎn)和酯酶(EST)的多個(gè)位點(diǎn)僅在肝臟中表達(dá)，有明顯的組織特異性．

3.2遺傳多樣性

本研究中只發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化氫酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)中存在多態(tài)位點(diǎn)，這可能與所選的酶比較保守和采樣范圍不夠大有關(guān)．動(dòng)物的POD研究較少，魚(yú)類的POD研究?jī)H見(jiàn)寡齡新銀魚(yú)、美國(guó)紅魚(yú)和褐菖鲉的研究[16, 20-21]．POD-1為一條純合的酶帶，POD-2由3個(gè)等位基因控制，在酶譜上的5條帶，其酶型分別是AA，AB，AC，BB和CC，其中AB和AC的帶明顯比其他3條帶粗．

表4　3種鯻科魚(yú)類群體基因頻率、多態(tài)位點(diǎn)比例(P)和平均雜合度(H)

鯻科3種魚(yú)類SOD酶譜中，僅見(jiàn)兩條酶帶，靠近陽(yáng)極的s-Sod-1位點(diǎn)比m-Sod-1位點(diǎn)粗一倍，作者推測(cè)m-Sod-1為純合酶帶而s-Sod-1為雜合酶帶．s-Sod-1出現(xiàn)一條酶帶的情況可能是[16]：該位點(diǎn)純合子失活，以致全表現(xiàn)為雜合型．

多態(tài)位點(diǎn)比例(P)和平均雜合度(Ho)是有效反映魚(yú)類種群遺傳變異及其種質(zhì)資源狀況的兩個(gè)重要參數(shù)．據(jù)統(tǒng)計(jì)，脊椎動(dòng)物多態(tài)位點(diǎn)比例一般為0.15～0.3，平均雜合度一般為0.03～0.08，淡水魚(yú)類的多態(tài)位點(diǎn)比例為0.118～0.333，106種海水魚(yú)類的平均雜合度平均值為0.055[22-23]．本試驗(yàn)得出3種鯻科魚(yú)類的多態(tài)位點(diǎn)比例為0.133，水平較低．平均雜合度是度量遺傳變異的最簡(jiǎn)單、最直接、最富信息的方法，由于它與測(cè)定樣品量的大小的關(guān)系不大，因而比多態(tài)位點(diǎn)比例好些．3種鯻科魚(yú)類的平均雜合度分別0.098，0.083和0.08，高于106 種海水魚(yú)類的均值(0.055±0.036)，這可能與樣品s-Sod-1位點(diǎn)檢測(cè)全為雜合型有關(guān)[16]．結(jié)合比較上述研究報(bào)道，表明湛江海域3種鯻科魚(yú)類群體遺傳多樣性處于中等水平．

3.3同工酶分析

相對(duì)于一些DNA水平的遺傳標(biāo)記，同工酶遺傳標(biāo)記檢測(cè)到多態(tài)性較低，但同工酶可以確定樣本中的個(gè)體是何種基因型、純合子有多少及是何種等位基因的純合或雜合子，可用于探討基因控制個(gè)體發(fā)育的機(jī)理等方面的內(nèi)容[24]．由于同工酶檢測(cè)的是基因的表達(dá)產(chǎn)物，檢測(cè)的位點(diǎn)有限，表達(dá)產(chǎn)物的基因在生物體的整個(gè)基因組只占極少部分，還有大量的遺傳變異未能檢測(cè)出來(lái)；此外，從基因到表達(dá)產(chǎn)物存在轉(zhuǎn)錄、翻譯等中間環(huán)節(jié)，同時(shí)受到自然選擇或人工選擇的影響，因而同工酶所反映的遺傳變異往往較低，同工酶數(shù)據(jù)反映的親緣關(guān)系有時(shí)可能不夠全面．因此，有必要再結(jié)合RAPD、線粒體DNA及微衛(wèi)星等分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行更加全面的研究．

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(編輯王健)

StructureinThreeSpeciesofTheraponidae

ZHANG Jian-dong1,2*, HE Guo-qing1,CHENGang1,2, TANG Bao-gui1,2,

PAN Chuan-hao1,2, ZHOU Hui1,2, Huang Jian-sheng1,2

(1.FisheriesCollege,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524025,China; 2.KeyLaboratoryofAquacultureinSouth

ChinaSeaforAquaticEconomicAnimal,RegularHighEducationInstituteofGuangdongProvince,Zhanjiang524025,China)

AbstractHorizontal starch gel electrophoresis was used to investigate the tissue-specificities of isozymes and the genetic structure of Theraponidae. 9 isozymes (ADH, EST, GDH, LDH, MDH, ME, POD, SDH and SOD) in 6 kinds of tissues (brain, eye, heart, kidney, liver and muscle) of three Theraponidae species were screened and the results showed that the screened isozymes displayed remarkable tissue-specificities. Besides, 8 enzymes from liver tissues in 40 individuals were selected for the genetic analysis. The 8 isozymes systems were encoded by 15 loci, and 2 (m-Pod-1 and s-Sod-1) of them were polymorphic. The proportion of polymorphic loci was 0.133. The average effective numbers of alleles (Ae) were 1.004(at T.jarbua)，0.997 (at T.theraps) and1.015(at P.quadrilineatus), respectively. The mean expected heterozygosities per locus (He) were 0.068, 0.066 and 0.045. The mean actual heterozygosities per locus (Ho) were 0.098,0.083 and 0.08, respectively. This result indicated that there was a middle level of genetic variation in Theraponidae.

Key wordsTheraponidae; Isozyme; tissue specificity; genetic structure

中圖分類號(hào)S917.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)1000-2537(2015)05-0027-08

通訊作者*,E-mail：yzxzjd@126.com

基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(2006B20201003,2010B020308006)；廣東海洋與漁業(yè)科技興漁資助項(xiàng)目(B200601 G02)

收稿日期：2014-05-11

DOI:10.7612/j.issn.1000-2537.2015.05.005