HLA-DRB1*基因多態(tài)性與新疆維吾爾族及漢族潰瘍性結(jié)腸炎應(yīng)用5-氨基水楊酸治療后反應(yīng)的關(guān)系

·論著·HLA-DRB1*基因多態(tài)性與新疆維吾爾族及漢族潰瘍性結(jié)腸炎應(yīng)用5-氨基水楊酸治療后反應(yīng)的關(guān)系

阿依努爾·阿合曼哈迪那·熱馬贊高峰

摘要：目的本研究擬采用病例對(duì)照方法探討人類白細(xì)胞抗原(HLA)-DRB1*基因單核苷酸多態(tài)性與新疆地區(qū)維吾爾族及漢族潰瘍性結(jié)腸炎(UC)易感性的關(guān)聯(lián)性，并應(yīng)用5-氨基水楊酸(5-ASA)治療，觀察治療反應(yīng)，探討HLA -DRB1*基因單核苷酸多態(tài)性與UC療效之間的關(guān)系。方法 采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)的方法及SBT測(cè)序法對(duì)120例UC 患者和408名健康對(duì)照者DNA的HLA-DRB1 基因分型，病例組中漢族66 例，維吾爾族54例，男性57例，女性63例，平均發(fā)病年齡為(48.09±15.63)歲；健康對(duì)照組408例，其中漢族212例，維吾爾族196例。120例患者均口服5-ASA，急性期4 g/d，緩解期2 g/d，隨餐服用，隨訪6個(gè)月后觀察療效，根據(jù)療效分為治療有效組及治療無(wú)效組。結(jié)果漢族UC患者HLA-DRB1*13等位基因頻率高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HLA-DRB1*12等位基因頻率低于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；維吾爾族UC 患者HLA-DRB1*01、*04、*13、*14等位基因頻率高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。120例UC患者口服5-ASA后對(duì)療效進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)HLA-DRB1*04、*13、*14等位基因陽(yáng)性的維吾爾族與漢族UC患者相比較，兩組間的治療效果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論HLA-DRB1*基因單核苷酸多態(tài)性與新疆地區(qū)漢族UC無(wú)明顯關(guān)系，與維吾爾族UC的易感性有關(guān)，它們可能在UC的發(fā)病中發(fā)揮潛在作用，但與新疆地區(qū)維吾爾族UC患者服用5-ASA的治療效果無(wú)明顯關(guān)系。

關(guān)鍵詞：潰瘍性結(jié)腸炎；DRB1*基因多態(tài)性；漢族；維吾爾族；療效觀察

DOI:10.3969/j.issn.1673-534X.2015.04.018

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(81160052)

收稿日期：(2014-09-09)

作者單位：830001烏魯木齊，新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院消化科(阿依努爾·阿合曼，高峰)，門(mén)診部(哈迪那·熱馬贊)

通信作者：高峰，Email: xjgf@sina.com

Relationship of HLA-DRB1* gene polymorphism between Uyghur and Han UC patients and therapeutic reaction of 5-amino salicylic acid in Xinjiang Uygur Autonomous RegionAHEMANAyinuer,GAOFeng.DepartmentofGastroenterology,People'sHospital,XinjiangUygurAutonomousRegion,Urumqi(830001),China;REMAZANHadina.DepartmentofOutpatient,People'sHospital,XinjiangUygurAutonomousRegion,Urumqi(830001),China

Abstract：ObjectiveThis paper was to explore the relationship of HLA-DRB1 * gene polymorphism between Uyghur and Han UC patients in Xinjiang Uygur Autonomous Region and the treatment response using 5-amino salicylic acid, and to explore the relationship between human leukocyte antigen-DRB1 * polymorphisms and treatment response of ulcerative colitis. MethodsThe specific sequence primer polymerase chain reaction method and SBT sequencing method were used for HLA-DRB1* genotyping of 120 cases of UC patients and 408 cases of normal controls. The 66 cases were Han and 54 cases were Uyghur in the treatment group, with an average onset age of (48.09±15.63) years. The 212 cases were Han and 196 cases were Uyghur in the control group. 120 patients took 5-amino salicylic acid preparations orally, with a dosage of 4 g/d in the acute phase and 2 g/d in the remission phase, with meals and after 6 months of follow-up efficacy. ResultsThe HLA-DRB 1*13 allele frequency of Han UC patients is higher than that in the control group, with statistical significant difference(P<0.05). The HLA-DRB1*12 allele frequency of Han UC patients is lower than that in the control group, with statistical significant difference (P<0.05). The HLA-DRB*01, *04, *13, *14 allele frequency of Uyghur patients is higher than that of the control group, with statistical significant difference (P<0.05). However, no significant difference was found between the Han and Uyghur UC patients, after taking 5-amino salicylic acid preparations orally. ConclusionsHuman leukocyte antigen-DRB1 * gene polymorphism is associated with Uyghur and ulcerative colitis susceptibility. It may play a potential role in the pathogenesis of UC in the Uyghur in Xinjiang Autonomous Region. However, there is no significant difference, after taking 5-amino salicylic acid preparations orally between the Han and Uyghur UC patients.

Key words：Ulcerative colitis; DRB1*gene polymorphisms; Han; Uyghur; Treatment response

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種慢性復(fù)發(fā)性非特異性腸道炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制可能是由感染、遺傳等因素作用于易感人群，引起腸道免疫系統(tǒng)反應(yīng)紊亂導(dǎo)致腸道炎性病變與結(jié)構(gòu)破壞[1]。5-氨基水楊酸(5-ASA)具有抗炎特性，被廣泛用于UC的治療，盡管其確切機(jī)制尚不清楚，但其干擾花生四烯酸代謝、清除氧自由基、抑制核因子-κB(NF-κB)激活、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等的潛在機(jī)制已被廣泛認(rèn)同[2]。目前5-ASA是臨床上治療UC的一線藥物。

人類白細(xì)胞抗原(HLA)是調(diào)控人類免疫應(yīng)答的一個(gè)關(guān)鍵因素，其中HLA 的Ⅱ類抗原在抗原識(shí)別和免疫反應(yīng)中起重要作用。HLA 基因位于人類第6號(hào)染色體短臂(6p21. 3)，具有高度多態(tài)性，含有大量遺傳信息，是目前研究較為廣泛的與炎癥性腸病相關(guān)的基因之一[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，新疆地區(qū)維吾爾族與漢族UC的結(jié)腸鏡檢出率均高于國(guó)內(nèi)外水平。漢族發(fā)病年齡較維吾爾族更大，且漢族年齡分布廣泛，老年患者明顯高于維吾爾族。比較兩者的病情嚴(yán)重程度發(fā)現(xiàn)，維吾爾族的中、重型患者多于漢族[4]。研究顯示HLA-DRB1*基因單核苷酸多態(tài)性與新疆地區(qū)維吾爾族及漢族UC的易感性有關(guān)[5]。本研究旨在探索通過(guò)檢測(cè)新疆維吾爾族及漢族UC患者的HLA-DRB1基因多態(tài)性來(lái)觀察患者服用5-ASA后的療效，為制定個(gè)體化的臨床治療方案提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象

本研究選擇新疆自治區(qū)人民醫(yī)院自2013年1月至2014年1月住院的120例UC患者，其中漢族66例，男性31例，女性35例；維吾爾族54例，其中男性26例，女性28例，平均發(fā)病年齡為(48.07±15.83)歲。健康對(duì)照組有408人，其中漢族212人，維吾爾族196人，年齡與性別的構(gòu)成差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。120例患者均接受腸鏡檢查并且隨訪至2014年1月，UC的臨床與內(nèi)鏡診斷、病理檢查結(jié)果及療效判斷采用Lennard-Jones標(biāo)準(zhǔn)[6]及中華醫(yī)學(xué)會(huì)2012年廣州會(huì)議制定的IBD診治規(guī)范共識(shí)意見(jiàn)[7]。所有研究對(duì)象均為居住在新疆地區(qū)、無(wú)血緣關(guān)系、無(wú)免疫性和遺傳性疾病史的維吾爾族及漢族人群。排除慢性菌痢、阿米巴痢疾、腸結(jié)核、克羅恩病、缺血性腸炎及結(jié)腸癌等疾病，所有患者均伴有腹痛、腹瀉、膿血便、肛門(mén)墜脹等癥狀。

1.2主要試劑及方法

1.2.1HLA-DRB1基因檢測(cè)試劑及方法對(duì)每例入選的研究對(duì)象空腹抽取5 mL靜脈血，EDTA-Na2抗凝，基因組應(yīng)用試劑盒提取DNA。按照HLA- DRB1* 各等位基因的DNA序列，參照基因文庫(kù)中所有純合子、雜合子有可能出現(xiàn)的序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，由上海捷瑞生物工程有限公司合成并純化(見(jiàn)表1)。

表1　HLA-DRB1*等位基因PCR-SBT引物核苷酸序列

PCR反應(yīng)DNA擴(kuò)增，PCR 產(chǎn)物純化使用 High Pure PCR Purification Kit(Roche Diagnostics)設(shè)備。PCR產(chǎn)物純化后產(chǎn)物測(cè)序反應(yīng)采用using BigDye Terminator v3.1的試劑盒(ABI、USA)和ABI 3730XL DNA測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序。DRB1*基因結(jié)果分析：應(yīng)用Qiagen SBTengine HLA Typing software DRB1分型進(jìn)行數(shù)據(jù)的分析。

1.2.2治療藥物及方法120例患者均口服5-ASA制劑(美沙拉嗪緩釋顆粒)，商品名為Etiasa(艾迪莎)，急性期4 g/d(8袋)，緩解期2 g/d(4袋)，隨餐服用，隨訪6個(gè)月后觀察療效[8]。治療后均進(jìn)行腸鏡檢查，根據(jù)臨床癥狀和腸鏡結(jié)果進(jìn)行療效評(píng)估。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或Fisher′s精確檢驗(yàn)，當(dāng)P<0.05時(shí)，計(jì)算OR，采用Miettinen卡方值法計(jì)算OR和95%CI。表型頻率用直接計(jì)數(shù)法，基因頻率按Hardy-Weinberg定理，應(yīng)用方根法計(jì)算。

2結(jié)果

2.1維吾爾族UC患者與健康對(duì)照組HLA-DRB1*等位基因頻率分布比較

維吾爾族UC患者(54例)HLA-DRB1*01、*04、*13、*14等位基因頻率高于健康對(duì)照組(196例)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HLA-DRB1*8、*03、*11等位基因頻率低于健康對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.2漢族UC患者和健康對(duì)照組HLA-DRB1等位基因分布比較

漢族UC患者(66例)HLA-DRB1*13等位基因頻率高于健康對(duì)照組(212例)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HLA-DRB1*12等位基因頻率低于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HLA-DRB1*03等位基因頻率低于健康對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　漢族及維吾爾族UC患者HLA-DRB1基因多態(tài)性差異性比較

2.3維吾爾族與漢族UC患者療效比較

維吾爾族與漢族UC患者均口服5-ASA制劑(美沙拉嗪緩釋顆粒)，對(duì)HLA-DRB1*04、*13、*14基因多態(tài)性陽(yáng)性的維吾爾族和漢族UC患者療效進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3　維吾爾族UC患者HLA-DRB1基因多態(tài)性及療效比較

注：治療有效組包括緩解和有效，治療無(wú)效組包括臨床癥狀、結(jié)腸鏡檢查均無(wú)改善

3討論

近年來(lái)對(duì)UC的病因和發(fā)病機(jī)制的研究較為活躍，且取得了一定進(jìn)展，但至今仍未完全闡明，目前研究的重點(diǎn)方向包括感染因素、免疫學(xué)因素及遺傳因素。氨基水楊酸類藥物和皮質(zhì)類固醇類藥物目前仍然是治療UC的主要藥物，具有起效快、近期臨床緩解率高等優(yōu)點(diǎn)，但停藥后易復(fù)發(fā)，長(zhǎng)期用藥的不良反應(yīng)較多，部分頑固性患者的療效并不理想[9]。 5-ASA制劑主要包括巴柳氮、柳氮磺吡啶(SASP)、美沙拉嗪和奧沙拉嗪等，其中巴柳氮和SASP是5-ASA的前體藥，均可在結(jié)腸細(xì)菌的作用下釋放出5-ASA，美沙拉嗪是5-ASA的控釋劑，奧沙拉嗪則是由兩分子5-ASA藕合而成，它們的活性成分均為5-ASA，是輕、中度UC誘導(dǎo)緩解和維持緩解的一線藥物。5-ASA有良好的耐受性，不良反應(yīng)小，抗炎作用肯定。

本研究表明，漢族UC患者的發(fā)病年齡較維吾爾族的發(fā)病年齡大，且漢族年齡分布廣泛，老年患者明顯高于維吾爾族[4]。本研究對(duì)新疆地區(qū)維吾爾族UC患者與健康對(duì)照組HLA-DRB1等位基因頻率分布進(jìn)行比較，結(jié)果提示HLA-DRB1*01、*04、*13、*14等位基因與維吾爾族UC呈正相關(guān)。本研究還指出，直接檢測(cè)HLA-DRB1基因多態(tài)性對(duì)預(yù)測(cè)5-ASA類藥物的療效并沒(méi)有幫助。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)HLA-DRB1*基因可能在漢族及維吾爾族UC的發(fā)病中發(fā)揮潛在作用，但與5-ASA的治療效果并無(wú)明顯關(guān)系，對(duì)于中國(guó)新疆地區(qū)的UC患者，無(wú)論基因是否有差異對(duì)預(yù)測(cè)療效并無(wú)指導(dǎo)意義，故其在臨床應(yīng)用中的費(fèi)用-效益比尚有待研究。

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(本文編輯：周駿)