• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    青稞品種肚里黃成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)與植株再生

    2015-12-23 09:40:03危文波蔣禮玲吳昆侖遲德釗
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年10期
    關(guān)鍵詞:青稞

    危文波 蔣禮玲 吳昆侖 遲德釗

    摘要:以青稞品種“肚里黃”成熟胚為外植體,設(shè)置不同成熟胚切割方式、不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基、不同激素及配比、不同碳源,研究對成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)及綠苗分化的影響,以期為進(jìn)一步實現(xiàn)青稞的遺傳轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ)。結(jié)果表明,將刮碎的成熟胚接種在以麥芽糖為碳源,附加6 mg/L的2,4-D的MS培養(yǎng)基上最為合適,愈傷質(zhì)量最好;添加1.5 mg/L 6-BA和1.5 mg/L KT對愈傷組織的分化效果最佳,綠苗率達(dá)44.5%。研究結(jié)果表明,通過愈傷誘導(dǎo)和分化的優(yōu)化,肚里黃的愈傷組織誘導(dǎo)率和分化率均可以達(dá)到較高水平,適合于作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料。

    關(guān)鍵詞:青稞;成熟胚;出愈率;愈傷誘導(dǎo);植株再生

    中圖分類號: S512.03 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號:1002-1302(2015)10-0044-03

    隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,以幼胚、花藥、分生組織等為外植體,通過細(xì)胞和基因工程技術(shù)定向改良大麥品種的研究,已經(jīng)取得了良好進(jìn)展[1-5]。但這些培養(yǎng)方法都受到大麥生長季節(jié)的限制,一年中取材時間有限,易受環(huán)境影響等不足。利用大麥種子的成熟胚為外植體,則具有取材方便、不受生長季節(jié)限制、能夠長年大量供應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),近年來,受到了越來越多的研究者青睞[6-8]。青稞(Hordeum vulgare L. var. nudum Hook. f.),屬禾本科大麥屬,在植物學(xué)上屬于栽培大麥的變種,因其籽粒內(nèi)外稃與穎果分離,籽粒裸露,故稱裸大麥,是青藏高原藏族人民的主糧,然而,青稞在其分子育種基礎(chǔ)性工作的青稞成熟胚研究報道較少。

    本試驗選取青海省種植面積最大的青稞品種肚里黃為材料,以成熟胚為外植體,研究成熟胚不同處理方式以及不同培養(yǎng)條件對其愈傷組織誘導(dǎo)及其植株再生的影響,從而建立高效的青稞成熟胚再生體系,為青稞的遺傳轉(zhuǎn)化和品質(zhì)改良等分子育種研究奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 供試品種

    供試品種為肚里黃,是20世紀(jì)60年代從甘肅省甘南州引進(jìn)的青稞農(nóng)家品種。目前,肚里黃在青海省青稞種植區(qū)均有大面積種植。肚里黃種子由青海省農(nóng)林科學(xué)院作物所青稞研究室提供。

    1.2 培養(yǎng)基

    愈傷組織誘導(dǎo)分別以MS、N6及B5大量+MS微量的3種培養(yǎng)基添加2 mg/L 2,4-D,分別添加不同濃度的2,4-D(2、4、6、8、10 mg/L),并設(shè)置不同的碳源(蔗糖、葡萄糖、麥芽糖)。繼代培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基,不添加2,4-D。分化培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,添加KT和6-BA的不同組合。所有培養(yǎng)基均添加6 g/L植物凝膠,121 ℃下高溫滅菌20 min后使用。

    1.3 種子處理及組織培養(yǎng)方法

    1.3.1 種子處理和滅菌 選取當(dāng)年收獲、籽粒飽滿、大小一致的青稞種子,置75%乙醇中浸泡2~3 min;無菌水沖洗3~4次;再浸于5%次氯酸鈉中15 min;無菌水沖洗3~4次;無菌水浸泡12~18 h;接種前用5%次氯酸鈉浸泡10 min,無菌水沖洗3~4次后備用。

    1.3.2 成熟胚的處理及初始愈傷組織的誘導(dǎo) 在超凈工作臺上將已滅菌的種子放在無菌濾紙上吸水后分別按照王興珍等采用的3種方式[6]處理:(1)沿胚軸完全切開(縱全切),接種半胚;(2)垂直胚軸完全橫切開(橫切),只接種有胚芽的50%;(3)將胚完全刮碎(刮碎),懸浮于愈傷培養(yǎng)基上。于培養(yǎng)箱中(25±1) ℃,黑暗條件下誘導(dǎo)愈傷組織。

    1.3.3 愈傷組織的繼代和分化培養(yǎng) 將初始愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上,25 ℃、光強(qiáng)450 lx下培養(yǎng),每隔 7 d 繼代1次,誘導(dǎo)胚性愈傷組織;再將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上,25 ℃、光強(qiáng)450 lx下分化出植株。

    1.4 統(tǒng)計與分析

    接種1周后統(tǒng)計不同處理下的出愈率,待胚性愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上2周后,統(tǒng)計分化的綠點(diǎn)數(shù)和綠苗數(shù)。所有試驗結(jié)果采用Excel數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計分析、差異顯著性比較。

    出愈率=誘導(dǎo)出愈傷組織的胚數(shù)/接種胚數(shù)×100%;

    綠點(diǎn)數(shù)=分化出綠點(diǎn)的愈傷數(shù)/接種的愈傷數(shù)×100%;

    再生苗數(shù)=分化出綠苗的愈傷數(shù)/接種的愈傷數(shù)×100%。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同成熟胚切割方式對成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)的影響

    以肚里黃種子為材料,研究3種不同的成熟胚切割方式對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響。結(jié)果表明,不同種子處理方式對愈傷組織的誘導(dǎo)率有極顯著影響。從圖1可以看出,胚刮碎處理的出愈率顯著高于其他2種處理。胚刮碎處理后的愈傷組織胚萌發(fā)較少,而且脫分化效果最佳,形成的愈傷組織呈淡黃色,質(zhì)地緊密,表明玻璃化不明顯。胚軸縱切和橫切時,會出現(xiàn)大量萌發(fā)的胚芽,且愈傷組織玻璃化嚴(yán)重。因此,本試驗均以刮碎的成熟胚進(jìn)行接種誘導(dǎo)愈傷組織。

    2.2 誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基的優(yōu)化

    2.2.1 不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基對成熟胚誘導(dǎo)愈傷組織的影響 不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基(MS、B5、N6)對成熟胚誘導(dǎo)愈傷組織的影響見圖2。從圖2可以看出,不同培養(yǎng)基對肚里黃成熟胚出愈率的影響達(dá)到極顯著水平。其中以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基時,肚里黃的出愈率最高,達(dá)71.1%;在N6基礎(chǔ)培養(yǎng)基上的出愈率可達(dá)62.1%;而在B5基礎(chǔ)培養(yǎng)基上的出愈率只有46.4%。研究結(jié)果表明,與其他2種培養(yǎng)基相比,MS培養(yǎng)基更適合作為青稞品種肚里黃成熟胚誘導(dǎo)愈傷組織的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

    2.2.2 不同碳源對愈傷組織誘導(dǎo)的影響 在MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,比較3種不同的碳源(葡萄糖、蔗糖、麥芽糖)對肚里黃愈傷組織誘導(dǎo)的影響。從圖3可以看出,3種不同的碳源對肚里黃出愈率的影響達(dá)到顯著水平,其中以麥芽糖為碳源時,出愈率最高,為82.3%,其次是以蔗糖為碳源;而以葡萄糖為碳源時,出愈率最低,為70.0%。表明以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,麥芽糖為碳源時,青稞品種肚里黃出愈率得到大幅提高,因此,麥芽糖可代替葡萄糖作為青稞成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)的碳源。

    2.2.3 不同2,4-D濃度對愈傷組織誘導(dǎo)的影響 通過添加不同濃度的2,4-D研究肚里黃成熟胚愈傷誘導(dǎo)的情況。從表1可以看出,在2,4-D 濃度2~8 mg/L濃度范圍內(nèi),隨著2,4-D濃度的升高,肚里黃的出愈率隨之升高。在 2,4-D 濃度為8 mg/L時,出愈率達(dá)到最高,為96.7%,隨著2,4-D濃度的進(jìn)一步升高,即10 mg/L時,反而抑制了愈傷組織的誘導(dǎo)。培養(yǎng)基中2,4-D的升高顯著降低了成熟胚的直接萌發(fā)出芽率,且愈傷組織質(zhì)量明顯優(yōu)于低濃度的愈傷組織,表明一定濃度2,4-D的添加對愈傷組織誘導(dǎo)存在促進(jìn)作用,也可顯著抑制胚胎的直接發(fā)生并有效改善愈傷質(zhì)量。

    2.3 不同分化培養(yǎng)基對成熟胚誘導(dǎo)愈傷組織的影響

    挑選質(zhì)地緊密的胚性愈傷組織,以MS為基本培養(yǎng)基,添加不同種類及濃度的激素,研究對成熟胚愈傷組織分化的影響。從表2可以看出,不同激素配比對肚里黃愈傷組織的分化有明顯影響。在培養(yǎng)基中添加1.5 mg/L 6-BA和 1.5 mg/L KT時,綠苗分化率最高,達(dá)到44.5%。在0~1.5 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基上,綠苗分化率是隨著6-BA濃度的升高而提高,而當(dāng)6-BA濃度為2.0 mg/L時,分化率反而降低;當(dāng)6-BA濃度在同一水平時,隨著KT濃度的升高,其出愈率隨之提高,表明激素在一定范圍內(nèi)可以促進(jìn)綠苗的分化,較高激素濃度會抑制肚里黃成熟胚愈傷組織的分化。

    3 討論與結(jié)論

    青稞愈傷組織的誘導(dǎo)與植株再生是建立青稞遺傳轉(zhuǎn)化體系的前提。而以成熟胚為外植體,取材方便、不受生長季節(jié)限制,可以常年大量供應(yīng)。研究結(jié)果表明,成熟胚作為外植體誘導(dǎo)愈傷組織時,誘導(dǎo)愈傷的同時,伴隨有胚發(fā)芽現(xiàn)象[6,8-9]。因此,通過成熟胚的不同處理方式及誘導(dǎo)條件的優(yōu)化,成熟胚也可以得到較好的愈傷組織。本研究與前人研究結(jié)果一致,認(rèn)為刮碎的成熟胚可以抑制胚發(fā)芽現(xiàn)象,并可以形成良好的愈傷組織。此外,添加外源激素可以促進(jìn)愈傷組織誘導(dǎo)和分化再生[10-12]。尤其是2,4-D不僅能夠提高成熟胚的出愈率,而且可以抑制胚發(fā)芽現(xiàn)象,改善愈傷組織的質(zhì)量,因此,被認(rèn)為是影響成熟胚培養(yǎng)的主要因素之一[11,13-14]。在大麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)中,王卉等的研究結(jié)果表明,在1~8 mg/L的范圍內(nèi),2,4-D濃度對大麥成熟胚愈傷組織的出愈率影響較小,濃度間差異不明顯[15]。而潘向群等對不同基因型和2,4-D濃度的互作研究發(fā)現(xiàn),不同基因型的大麥成熟胚高頻率誘導(dǎo)愈傷所需2,4-D濃度是不同的。本研究結(jié)果表明,青稞品種肚里黃,1~8 mg/L的2,4-D濃度范圍內(nèi),肚里黃成熟胚的出愈率隨著2,4-D濃度升高而逐漸升高,而且顯著降低了成熟胚的直接萌發(fā)出芽率。此外,外源激素對愈傷組織的分化有明顯的影響,眾多研究表明,6-BA和KT的添加有利于芽的分化[16-18],本研究結(jié)果與之一致,隨著6-BA和KT濃度的升高,其愈傷組織分化率隨之提高,在1.5 mg/L 6-BA和1.5 mg/L KT時,肚里黃綠苗率最高,達(dá)44.5%。

    本研究結(jié)果表明,成熟胚的處理方式、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、碳源和激素的種類和配比對青稞成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)及分化具有一定的影響。本試驗在刮碎的成熟胚接種以麥芽糖代替葡萄糖作為碳源MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上,并添加6 mg/L的2,4-D,不僅明顯抑制了胚芽的萌發(fā),而且提高了肚里黃成熟胚的出愈率。通過肚里黃成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)及分化過程中的各項參數(shù)條件進(jìn)行優(yōu)化,使得其愈傷組織誘導(dǎo)率及綠苗分化率分別達(dá)到96.7%、44.5%,結(jié)果表明,肚里黃成熟胚可以作為較好的遺傳轉(zhuǎn)化受體材料。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Wojnarowiez G,Jacquard C,Devaux P,et al. Influence of Copper sulfate on anther culture in barley (Hordeum vulgare L.)[J]. Plant Science,2002,162(5):843-847.

    [2]高潤紅,杜志釗,郭桂梅,等. 優(yōu)良大麥品種花30幼胚遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化[J]. 植物遺傳資源學(xué)報,2012,13(5):901-906.

    [3]華 為,尚 毅,賈巧君,等. 大麥花藥快速培養(yǎng)法及不同基因型對花藥培養(yǎng)的影響[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報,2013,25(3):425-430.

    [4]Dale P J,Deambrogio E. A comparison of callus induction and plant regeneration from different explants of Hordeum vulgare[J]. Zeitschrift für Pflanzenphysiologie,1979,94(1):65-77.

    [5]Jhne A,Lazzeri P A,Lrz H. Regeneration of fertile plants from protoplasts derived from embryogenic cell suspensions of barley (Hordeum vulgare L.)[J]. Plant Cell Reports,1991,10(1):1-6.

    [6]王興珍,林國梁,賴 勇,等. 西北地區(qū)特色大麥品種成熟胚離體培養(yǎng)的初步研究[J]. 麥類作物學(xué)報,2013,33(2):286-289.

    [7]Han Y,Jin X L,Wu F B,et al. Genotypic differences in callus induction and plant regeneration from mature embryos of barley (Hordeum vulgare L.)[J]. Journal of Zhejiang University-Science B,2011,12(5):399-407.

    [8]李和平,王 韜,黃 濤,等. 不同大麥品種成熟胚愈傷誘導(dǎo)與分化研究[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2007,26(5):599-602.

    [9]李靜雯,張正英,李淑潔,等. 啤酒大麥幼胚愈傷組織誘導(dǎo)和植株高效再生[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(10):4375-4377,4470.

    [10]李文澤,胡 含. 培養(yǎng)基成份對大麥花粉植株高頻率再生的影響[J]. 萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報,1991,8(3):175-180.

    [11]陳升位,陳疏影,趙志萍,等. 品種基因型和2,4-D濃度對青稞成熟胚出愈率的影響[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2012(6):777-782.

    [12]郭曉琳,張紅偉,劉欣潔,等. 大麥成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)和植株再生的研究[J]. 植物遺傳資源學(xué)報,2005,6(4):418-422.

    [13]付鳳玲,馮質(zhì)雷,渠柏艷,等. 玉米未成熟胚胚性愈傷組織誘導(dǎo)率與內(nèi)源激素含量的關(guān)系[J]. 核農(nóng)學(xué)報,2006,20(1):10-14.

    [14]張智奇. 蔗糖濃度、激素配比及不同培養(yǎng)方式對水稻胚性愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)[J]. 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報,1991,7(3):16-22.

    [15]王 卉,阮義理. 大麥成熟胚培養(yǎng)及其影響因素[J]. 大麥科學(xué),1993(2):17-19.

    [16]晨 卉. 王艷芳,等. 五種菊花近緣植物組織培養(yǎng)研究[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2009,32(3):30-35.

    [17]雷加容,余金龍,余 敖.甘薯的組織培養(yǎng)[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2006,41(1):113-115.

    [18]翁 浩,賴鐘雄. 不同因素對金花茶體胚成熟的影響研究[J]. 園藝與種苗,2013(7):29-34.張雨欣,高 秋,逄洪波,等. 小白鼠6種組織部位總DNA不同提取方法的比較[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(10):47-50.

    猜你喜歡
    青稞
    半碗青稞面
    青稞地里的母親
    大師教你做藏餐《牦牛肉炒青稞》
    這一次我又寫到青稞
    翠苑(2019年4期)2019-11-11 04:27:26
    4種保水劑在青稞上的增產(chǎn)效果對比試驗
    外源鉛脅迫對青稞生長及鉛積累的影響
    干旱脅迫下青稞全基因組可變剪切分析
    青稞淀粉研究現(xiàn)狀
    青稞酸奶加工工藝初探
    “藏青2000”青稞新品種示范推廣的成效與做法
    西藏科技(2016年8期)2016-09-26 09:00:24
    午夜91福利影院| 日本精品一区二区三区蜜桃| 午夜影院日韩av| 久久久久久久久免费视频了| 热99re8久久精品国产| 狠狠狠狠99中文字幕| 男女午夜视频在线观看| 亚洲成人久久性| 怎么达到女性高潮| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| www国产在线视频色| 亚洲五月婷婷丁香| 超色免费av| 69精品国产乱码久久久| 国产区一区二久久| 9色porny在线观看| 国产免费男女视频| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲美女黄片视频| a级片在线免费高清观看视频| 露出奶头的视频| 日韩av在线大香蕉| 精品国产一区二区久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 午夜日韩欧美国产| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜视频精品福利| 黄色女人牲交| 久久久精品欧美日韩精品| 电影成人av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 黄频高清免费视频| 久9热在线精品视频| 在线av久久热| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 18禁国产床啪视频网站| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美中文日本在线观看视频| 看免费av毛片| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 1024香蕉在线观看| 日韩av在线大香蕉| 欧美成人免费av一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 国产视频一区二区在线看| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产黄色免费在线视频| 校园春色视频在线观看| 亚洲专区字幕在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久精品91无色码中文字幕| 高清av免费在线| 美女福利国产在线| 午夜视频精品福利| 91精品三级在线观看| 日韩av在线大香蕉| 成熟少妇高潮喷水视频| 午夜福利影视在线免费观看| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 美国免费a级毛片| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲成人久久性| 午夜a级毛片| videosex国产| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产成人啪精品午夜网站| 久久精品国产综合久久久| 一级a爱视频在线免费观看| 午夜免费成人在线视频| videosex国产| 精品国产一区二区久久| 国产成人精品久久二区二区免费| 精品电影一区二区在线| 国产黄a三级三级三级人| 免费看十八禁软件| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 啦啦啦免费观看视频1| 久久久久久大精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 午夜福利一区二区在线看| av在线天堂中文字幕 | 欧美中文综合在线视频| 日韩精品中文字幕看吧| av在线播放免费不卡| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 一级毛片女人18水好多| 999精品在线视频| 国产av一区二区精品久久| 久久人妻熟女aⅴ| 国产极品粉嫩免费观看在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日韩成人在线观看一区二区三区| 午夜亚洲福利在线播放| 男人操女人黄网站| 成人三级做爰电影| 在线观看舔阴道视频| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲全国av大片| 88av欧美| www.www免费av| 欧美成人免费av一区二区三区| av电影中文网址| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品日韩av在线免费观看 | 嫁个100分男人电影在线观看| 午夜久久久在线观看| 不卡av一区二区三区| av中文乱码字幕在线| 成人免费观看视频高清| 美女 人体艺术 gogo| 久久青草综合色| 亚洲三区欧美一区| 亚洲久久久国产精品| 久久精品成人免费网站| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 午夜精品在线福利| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 妹子高潮喷水视频| 成年人免费黄色播放视频| 大香蕉久久成人网| 一级毛片女人18水好多| 国产深夜福利视频在线观看| 日韩欧美免费精品| 亚洲欧美精品综合久久99| 高清欧美精品videossex| 亚洲伊人色综图| 国产黄a三级三级三级人| 成人黄色视频免费在线看| 精品久久久久久久久久免费视频 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日日干狠狠操夜夜爽| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 99热国产这里只有精品6| 欧美成人免费av一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 在线观看免费日韩欧美大片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 宅男免费午夜| 91国产中文字幕| 国产精品一区二区在线不卡| 国产高清视频在线播放一区| 午夜福利在线免费观看网站| 首页视频小说图片口味搜索| 色老头精品视频在线观看| 99re在线观看精品视频| 久久精品91无色码中文字幕| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 午夜视频精品福利| 香蕉丝袜av| 操美女的视频在线观看| 老司机亚洲免费影院| 亚洲美女黄片视频| a级毛片在线看网站| 国产精品 欧美亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 在线永久观看黄色视频| 国产黄色免费在线视频| 日日爽夜夜爽网站| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产精品 国内视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 超碰成人久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 香蕉国产在线看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 嫩草影视91久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产精品久久久久成人av| 色在线成人网| av网站免费在线观看视频| 多毛熟女@视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 丰满的人妻完整版| 1024视频免费在线观看| 一级毛片女人18水好多| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲七黄色美女视频| 老司机福利观看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久狼人影院| 桃红色精品国产亚洲av| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲一区二区三区欧美精品| 日日爽夜夜爽网站| 国产又爽黄色视频| 两性夫妻黄色片| 日日爽夜夜爽网站| 欧美在线黄色| 久久午夜亚洲精品久久| 精品久久久精品久久久| av视频免费观看在线观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲精品在线观看二区| 久久99一区二区三区| 高清av免费在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 色综合站精品国产| 一级片'在线观看视频| 麻豆成人av在线观看| 久久中文看片网| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 大香蕉久久成人网| 精品国产国语对白av| 搡老岳熟女国产| 亚洲五月天丁香| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲 国产 在线| 日韩视频一区二区在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲五月天丁香| 黄色a级毛片大全视频| 自线自在国产av| 国产亚洲精品久久久久5区| 午夜成年电影在线免费观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲九九香蕉| 天堂影院成人在线观看| 韩国精品一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 高潮久久久久久久久久久不卡| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 9色porny在线观看| 波多野结衣高清无吗| 精品免费久久久久久久清纯| 搡老乐熟女国产| 丝袜在线中文字幕| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 正在播放国产对白刺激| 最好的美女福利视频网| www.www免费av| 可以在线观看毛片的网站| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 免费少妇av软件| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 高清av免费在线| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美日韩乱码在线| 日韩大尺度精品在线看网址 | 一级a爱片免费观看的视频| 日韩高清综合在线| 咕卡用的链子| 岛国视频午夜一区免费看| 性少妇av在线| 动漫黄色视频在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久久久久久久免费视频了| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 免费日韩欧美在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看 | 搡老乐熟女国产| 麻豆成人av在线观看| 五月开心婷婷网| 成熟少妇高潮喷水视频| 成人国产一区最新在线观看| 超色免费av| 欧美乱码精品一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 日本wwww免费看| 757午夜福利合集在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 成人国语在线视频| 久久久久久人人人人人| 亚洲一区二区三区欧美精品| 中文字幕精品免费在线观看视频| 日本黄色日本黄色录像| √禁漫天堂资源中文www| 少妇粗大呻吟视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一区二区三区国产精品乱码| 久久精品国产清高在天天线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美日韩黄片免| 亚洲九九香蕉| 亚洲色图综合在线观看| 国产av在哪里看| av超薄肉色丝袜交足视频| 可以在线观看毛片的网站| 精品一品国产午夜福利视频| av片东京热男人的天堂| 色哟哟哟哟哟哟| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产成人av激情在线播放| 免费少妇av软件| 久久香蕉激情| 女同久久另类99精品国产91| 51午夜福利影视在线观看| 国产99久久九九免费精品| avwww免费| 欧美日韩一级在线毛片| 少妇 在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产人伦9x9x在线观看| 美女午夜性视频免费| 久久香蕉激情| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 91精品三级在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 黑人操中国人逼视频| 亚洲,欧美精品.| 国产成人影院久久av| 国产日韩一区二区三区精品不卡| av欧美777| 热99re8久久精品国产| 黄色成人免费大全| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 91精品国产国语对白视频| 久热这里只有精品99| 精品无人区乱码1区二区| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产有黄有色有爽视频| 真人做人爱边吃奶动态| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美成人免费av一区二区三区| 精品电影一区二区在线| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美成人午夜精品| 欧美成人性av电影在线观看| 香蕉久久夜色| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 成人18禁在线播放| 国产不卡一卡二| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲av第一区精品v没综合| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美亚洲日本最大视频资源| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 美女午夜性视频免费| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲 国产 在线| 国产色视频综合| 国产精品国产高清国产av| 免费高清在线观看日韩| 美女福利国产在线| www.999成人在线观看| 伦理电影免费视频| 精品一区二区三卡| 欧美黄色淫秽网站| 久久久久久人人人人人| 一区在线观看完整版| 水蜜桃什么品种好| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 高清欧美精品videossex| 五月开心婷婷网| 国产在线精品亚洲第一网站| 丰满的人妻完整版| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品久久久av美女十八| 免费不卡黄色视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美乱妇无乱码| 一级黄色大片毛片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 99国产精品一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 免费观看精品视频网站| 18禁国产床啪视频网站| 国产高清国产精品国产三级| 日韩欧美一区视频在线观看| 人妻久久中文字幕网| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品电影一区二区在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产精华一区二区三区| 动漫黄色视频在线观看| 青草久久国产| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久精品成人免费网站| 女同久久另类99精品国产91| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产精品久久久久成人av| 黄色视频,在线免费观看| 中文字幕av电影在线播放| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲情色 制服丝袜| 国产欧美日韩一区二区三| www.精华液| 精品一区二区三卡| 一级片'在线观看视频| 久久人人精品亚洲av| 老司机午夜十八禁免费视频| 91字幕亚洲| 两性夫妻黄色片| 亚洲中文字幕日韩| 国产色视频综合| 九色亚洲精品在线播放| 90打野战视频偷拍视频| 高清在线国产一区| 国产精品国产av在线观看| 在线观看日韩欧美| 国产精品一区二区精品视频观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 成在线人永久免费视频| 麻豆一二三区av精品| 18禁国产床啪视频网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 午夜福利一区二区在线看| 午夜成年电影在线免费观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产精品一区二区在线不卡| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 宅男免费午夜| 久久国产精品人妻蜜桃| 岛国视频午夜一区免费看| 久久热在线av| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产熟女午夜一区二区三区| 午夜视频精品福利| 无人区码免费观看不卡| 国产av在哪里看| 极品人妻少妇av视频| av天堂在线播放| 午夜老司机福利片| 99久久人妻综合| 麻豆国产av国片精品| 老汉色∧v一级毛片| 麻豆国产av国片精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久精品成人免费网站| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲成人久久性| 久久久国产成人免费| 国产高清视频在线播放一区| 国产成人av教育| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 99久久国产精品久久久| 波多野结衣高清无吗| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲自拍偷在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 波多野结衣av一区二区av| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美在线黄色| svipshipincom国产片| 国产欧美日韩一区二区三| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日韩欧美三级三区| 国产99久久九九免费精品| 美女高潮到喷水免费观看| 看黄色毛片网站| 淫秽高清视频在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| а√天堂www在线а√下载| 免费日韩欧美在线观看| 一级片免费观看大全| 国产精品免费视频内射| 青草久久国产| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 美女 人体艺术 gogo| 男女午夜视频在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 丰满的人妻完整版| 高潮久久久久久久久久久不卡| 黄色视频不卡| 精品高清国产在线一区| 中文字幕人妻丝袜制服| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲av第一区精品v没综合| 曰老女人黄片| 1024视频免费在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 色在线成人网| 国产激情久久老熟女| 久久天堂一区二区三区四区| 日韩大尺度精品在线看网址 | 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 手机成人av网站| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产成人欧美| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲美女黄片视频| 午夜久久久在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 窝窝影院91人妻| 国产免费现黄频在线看| 欧美性长视频在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产高清videossex| 免费在线观看完整版高清| 日日爽夜夜爽网站| 丝袜美腿诱惑在线| 曰老女人黄片| 91国产中文字幕| 999久久久国产精品视频| 亚洲免费av在线视频| 欧美在线黄色| 91大片在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 热re99久久国产66热| 51午夜福利影视在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲中文字幕日韩| 交换朋友夫妻互换小说| a级毛片黄视频| a在线观看视频网站| 午夜视频精品福利| x7x7x7水蜜桃| 啦啦啦免费观看视频1| 成人18禁在线播放| www.999成人在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美国产精品va在线观看不卡| 长腿黑丝高跟| www.熟女人妻精品国产| 国产三级在线视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 成年版毛片免费区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日本黄色日本黄色录像| 黄片播放在线免费| 一进一出好大好爽视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品人妻1区二区| 后天国语完整版免费观看| 久久久久久久久中文| 国产午夜精品久久久久久| 91老司机精品| 日韩欧美一区视频在线观看| 女警被强在线播放| 老汉色∧v一级毛片| 香蕉国产在线看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产精品 国内视频| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 视频区图区小说| 久久精品91蜜桃| 丝袜人妻中文字幕| 麻豆成人av在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美日韩黄片免| 亚洲免费av在线视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 一区二区三区国产精品乱码| 69av精品久久久久久| 精品国产亚洲在线| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品电影一区二区三区| а√天堂www在线а√下载| 日本黄色视频三级网站网址| 在线观看免费日韩欧美大片| 日韩免费av在线播放| 成人亚洲精品av一区二区 | 女人精品久久久久毛片| av视频免费观看在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 国产一区二区在线av高清观看| 香蕉久久夜色| 丝袜人妻中文字幕| 自线自在国产av| 人妻久久中文字幕网| 亚洲av成人av| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产成人影院久久av| 99国产极品粉嫩在线观看| 在线播放国产精品三级| 久久久久久大精品| 一二三四在线观看免费中文在|