分析不同化學(xué)藥物中有關(guān)物質(zhì)的分析方法

周之鴿(江蘇省蘇州市東曜藥業(yè)有限公司，江蘇 蘇州 215126)

化學(xué)藥物中的有關(guān)物質(zhì)對(duì)于藥品的純度有著重要的影響，會(huì)造成藥物療效的降低，甚至?xí)?duì)人體產(chǎn)生危害或者發(fā)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)?；瘜W(xué)藥物中的有關(guān)物質(zhì)多是有機(jī)物，其來(lái)源主要是藥物制備過(guò)程中的中間物。

1 HPLC法分析安乃近中的有關(guān)物質(zhì)

1.1 儀器和試劑材料準(zhǔn)備

HPLC法分析需要使用的儀器主要有:HPLC儀、電子天平和pH試紙，需要使用的試劑包含甲醇，三乙胺、超純水和磷酸二氫鈉二水合物。

1.2 溶液制備

精密稱(chēng)取安乃近樣品50mg放入10mL的容量瓶中，然后用無(wú)水甲醇溶解，并稀釋到刻度，制成濃度為5mg/mL的溶液樣本，作為供試品溶液。溶液需要隨用隨配，不能用放置許久的樣品。另精密稱(chēng)取4-N-去甲基安乃近5mg放入到200mL的容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，搖勻，制成濃度為2.5ug/mL的溶液樣本，作為對(duì)照溶液[1]。

1.3 色譜工作條件

色譜柱狀態(tài)為ODSC184.6*150mm,5um，HPLC儀的檢測(cè)波長(zhǎng)控制在254nm，流動(dòng)相內(nèi)的甲醇與磷酸鹽緩沖液(1000mL濃度為6.0g/L的磷酸二氫鈉二水合物，加入1mL的三乙胺，并用高濃度氫氧化鈉將pH值調(diào)為7)的比例為25:75，流速為1.0mL/min,進(jìn)樣量為 10ul。

1.4 進(jìn)樣

在上述色譜儀條件下，取供試品溶液和對(duì)照溶液10ul，按藥典規(guī)定，分別注入到HPLC儀中，得到的色譜圖分別如圖1和圖2。

將圖1與圖2對(duì)比可得，4-N去甲基安乃近發(fā)生時(shí)間在6分鐘左右，因此，由圖1和圖2綜合可得安乃近樣品所含的雜質(zhì)種類(lèi)，具體如圖3所示，且4-N去甲基安乃近的波峰已確定。

圖1 :安乃近樣品(供試品溶液)色譜圖

圖2 :安乃近樣品(對(duì)照溶液)色譜圖

圖3 :安乃近樣品所含雜質(zhì)色圖譜

圖4 :甲酰氨基安替比林色譜圖

據(jù)圖3可知，色圖譜中還存在未知雜質(zhì)1和未知雜質(zhì)2，根據(jù)安乃近生成過(guò)程中的有關(guān)物質(zhì)，可以確定這兩種未知雜質(zhì)分別可能為甲酰氨基安替比林和氨基安替比林。在HPLC儀工作條件不變的情況下，取合成中間體甲酰氨基安替比林、氨基安替比林進(jìn)行色譜分析，可以分別得到圖4、圖5的色譜圖，再將適量的兩種物質(zhì)同時(shí)加入到安乃片樣品中，可以得到兩種對(duì)照品的色譜圖(圖4)[2]。

圖5 :氨基安替比林色譜圖

圖6 :安乃近加入兩種對(duì)照品后的色譜圖

根據(jù)色譜圖4、5、6對(duì)比分析可以得出:兩個(gè)未知雜質(zhì)的保留時(shí)間與甲酰胺基安替比林和氨基安替比林完全一致；再對(duì)圖4進(jìn)行分析，明顯可以看出在加入兩種對(duì)照品后，原有的兩種雜質(zhì)色譜波峰出現(xiàn)明顯的升高。據(jù)此兩點(diǎn)可以判定安安乃近中的兩種未知雜質(zhì)分別是甲酰胺基安替比林和氨基安替比林。

2 UPLC法分析三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液的有關(guān)物質(zhì)

2.1 儀器和試劑材料準(zhǔn)備

UPLC法分析需要使用的儀器主要有:UPLC儀、電子天平，需要使用的試劑包含枸櫞酸、枸櫞酸鈉、四丁基溴化銨以及濃度為10%的四丁基氫氧化銨溶液、超純水。

2.2 溶液制備

酸破壞溶液:三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液10mL，加入1毫升2mol/l的HCL溶液，沸水中放2h，取出冷卻后將pH值調(diào)為6.5，加入10mL水。

堿破壞溶液，三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液10mL，加入1毫升3mol/l的NaOH溶液,在沸水中放2h，取出冷卻后將pH值調(diào)為6.5，再加入10mL水。

氧化破壞溶液:三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液10mL，加入1毫升30%的過(guò)氧化氫溶液,在沸水中放2h，取出冷卻后將pH值調(diào)為6.5，再加入10mL水。

氧化破壞空白溶液:取1毫升30%的過(guò)氧化氫溶液,加水10mL,在沸水中放2h，取出冷卻后將pH值調(diào)為6.5，再加入10mL水。

高溫破壞溶液:三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液10mL,在沸水中放4h，取出冷卻再加入10mL水。

2.3 色譜工作條件

色譜柱狀態(tài)為HSS T3 50mm*2.1nm,1.8um，UPLC儀的檢測(cè)波長(zhǎng)控制在280nm，流動(dòng)相為枸櫞酸鹽緩沖液(取9.76g枸櫞酸和1.03g枸櫞酸鈉到1000mL容器中，先加900mL的水進(jìn)行溶解，并將pH值調(diào)為3.0，再加入2.5mL10%濃度的四丁基氫氧化銨,最后加水到刻度)，流速為1.0mL/min,進(jìn)樣量為10ul，柱溫25℃[3]。

2.4 進(jìn)樣

在上述色譜儀條件下，分別取各種溶液10ul，按藥典規(guī)定，分別注入到UPLC儀中，得到的色譜圖分別如下:

據(jù)圖分析可得，三磷酸胞苷二鈉氯化鈉的主要成分保留時(shí)間在14.7min，通過(guò)酸、堿、高溫和氧化破壞后，各種有關(guān)物質(zhì)能夠與主峰產(chǎn)生較好的分離，根據(jù)專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)，可以確定其有關(guān)物質(zhì)分別為一磷酸胞苷二鈉和二磷酸胞苷二鈉[4]。

3 結(jié)語(yǔ)

隨著人們生活水平的日益提高和健康意識(shí)的逐步提升，對(duì)于藥物的質(zhì)量要求也會(huì)越來(lái)越高，因此，必須加強(qiáng)對(duì)化學(xué)藥物中有關(guān)成分的判定與分析，以控制其含量，提高化學(xué)藥物的質(zhì)量。HPLC和UPLC作為化學(xué)藥物有關(guān)物質(zhì)判定的有效方法，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)兩種方法的了解與掌握，提高有關(guān)物質(zhì)分析的效率。

[1]黃紅深.安乃近有關(guān)物質(zhì)檢查[J].北方藥學(xué),2011,(02):7-8.

[2]李濤,胡昌勤,畢開(kāi)順.洛伐他汀有關(guān)物質(zhì)HPLC分析方法的優(yōu)化[J].藥物分析雜志,2011,(09):1707-1714.

[3]雷勇勝,宋麗明,蔣慶峰.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在藥物的有關(guān)物質(zhì)分析中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代儀器,2011,(04):9-13+8.

[4]張彤,周長(zhǎng)明,韓南銀.HPLC法測(cè)定三磷酸胞苷二鈉注射液的有關(guān)物質(zhì)和含量[J].藥物分析雜志,2013,(01):154-158.