兒骨強顆粒治療佝僂病大鼠的實驗研究※

羅軒紅 陳小麗 涂小玲 陳 文

（1江西省南昌市東湖區(qū)婦幼保健所藥劑科，南昌330008；2江西中醫(yī)藥高等?？茖W校藥學系，撫州334000）

兒骨強顆粒治療佝僂病大鼠的實驗研究※

羅軒紅1陳小麗1涂小玲1陳 文2

（1江西省南昌市東湖區(qū)婦幼保健所藥劑科，南昌330008；2江西中醫(yī)藥高等?？茖W校藥學系，撫州334000）

目的觀察兒骨強顆粒對大鼠佝僂病的治療作用。方法以暗室和飼喂維生素D缺乏飼料復制大鼠佝僂病模型。給予兒骨強顆粒治療一個月，檢測佝僂病大鼠血鈣、血磷和血堿性磷酸酶，骨干、灰重，骨鈣及觀察骨組織病理學變化。結(jié)果兒骨強顆粒治療組大鼠較模型組血鈣明顯升高，血磷、血堿性磷酸酶下降（P＜0.05，P＜0.01），骨干重、灰重增加，骨鈣升高，骨組織切片觀察接近正常對照組。結(jié)論兒骨強顆粒對佝僂病有明顯治療效果。

佝僂?。粌汗菑婎w粒；血鈣；血磷；中成藥療法

兒骨強顆粒系本課題組參考傳統(tǒng)經(jīng)典方劑和臨床經(jīng)驗方，結(jié)合現(xiàn)代中藥藥理研究成果，自行設計組方研制的兒童佝僂病制劑。兒骨強顆粒以中醫(yī)“腎主骨”理論為指導，以滋補肝腎，益髓健骨、健脾益氣中藥熟地黃，山萸肉、山藥、茯苓、黃芪配合天然補鈣中藥煅牡蠣粉和富含維生素D的雞蛋黃粉等藥，發(fā)揮中藥補腎健骨益精生髓作用的優(yōu)勢，先天后天兼顧，標本兼治。本實驗觀察了兒骨強顆粒對大鼠佝僂病的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物SD雄性幼年清潔級大鼠60只，21 d齡斷奶，體重（45±3）g，購自南昌大學醫(yī)學院實驗動物中心。

1.2 藥品及試劑兒骨強顆粒，為本課題組自行研制，處方藥物組成為熟地黃，山藥、山萸肉、茯苓、黃芪、煅牡蠣粉、雞蛋黃粉、維生素D、葡萄糖酸鈣等。龍牡壯骨顆粒武漢健民藥業(yè)集團股份有限公司產(chǎn)品，批號：20140601。

1.3 維生素D缺乏配方飼料玉米粉76%、麥麩20%、碳酸鈣3%、含碘鹽1%、賴氨酸0.5%以及各種B族維生素。

1.4 儀器AS9862乙炔火焰原子吸收光譜儀，北京普析通用儀器有限公司；752型紫外分光光度計，上海光學儀器一廠。

1.5 方法

1.5.1 佝僂病模型制備SD雄性幼年清潔級大鼠60只，21 d齡斷奶，體重（45±3）g，隨機分為正常對照組10只和實驗組50只。正常對照組常規(guī)飼養(yǎng)。實驗組置暗室喂養(yǎng)，喂以缺維生素D飼料。連續(xù)30 d制成佝僂病大鼠模型［1］。

1.5.2 治療方法將成模的50只實驗組大鼠隨機分為模型組，兒骨強顆粒高、中、低劑量組、龍牡壯骨顆粒組，每組10只，各給藥組分別灌胃給予相應劑量的藥物，模型組灌胃等體積蒸餾水。除10只正常對照組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)外，其余各組大鼠繼續(xù)置暗室喂養(yǎng)，喂以缺維生素D飼料。治療1個月后將動物處死。檢測各項指標。

1.5.3 指標測定

1.5.3.1 血清鈣、磷、堿性磷酸酶（AKP）實驗結(jié)束時以3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉動物，頸動脈取血，分離血清，用EDTA滴定法檢測血清鈣（Ca），抗壞血酸還原法檢測血清磷（P），磷酸對硝基苯基質(zhì)動力學法檢測血清堿性磷酸酶AKP）。

1.5.3.2 股骨干重、灰重及骨鈣含量取大鼠左側(cè)股骨用氯仿、甲醇（2∶1）混合液脫脂后，置于120℃烘箱中干燥6 h，稱其干重；然后置于馬福爐中800℃灰化6 h，稱其灰重；將灰粉溶于6N鹽酸中，原子吸收光度法測定骨鈣含量。

1.5.3.3 骨組織病理學檢查取右脛骨用10%福爾馬林固定10%EDTA脫鈣石蠟包埋HE染色切片，進行組織病理學觀察。

1.5.4 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)以（x±s）表示，經(jīng)方差分析進行統(tǒng)計學處理。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清鈣、磷、堿性磷酸酶（AKP）含量的測定結(jié)果見表1。

表1 大鼠血清鈣、磷、堿性磷酸酶含量（±s）

表1 大鼠血清鈣、磷、堿性磷酸酶含量（±s）

注：與正常組比較**P＜0.01；與模型組比較#P＜0.05；##＜P＜0.01

血堿性磷酸酶（U/L）正常對照組1.89±0.14 175.6±11.5組別劑量（g/kg）只數(shù)10血鈣（mmol/L）3.22±0.26血磷（mmol/L）10 2.31±0.19**龍牡壯骨顆粒6.0 10 2.89±0.16#2.12±0.15##188.3±15.8##模型組2.85±0.18**282.3±19.6**兒骨強顆粒12.0 10 3.12±0.17##1.93±0.16##179.4±16.8##6.0 10 2.98±0.11##1.97±0.11##178.5±14.2##3.0 10 2.92±0.12##2.32±0.12#189.5±17.3##

表1可見，與正常組相比模型組血鈣含量明顯降低、血磷和血堿性磷酸酶含量明顯升高（P＜0．01），與模型組相比較，兒骨強顆粒各劑量組大鼠血鈣顯著升高（P＜0．01）、血磷和血堿性磷酸酶含量顯著降低（P＜0．05，P＜0．01）。

2.2 大鼠股骨干重、灰重及骨鈣含量的測定結(jié)果見表2

表2 大鼠股骨干重、灰重及骨鈣含量（±s）

表2 大鼠股骨干重、灰重及骨鈣含量（±s）

注：與正常組比較**P＜0.01；與模型組比較#P＜0.05；##＜P＜0.01

?

表2結(jié)果顯示，與正常組比較，佝僂病模型組大鼠股骨干重、灰重及骨鈣含量顯著降低（P＜0．O1）；與模型組比較，兒骨強顆粒各劑量組大鼠股骨干重、灰重及骨鈣顯著增高（P＜0．05，P＜0．01）。

2.3 骨組織病理切片觀察結(jié)果正常對照組骺板厚度均勻，骨化線整齊，增生層肥大軟骨細胞柱排列整齊。模型組骨骺端鈣化障礙而形成大量軟骨細胞增殖和骨樣組織堆積，骨密度稀疏，骺板厚薄不一，骨化線不規(guī)則，兒骨強顆粒各劑量組鏡下所見與正常對照組相似，軟骨細胞的增殖及骨密度均接近正常對照組。

3 討論

佝僂病是一種常見的小兒疾病，特征為鈣、磷代謝失調(diào)和骨骼改變，為我國重點防治的四大嬰幼兒疾病之一［2］。

從實驗結(jié)果可知，兒骨強顆粒對大鼠佝僂病有良好治療作用。兒骨強顆粒由熟地黃，山藥、山萸肉、茯苓、黃芪、煅牡蠣粉等藥物組成。其組方思路按照中醫(yī)關于腎主骨的理論，從滋補肝腎入手［3］。方中熟地黃，山萸肉滋補肝腎，益精填髓以培固先天之本。煅牡蠣富含天然活性鈣質(zhì)，雞蛋黃粉富含天然維生素D。黃芪、山藥益氣健脾以促進鈣和維生素D的吸收。諸藥配伍，標本兼治，實驗證明該制劑治療佝僂病獲得良好效果。

［1］繆朝玉，朱銓英，唐惠蘭，等.佝僂病大鼠和小鼠模型［J］.中國藥理學通報，1996，12（3）：280-282.

［2］汪翼.兒科學［M］.5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：44．

［3］葉維建，范定懷，鄭玉濤.滋補肝腎中藥預防和治療大鼠佝僂病的實驗研究［J］.濟寧醫(yī)學院學報，2004，27（3）：72-73.

Ex perim entalStudy of Erguqiang Granu lar in the Treatm en t o f Rickets Rats

LUOXuanhong1，CHENXiaoli1，TU Xiaoling1，CHENWen2
（1.Department of Pharmacy，TheMaternaland Child CareServiceCentre of Donghu District，Nanchang330008，China；2.School of Pharmacy，JiangxiCollege of TraditionalChineseMedicine，F(xiàn)uzhou344000，China）

Objective To investigate the therapeutic effect of Erguqiang granular in the treatment of rickets rats.M ethods The experimental ricketsmodel ratswere induced by feeding vitamin D deficiency diet in darkroom.The rickets ratswere intervened with Erguqiang granular for 30 days.The blood calcium，serium inorganic phosphorus and serum alkaline phosphatase of rats were checked.The diaphysis，ash weight and histopathologic changes of bone were observed.Results The blood calcium of the treatment groups increased markedly，and serium inorganic phosphorus and serum alkaline phosphatase decreased markedly than those of themodel group（P＜0．05，P＜0.01）.The diaphysis，ash weight and bone calcium of the treatment group increased，and the bony tissue pathological section of the treatment groups were close to normal control group.Conclusion Erguqiang granular in the treatment of ricketshad obviously therapeutic effect.

rickets；Erguqiang granular；blood calcium；serium inorganic phosphorus；therapy of traditional Chinese medicine patent prescription

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.11.074

1672-2779（2015）-11-0146-02

：張文娟本文校對：徐紅

2015-04-17）

江西省南昌市指導性科技計劃項目（No：洪科發(fā)計字［2013］210號）