Galectin-3、CK19、CD56和 TPO聯(lián)合檢測(cè)鑒別甲狀腺乳頭狀癌與良性乳頭狀增生

龔圣勇肖 陽(yáng)宋 芳魏萬(wàn)敏田 龍陳洪雷

（1湖北省谷城縣人民醫(yī)院病理科，谷城 441700；2武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，武漢430071）

Galectin-3、CK19、CD56和 TPO聯(lián)合檢測(cè)鑒別甲狀腺乳頭狀癌與良性乳頭狀增生

龔圣勇1肖 陽(yáng)1宋 芳1魏萬(wàn)敏1田 龍1陳洪雷2

（1湖北省谷城縣人民醫(yī)院病理科，谷城 441700；2武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，武漢430071）

目的 探討 Galectin-3、CK19、CD56、TPO聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺乳頭狀癌與良性乳頭狀增生鑒別診斷中的價(jià)值。方法 采用免疫組織化學(xué) EnVision兩步法檢測(cè)30例甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）及30例良性乳頭狀增生（benign papillary hyperplasisa，BPH）中Galectin-3、CK19、CD56、TPO的表達(dá)。結(jié)果 Galectin-3、CK19、CD56、TPO在 PTC的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%、100%、6.7%、13.3%，在BPH中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為10%、43.3%、73.3%、100%，四者在甲狀腺乳頭狀癌與良性乳頭狀增生中的陽(yáng)性表達(dá)率有顯著性差異。Galectin-3、CK19、CD56、TPO用于 PTC診斷時(shí)的靈敏度分別是100%、100%、6.7%、13.3%，特異度分別是90%、56.7%、26.7%、0，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)靈敏度及特異度分別為100%，96.7%；用于 BPH診斷時(shí)靈敏度分別是 10%、43.3%、73.3%、100%，特異度分別是 0、0、93.3%、86.7%，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)靈敏度及特異度分別是73.3%、100%。結(jié)論 Galectin-3、CK19、CD56、TPO聯(lián)合檢測(cè)可應(yīng)用于甲狀腺乳頭狀癌與良性乳頭狀增生的鑒別診斷，并能顯著提高病理診斷的準(zhǔn)確性。

甲狀腺乳頭狀癌；Galectin-3；CK19；CD56；TPO；免疫組化

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，主要發(fā)生在年輕人和中年人，女性較男性發(fā)病率高。對(duì)甲狀腺癌早期正確診斷和及時(shí)治療可以最大程度地提高患者的生存率，延長(zhǎng)生存時(shí)間。甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）起源于濾泡上皮細(xì)胞，是甲狀腺癌中最常見(jiàn)的病理組織學(xué)類(lèi)型，占甲狀腺惡性腫瘤的70%～80%。典型 PTC的診斷并無(wú)困難，但對(duì)某些形態(tài)學(xué)不典型的病例，在與良性乳頭狀增生（benign papillary hyperplasisa，BPH）鑒別時(shí)仍有一定的困難，其結(jié)果直接影響到臨床治療及預(yù)后。為了進(jìn)一步認(rèn)識(shí)該疾病、減少誤診，我們采用免疫組化法觀察分析Galectin-3、CK19、CD56和 TPO在PTC與BPH中的表達(dá)水平，探討四者聯(lián)合應(yīng)用在甲狀腺乳頭狀癌與良性乳頭狀增生鑒別診斷中的價(jià)值，為解決診斷中的困擾提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材料和方法

1.材料

選取谷城縣人民醫(yī)院病理科 2012～2015年診斷的 60例甲狀腺手術(shù)切除標(biāo)本的組織蠟塊，其中PTC 30例，女性27例，男性3例，年齡15～64歲，平均年齡42.28歲，中位年齡42歲；BPH 30例，其中女性29例，男性1例，年齡16～64歲，平均年齡47.64歲，中位年齡50歲。

2.方法

2.1 免疫組織化學(xué)染色

所有標(biāo)本均由 10%中性福爾馬林固定，常規(guī)組織處理，石蠟包埋，切片厚度為3μm。采用免疫組化EnVision兩步法檢測(cè)，每例均選用 Galectin-3、CK19、CD56及 TPO抗體進(jìn)行染色（一抗均為鼠抗人單克隆抗體，稀釋度分別為1∶200、1∶600、1∶50、1∶50，購(gòu)自上海長(zhǎng)島公司；二抗及顯色系統(tǒng)購(gòu)自 DAKO公司，產(chǎn)品編號(hào)：K5007），按試劑說(shuō)明書(shū)操作，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。每組均設(shè)有陰性及陽(yáng)性對(duì)照：用正常組織中血管內(nèi)皮細(xì)胞做為 Galectin-3的陽(yáng)性對(duì)照，胃腺癌做為 CK19的陽(yáng)性對(duì)照，肺小細(xì)胞癌做為CD56的陽(yáng)性對(duì)照，正常甲狀腺組織做為 TPO的陽(yáng)性對(duì)照，用子宮平滑肌瘤做為Galectin-3、CK19、CD56及TPO的陰性對(duì)照；以陽(yáng)性對(duì)照組織呈陽(yáng)性表達(dá)，同時(shí)陰性對(duì)照組織呈陰性表達(dá)判定為染色成功。

2.2 結(jié)果判定

陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色，Galectin-3、CK19和 TPO均定位于細(xì)胞的胞質(zhì)，CD56定位于細(xì)胞膜。根據(jù)Beesley分級(jí)方法，觀察乳頭狀病變區(qū)，按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占百分?jǐn)?shù)并參考著色強(qiáng)度確定分級(jí)：無(wú)著色細(xì)胞或著色細(xì)胞數(shù) ＜10%為陰性，著色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)10%～25%者為（＋），著色細(xì)胞百分?jǐn)?shù) 26%～50%者為（＋＋），著色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)＞50%為（＋＋＋）。＋～＋＋＋均定義為該蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

敏感性＝真陽(yáng)性／（真陽(yáng)性＋假陰性），特異性＝真陰性／（真陰性＋假陽(yáng)性），準(zhǔn)確度＝（真陽(yáng)性＋真陰性）／（所有陽(yáng)性＋所有陰性）。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)均采用 SPSS17.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料用 χ2檢驗(yàn)和四格表精確概率法，P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。

結(jié) 果

Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中陽(yáng)性表達(dá)，定位于細(xì)胞質(zhì)（圖 1），在大多數(shù)良性乳頭狀增生中為陰性（圖2）；CK19在甲狀腺乳頭狀癌中陽(yáng)性表達(dá)，定位于細(xì)胞質(zhì)（圖 3），在多數(shù)良性乳頭狀增生中為陰性（圖4）；CD56在大多數(shù)良性乳頭狀增生中陽(yáng)性表達(dá)，定位于細(xì)胞膜（圖5），在絕大多數(shù)甲狀腺乳頭狀癌中為陰性（圖 6）；TPO在良性乳頭狀增生中陽(yáng)性表達(dá)，定位于細(xì)胞質(zhì)（圖7），在大多數(shù)甲狀腺乳頭狀癌中為陰性（圖8）。

圖1 甲狀腺乳頭狀癌（PTC）Galectin-3（＋＋＋）400倍Fig.1 Papillary thyroid carcinoma（PTC）Galectin-3（＋＋＋）400×

圖2 甲狀腺良性乳頭狀增生（BPH）Galectin-3（－）400倍Fig.2 Thyroid benign Papillary hyperplasisa（BPH）Galectin-3（－）400×

圖3 甲狀腺乳頭狀癌（PTC）CK19（＋＋＋）400倍Fig.3 Papillary thyroid carcinoma（PTC）CK19（＋＋＋）400×

圖4 甲狀腺良性乳頭狀增生（BPH）CK19（－）400倍Fig.4 Thyroid benign Papillary hyperplasisa（BPH）CK19（－）400×

圖5 甲狀腺良性乳頭狀增生（BPH）CD56（＋＋＋）400倍Fig.5 Thyroid benign Papillary hyperplasisa（BPH）CD56（＋＋＋）400×

圖6 甲狀腺乳頭狀癌（PTC）CD56（－）400倍Fig.6 Papillary thyroid carcinoma（PTC）CD56（－）400×

圖7 甲狀腺良性乳頭狀增生（BPH）TPO（＋＋＋）400倍Fig.7 Thyroid benign Papillary hyperplasisa（BPH）TPO（＋＋＋）400×

圖8 甲狀腺乳頭狀癌（PTC）TPO（－）400倍Fig.8 Papillary thyroid carcinoma（PTC）TPO（－）400×

60例甲狀腺手術(shù)切除標(biāo)本中四種抗體的表達(dá)結(jié)果（表1）：Galectin-3在PTC與BPH中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%（30／30）與10%（3／30），差異有顯著性（P＜0.05）；CK19在 PTC與 BPH中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%（30／30）與43.3%（13／30），差異有顯著性（P＜0.05）；CD56在PTC與BPH中的陽(yáng)性率分別為6.7%（2／30）與73.3%（22／30），差異有顯著性（P＜0.05）；TPO在 PTC與 BPH中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為13.3%（4／30）與100%（30／30），差異有顯著性（P＜0.005）。

表1 Galectin-3、CK19、CD56及TPO蛋白在PTC和BPH中的表達(dá)Table 1 Galectin-3、CK19、CD56 and TPO protein expression in PTC and BPH

Galectin-3、CK19、CD56及 TPO蛋白單獨(dú)用于PTC診斷時(shí)的靈敏度分別是 100%、100%、6.7%和13.3%，特異度分別是90%、56.7%、26.7%和0，但聯(lián)合應(yīng)用時(shí)靈敏度及特異度分別是 100%和 96.7%（表2）。四個(gè)蛋白單獨(dú)用于BPH診斷時(shí)靈敏度分別是10%、43.3%、73.3%、100%，特異度分別是0、0、93.3%、86.7%，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)靈敏度及特異度分別是73.3%和100%（表2）。

表2 Galectin-3、CK19、CD56和TPO聯(lián)合檢測(cè)在PTC和BPH中的表達(dá)Table 2 Galectin-3、CK19、CD56 and TPO combined detection in PTC and expression of BPH

討 論

Galectin-3是由氨基酸末端區(qū)和羥基末端糖類(lèi)識(shí)別區(qū)組成的多肽，屬凝集素蛋白家族成員［1］。Finley［2］研究發(fā)現(xiàn)，galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中的靈敏度和特異度分別為93%和 100%，有助于甲狀腺良、惡性乳頭狀增生的鑒別，是一個(gè)有價(jià)值的抗體［3，4］。Cvejic［5］等的研究也支持此觀點(diǎn)。在本實(shí)驗(yàn)中，甲狀腺乳頭狀癌 galectin-3蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率為100%，而良性乳頭狀增生的陽(yáng)性率僅為10%，二者差異有顯著性，進(jìn)一步表明 galectin-3蛋白可用于甲狀腺乳頭狀癌與乳頭狀增生的鑒別診斷。

CK19是一種低分子量細(xì)胞角蛋白，主要存在于單層上皮細(xì)胞中，關(guān)于其在甲狀腺良、惡性增生性病變中的診斷與鑒別作用已有不少報(bào)道［6］。有文獻(xiàn)［7，8］提出 CK19在PTC中多數(shù)呈彌漫強(qiáng)陽(yáng)性，而在BPH中多數(shù)為陰性，即使有表達(dá)也多為局灶弱陽(yáng)性［9，10］。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，CK19在PTC中的陽(yáng)性表達(dá)率為100%（30／30），全部為強(qiáng)陽(yáng)性，在 BPH中陽(yáng)性表達(dá)率為43.3%（13／30），其中強(qiáng)陽(yáng)性?xún)H4例。由此推斷CK19對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的靈敏度高，說(shuō)明CK19對(duì)乳頭狀癌及良性乳頭狀增生有鑒別診斷價(jià)值。

CD56又稱(chēng)神經(jīng)細(xì)胞黏附分子，是一種細(xì)胞表面的唾液酸糖蛋白，是免疫球蛋白家族中的一員，正常表達(dá)于自然殺傷細(xì)胞、肌細(xì)胞、漿液黏液腺，在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、NK細(xì)胞淋巴瘤、皮膚 T細(xì)胞淋巴瘤中也有表達(dá)［11］，其表達(dá)可影響腫瘤細(xì)胞的遷移能力和腫瘤相關(guān)淋巴管的生成，其陽(yáng)性表達(dá)越低，腫瘤惡性程度越高，預(yù)后越差。研究認(rèn)為CD56失表達(dá)有助于PTC的診斷［12］。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，CD56在 PTC中的陽(yáng)性表達(dá)率為 6.7%（2／30），為散在弱陽(yáng)性，在BPH中陽(yáng)性表達(dá)率為73.3%（22／30），兩者差異有顯著性，因此認(rèn)為 CD56可用于 PTC與 BPH的鑒別診斷。

TPO是一種糖基化血紅蛋白，位于甲狀腺細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核周膜與頂膜［13］，參與甲狀腺素合成中甲狀腺球蛋白酪氨酸殘基的碘化和碘化酪氨酸的偶聯(lián)作用。其表達(dá)與濾泡細(xì)胞的組織分化和功能相關(guān)，甲狀腺乳頭狀癌多表達(dá)陰性，甲狀腺良性乳頭狀增生多為陽(yáng)性表達(dá)［14，15］。本研究再次證明絕大多 數(shù)甲狀腺乳頭狀癌病例為陰性，陽(yáng)性表達(dá)率僅為13.3%（4／30），而在甲狀腺良性乳頭狀增生的病倒中陽(yáng)性表達(dá)率為 100%。在病理診斷中對(duì)不能定性的甲狀腺乳頭狀病變，輔以免疫組化測(cè)定組織中TPO蛋白表達(dá)情況，TPO陰性者診斷為乳頭狀癌是比較可靠的。但應(yīng)提出，由于小部分甲狀腺乳頭狀癌具有功能性，可合成和分泌甲狀腺素，故也可表達(dá) TPO。

上述 4種免疫標(biāo)志物應(yīng)用于 PTC的診斷時(shí)，CK19與Galectin-3靈敏度均較高，Galectin-3特異度較高，本實(shí)驗(yàn)中，四個(gè)標(biāo)志物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)靈敏度及特異度達(dá)到最高；用于 BPH的診斷時(shí)，TPO靈敏度較高，CD56與 TPO特異度均較高，四個(gè)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)進(jìn)一步提高了特異度。四者聯(lián)合應(yīng)用，相互取長(zhǎng)補(bǔ)短，可以提高病理診斷的準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)研究為小樣本研究，實(shí)驗(yàn)對(duì)象中未能包括所有類(lèi)型的甲狀腺癌和甲狀腺良性病變，有待進(jìn)一步研究探討它們?cè)?PTC與其他類(lèi)型甲狀腺病變?cè)\斷與鑒別診斷中的作用。由于免疫組化方法存在假陽(yáng)性與假陰性結(jié)果，PTC的診斷仍需以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，在未找到一種特異性標(biāo)記PTC而不標(biāo)記正常甲狀腺組織及其他甲狀腺病變的免疫標(biāo)志物之前，聯(lián)合多種免疫標(biāo)志物檢測(cè)是提高病理診斷準(zhǔn)確性的有效方法。

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Diagnosis of papillary thyroid carcinoma andbenign papillary hyperplasia by combined detection of Galectin-3，CK19，CD56 and TPO proteins

Gong Shengyong1，Xiao Yang1，Song Fang1，Wei Wanmin1，Tian Long1，Chen Honglei2
（1Department of Pathology，the People's Hospital of Gucheng County，Gucheng 441700；2Department of Pathology，College of Basic Medical Science，Wuhan University，Wuhan 430071，China）

Objective To detect the expressions of Galectin-3，CK19，CD56 and TPO proteins in papillary thyroid carcinoma（PTC）and benign papillary hyperplasisa（BPH），and to explore the value of differential diagnosis between them by combined detection of these four markers.Methods EnVision two-step method was used to detect the expressions of Galectin-3，CK19，CD56 and TPO proteins in 30 cases of PTC and 30 cases of BPH.Results Positive rates of Galectin-3，CK19，CD56 and TPO expressions were 100%，100%，6.7%and 13.3%respectively in PTC，and 10%，43.3%，73.3%and 100%respectively in BPH，with significant differences between PTC and BPH（P＜0.05）.The diagnosis sensitivity of Galectin-3，CK19，CD56 and TPO for PTC was 100%，100%，6.7% and 13.3%respectively，and the specificity was 90%，56.7%，26.7%and 0 respectively，while the sensitivity and specificity of combined detection were 100%and 96.7%respectively.The diagnosis sensitivity for BPH was 10%，43.3%，73.3%，100%respectively，and the specificity was 0，0，93.3%，86.7%respectively，while the sensitivity and specificity of combined detection were 73.3%and 100%respectively.Conclusions Combined detection of Galectin-3，CK19，CD56 and TPO markers can contribute to differential diagnosis between PTC and BPH，significantly improving the accuracy of the pathological diagnosis and providing a reliable basis for clinical treatment.

Papillary thyroid carcinoma；Benign papillary hyperplasisa；Galectin-3；Cytokeratin-19；CD56；TPO；Immunohistochemistry

R736.1

A

10.16705／j.cnki.1004-1850.2015.05.003

2015-06-01

2015-09-24

龔圣勇，男（1975年），漢族，主治醫(yī)師