鋅對1～4周齡鵝生長性能、免疫與抗氧化功能及金屬硫蛋白－Ⅰ mRNA表達量的影響

王寶維 陳苗璐 王秉翰 張名愛 葛文華 岳 斌

(1.國家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系營養(yǎng)與飼料研究室，青島 266109;2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所，青島 266109;3.林肯大學(xué)，克萊斯特徹奇 85084，新西蘭)

鋅是動物所必需的微量元素之一，隨著人們對鋅認識的不斷增加，鋅在動物體內(nèi)的轉(zhuǎn)運和作用逐漸被揭開。研究表明，鋅不僅對促進生長，維持免疫器官的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能具有重要作用，而且能夠防止細胞膜氧化、減少超氧陰離子形成，有效地保護機體免受自由基損傷，改善機體健康狀態(tài)［1－3］。鋅還能誘導(dǎo)金屬硫蛋白(metallothionein，MT)的合成，從而調(diào)控其基因的表達。飼糧中鋅的缺乏或過量都會對動物產(chǎn)生不良影響，嚴重時甚至發(fā)病死亡。為此，開展鋅適宜營養(yǎng)需要量研究，探討其對機體免疫與抗氧化功能和MT-Ⅰ mRNA表達量的影響及相互關(guān)系，對科學(xué)地確定鵝飼糧中鋅的需要量具有重要意義。黃艷玲等［4］通過對肉仔雞飼糧鋅適宜水平研究，推薦肉仔雞飼糧鋅的適宜水平為80 mg/kg。孫淑霞等［5］和盧昊等［6］研究表明，飼糧中添加鋅可以提高動物的免疫器官指數(shù)。虞澤鵬等［7］報道，飼糧添加鋅能顯著提高血清銅鋅超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，從而提高機體抗氧化功能。Cousins［8］發(fā)現(xiàn)鋅誘導(dǎo)MT合成主要是通過調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄水平實現(xiàn)的。陳苗璐等［9］研究建議，1～4周齡鵝鋅適宜水平為106.05 mg/kg。上述研究結(jié)果表明，鋅對動物生長發(fā)育和免疫機能具有一定調(diào)控作用，并且飼糧中鋅水平差異區(qū)間較寬。迄今為止，鋅對1～4周齡鵝免疫與抗氧化功能的影響尚未進行系統(tǒng)全面的研究，對MT-ⅠmRNA表達量的研究處于空白。為此，本試驗以1～4周齡青農(nóng)灰鵝(大型鵝)為試驗對象，通過探討不同水平鋅對其生長性能、免疫與抗氧化功能和MT-ⅠmRNA表達量的影響以及相關(guān)性分析，確定在最佳生長性能、免疫與抗氧化功能下飼糧中鋅的適宜水平。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試驗設(shè)計

選用1日齡體重相近健康青農(nóng)灰鵝(法國米朗德、阿蒂蓋品種雜交配套選育而成)360只，設(shè)計6個組(Ⅰ組為對照組，Ⅱ～Ⅵ組為試驗組)，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)10只鵝(公母各占1/2)。各組飼 糧鋅水平分別為 31.28、81.28、131.28、181.28、231.28、281.28 mg/kg(含基礎(chǔ)飼糧中鋅含量);各組硫酸鋅(ZnSO4)添加量分別為0、228.79、457.58、686.37、951.16、1 143.96 mg/kg。試驗鵝由國家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系育種基地高密銀河潤雁鵝業(yè)有限公司提供。

1.2 試驗飼糧

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)建議鵝的營養(yǎng)需要量［10］和《中國飼料成分及營養(yǎng)價值表》進行配方設(shè)計，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗用硫酸鋅購自浙江新維普添加劑有限公司，其有效成分為98%。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗前對鵝舍進行全面消毒。試驗鵝全期舍飼，地面平養(yǎng)，自由飲水和采食，飼糧少喂勤添;隨時觀察鵝群的生長狀況;分別于7和34日齡接種鵝副黏病毒疫苗。

1.4 樣品的采集與制備

4周齡末，分別從每個重復(fù)中抽取4只，共144只(公母各占 1/2)，采用頸靜脈采血，3 000 r/min離心 l0 min，得淺黃色血清樣品于－80℃冰箱凍存。放血處死后取部分肝臟樣品，并按照組織勻漿的制備方法將肝臟制成10%的組織勻漿液(組織∶生理鹽水=1∶9)。樣品于 －80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩Ｈ〔糠指闻K樣品迅速放入液氮中保存，用以分析肝臟中MT-Ⅰ mRNA表達量。其他試驗鵝進行生長性能和屠宰性能測定。

1.5 測定指標及方法

1.5.1 免疫指標的測定

摘取試驗鵝的免疫器官(胸腺、脾臟和法氏囊)，用濾紙擦除血漬后稱重，用以計算免疫器官指數(shù)。禽流感抗體效價的測定根據(jù)病毒的血凝(HA)和血凝抑制試驗(HI)進行。

1.5.2 抗氧化指標的測定

總抗氧化能力(T-AOC)采用比色法測定;過氧化氫酶(CAT)活性采用可見光分光光度測定;GSH-Px活性采用比色法測定;CuZn-SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法測定;丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸反應(yīng)(TBA)法測定;蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍法測定。上述指標均用試劑盒測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5.3 MT-Ⅰ mRNA 表達量的測定

1.5.3.1 引物設(shè)計

MT-Ⅰ和肌動蛋白(β-actin)引物由信諾金達(北京)有限公司設(shè)計并合成，引物序列見表2。

表2 MT-Ⅰ和β-actin基因引物序列Table 2 Primer sequence of MT-Ⅰ and β-actin

1.5.3.2 MT-Ⅰ mRNA 表達量的測定方法

采用Omega總RNA試劑盒提取肝臟組織中的總RNA，用紫外分光光度計測定總RNA質(zhì)量濃度，并在260和280 nm下測吸光度，計算OD260/OD280的值。此值在1.7～2.0，說明提取的 RNA純度較高，適宜進行下一步的試驗。取各個樣品總RNA 1μg，在20μL混合液體系統(tǒng)中進行反轉(zhuǎn)錄，合成 cDNA(65℃ 10 min，42℃ 60 min，70℃5 min)。qPCR反應(yīng)體系按照10μL qPCR Mix(K0222，F(xiàn)ermentas)，0.6 μL Forward/Reverse primer(5 μmol/L)，1 μL cDNA 和 8.2 μL ddH2O進行配制，在定量PCR儀(Applied Biosystems Step One PlusTM)上進行反應(yīng)。反應(yīng)程序為:95℃10 min;45個循環(huán)的95℃ 15 s，60℃ 45 s;最后按照儀器默認添加熔解程序:95℃ 15 s，60℃ 20 s，95 ℃ 15 s。

1.6 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)以重復(fù)為單位進行數(shù)據(jù)處理，采用SPSS 17.0軟件中單因素方差分析(one-way ANOVA)中的LSD法進行，平均值的多重比較采用Duncan氏法進行。試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標準差”表示。利用二次曲線和漸近線模式對相應(yīng)的數(shù)據(jù)進行擬合，以確定鵝飼糧中鋅的適宜水平。采用比較Ct方法分析MT-Ⅰ mRNA表達量的數(shù)據(jù)。P＜0.05和P＜0.01分別為差異顯著和極顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 鋅對鵝生長性能的影響

由表3可見，4周齡時，與Ⅰ組相比，Ⅱ組平均日增重(ADG)顯著增加(P＜0.05)，Ⅱ、Ⅲ組的平均日采食量(ADFI)顯著增加(P＜0.05);料重比(F/G)、死淘率各組間差異均不顯著(P＞0.05);Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組間 ADG、ADFI均無顯著差異(P＞0.05)，說明飼糧鋅水平超過 181.28 mg/kg時，對鵝的 ADG、ADFI、F/G 均無顯著影響(P ＞0.05)。以Ⅰ～Ⅳ組ADG、ADFI和F/G進行曲線擬合，得到如下曲線方程:

結(jié)果表明，飼糧鋅水平為112.51 mg/kg時ADG最大。

結(jié)果表明，飼糧鋅水平為106.05 mg/kg時F/G最低。

ADFI與鋅水平間的曲線關(guān)系不明顯(R2＜0.700)。

結(jié)果表明，根據(jù)生長性能分析鵝飼糧鋅適宜水平為 112.51 mg/kg。

表3 鋅對鵝生長性能的影響Table 3 Effects of zinc on growth performance of geese

2.2 鋅對鵝免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知，胸腺指數(shù)Ⅱ組極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，其他各組均顯著高于Ⅰ組(P＜0.05);脾臟指數(shù)Ⅱ、Ⅲ組極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，其他各組均顯著高于Ⅰ組(P＜0.05);法氏囊指數(shù)各組間差異不顯著(P＞0.05)，Ⅲ組最高。免疫器官指數(shù)與鋅水平間的曲線關(guān)系不明顯(R2＜0.700)。

結(jié)果表明，飼糧鋅水平在 81.28～131.28 mg/kg時，對胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)有顯著影響。

表4 鋅對鵝免疫器官指數(shù)的影響Table 4 Effects of zinc on immune organ indices of geese mg/g

2.3 鋅對鵝抗體效價的影響

由表5可得，鵝副黏病毒疫苗免疫前鵝的抗

體效價各組間差異不顯著(P＞0.05);免疫后7 d，Ⅳ組抗體效價顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)，提高了15.76%;免疫后14 d，Ⅲ、Ⅳ組抗體效價顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)，均提高了15.09%。通過曲線擬合分析，發(fā)現(xiàn)免疫后14 d抗體效價(Y)與飼糧鋅水平間(X)呈現(xiàn)漸近線關(guān)系，建立如下方程:Y=6.248 －1.87e －0.029X(R2=0.853，P=0.001)。由公式得出，當飼糧鋅水平為157.41 mg/kg時，免疫后14 d的抗體效價最高。

表5 鋅對鵝抗體效價的影響Table 5 Effects of zinc on antibody titer of geese log2

2.4 鋅對鵝抗氧化指標的影響

2.4.1 鋅對鵝血清及肝臟中T-AOC的影響

由表6可見，4周齡時，Ⅳ組血清T-AOC極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05);Ⅱ、Ⅲ組肝臟 T-AOC顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)。T-AOC與飼糧鋅水平間的曲線關(guān)系不明顯(R2＜0.700)。結(jié)果表明，飼糧鋅水平為 81.28～131.28 mg/kg時，對血清及肝臟中T-AOC有顯著影響。

2.4.2 鋅對鵝血清及肝臟中CAT活性的影響

由表6可見，4周齡時，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組血清CAT活性極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，Ⅴ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05);Ⅱ、Ⅲ組肝臟CAT活性極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P ＜0.05)，以Ⅱ組活性最高。CAT活性與飼糧鋅水平間的曲線關(guān)系不明顯(R2＜0.700)。結(jié)果表明，飼糧鋅水平為 131.28～181.28 mg/kg時對血清和肝臟CAT活性有顯著影響。

2.4.3 鋅對鵝血清及肝臟中GSH-Px活性的影響

由表6可見，4周齡時，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組血清GSHPx活性極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，Ⅴ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)，以Ⅳ組活性最高;Ⅳ、Ⅴ組肝臟GSH-Px活性極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，Ⅱ、Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)，以Ⅳ組活性最高。通過曲線擬合分析可得，血清GSH-Px活性(Y)與飼糧鋅水平(X)間呈二次曲線關(guān)系，建立的回歸方程如下:Y=0.002X2+0.679X+45.497(R2=0.720，P=0.003)。結(jié)果表明，適宜飼糧水平鋅能顯著提高血清和肝臟中GSH-Px活性，當飼糧鋅水平為160.66 mg/kg時，血清GSH-Px活性最高。

2.4.4 鋅對鵝血清及肝臟中CuZn-SOD活性的影響

由表6可見，4周齡時，Ⅳ組血清 CuZn-SOD活性極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05);Ⅳ組肝臟CuZn-SOD活性極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)，Ⅲ、Ⅴ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)。CuZn-SOD活性與飼糧鋅水平間的曲線關(guān)系不明顯(R2＜0.700)。結(jié)果表明，飼糧鋅水平為131.28 ～181.28 mg/kg時對血清和肝臟 CuZn-SOD活性有顯著影響。

2.4.5 鋅對鵝血清及肝臟組織中MDA含量的影響

由表6可見，4周齡時，隨飼糧鋅水平的升高，血清MDA含量呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，Ⅱ、Ⅲ組極顯著低于Ⅰ組(P＜0.01)，Ⅳ、Ⅴ組顯著低于Ⅰ組(P＜0.05)。Ⅵ組肝臟MDA含量顯著高于Ⅰ組(P ＜0.05)，Ⅱ、Ⅲ組間差異顯著(P ＜0.05)，以Ⅲ組最低。

通過曲線擬合分析可得，4周齡血清MDA含量(Y)與飼糧鋅水平(X)間呈二次曲線關(guān)系，建立回歸方程如下:Y=2.377 ×10－5X2+0.008X+0.522(R2=0.708，P=0.003)。結(jié)果表明，當飼糧鋅水平為150.90 mg/kg時，血清MDA含量最低。

表6 鋅對鵝血清及肝臟中抗氧化指標的影響Table 6 Effects of zinc on antioxidant parameters in serum and liver of geese

2.5 鋅對肝臟中MT-ⅠmRNA表達量的影響

由表8可知，隨飼糧鋅水平的增加，肝臟中MT-ⅠmRNA表達量呈先升高后降低趨勢。與Ⅰ組相比，Ⅳ組顯著提高(P ＜0.05)，Ⅱ、Ⅲ組極顯著提高(P＜0.01)，以Ⅲ組表達量最高。結(jié)果表明，飼糧適宜鋅水平能夠顯著影響肝臟MT-ⅠmRNA表達量。

表8 鋅對鵝肝臟中MT-ⅠmRNA表達量的影響Table 8 Effects of zinc on liver MT-ⅠmRNA expression of geese

2.6 肝臟中MT-ⅠmRNA表達量與抗氧化能力的相關(guān)性分析

由表9可知，鵝肝臟中MT-Ⅰ mRNA表達量與血清和肝臟中T-AOC活性呈正相關(guān)(P＞0.05)，與 CAT 活性呈顯著正相關(guān)(P ＜0.05)，與GSH-Px活性呈正相關(guān)(P＞0.05)，與 CuZn-SOD活性呈正相關(guān)(血清 P ＜0.05，肝臟 P ＞0.05)，與MDA含量呈負相關(guān)(血清 P＜0.05，肝臟 P＞0.05)。結(jié)果表明，MT-Ⅰ mRNA表達量與抗氧化能力指標密切相關(guān)。飼糧鋅水平能夠影響MT-ⅠmRNA的表達量，從而調(diào)控機體抗氧化能力。

表9 肝臟中MT-ⅠmRNA表達量與抗氧化能力的相關(guān)性分析Table 9 Correlation analysis between antioxidant capacity and liver MT-ⅠmRNA expression of geese

3 討論

3.1 鵝飼糧中鋅的需要量

畜禽飼養(yǎng)標準中營養(yǎng)需要量是指動物在最適宜環(huán)境條件下，正常、健康生長或達到理想生產(chǎn)成績對各種營養(yǎng)物質(zhì)種類和數(shù)量的最低要求。NRC(1994)飼養(yǎng)標準中鵝鋅的推薦量為:1～4周齡40 mg/kg，4周齡以后 35 mg/kg，種鵝65 mg/kg;澳大利亞飼養(yǎng)標準中鵝鋅的推薦量為60 mg/kg;我國農(nóng)業(yè)部1124公告中規(guī)定，鵝飼糧中鋅的允許量為60 mg/kg;經(jīng)檢索上述推薦量沒有相關(guān)試驗研究數(shù)據(jù)做支撐，也沒有相關(guān)研究報道。另外，國內(nèi)外同行們普遍認為，推薦量只是一個最低維持需要量，而不是發(fā)揮最佳生長性能狀態(tài)的需要量。本試驗結(jié)果表明，飼糧中鋅水平在 81.28～181.28 mg/kg區(qū)間內(nèi)，生長性能、免疫與抗氧化功能和MT-ⅠmRNA表達量均處于高位狀態(tài)，比國內(nèi)外有關(guān)鋅水平對家禽生長性能和屠宰性能影響的研究報道推薦量要高，分析其原因可能有以下幾方面:一是與飼養(yǎng)品種類型有關(guān)，本試驗采用的是利用大型朗德鵝選育的肝用型鵝，體型大，生長速度快;二是與試驗期間夏季高溫季節(jié)有關(guān)，本試驗在6～9月份，平均溫度在26～34℃;三是可能是機體達到最佳生長性能不一定是最佳免疫和抗氧化狀態(tài)，其有關(guān)機理還有待于繼續(xù)研究。另外，最佳生長性能狀態(tài)下鋅與微量元素間的協(xié)同和拮抗關(guān)系也需要深入研究。

3.2 鋅對鵝免疫器官指數(shù)的影響

胸腺、脾臟和法氏囊是家禽主要的免疫器官。其中，胸腺和法氏囊屬于中樞免疫器官，對機體的細胞免疫和體液免疫都發(fā)揮著重要作用。胸腺能夠釋放胸腺素，而胸腺素發(fā)揮生理作用需要鋅的參與。法氏囊對B淋巴細胞的成熟有重要影響，它在家禽性成熟前達到最大，后逐漸萎縮直至消失。脾臟是機體的外周免疫器官，它對血液中的抗原物質(zhì)具有濾過、清除的作用，是進行免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要器官。Fraker等［11］研究表明，飼喂低鋅(0.5μg/g)飼糧的成年大鼠，其胸腺明顯萎縮。崔艷紅等［12］研究發(fā)現(xiàn)，當鋅添加水平達100 mg/kg時，肉用仔雞(21、42日齡)免疫器官指數(shù)達到最高值。

本試驗結(jié)果表明，胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)均隨飼糧鋅水平的升高呈現(xiàn)先升高后降低趨勢。飼糧中加鋅能顯著提高胸腺和脾臟指數(shù)，以飼糧鋅水平為81.28～131.28 mg/kg時，鵝的各項免疫器官指數(shù)最大，與崔艷紅等［12］研究結(jié)果相近似，說明鋅能有效的促進胸腺、脾臟和法氏囊的發(fā)育。

3.3 鋅對鵝抗體效價的影響

免疫抗體效價是反映動物體液免疫水平的重要指標，可以直接反映家禽體內(nèi)的免疫狀態(tài)。對預(yù)防傳染病的發(fā)生具有重要的意義。張日俊等［13］研究發(fā)現(xiàn)，肉仔雞缺鋅能降低體液免疫水平。本試驗結(jié)果表明，鵝副黏病毒疫苗免疫后7 d，Ⅳ組抗體效價顯著提高;免疫后14 d，Ⅲ、Ⅳ組抗體效價顯著提高。飼糧中鋅水平為157.41 mg/kg時，免疫后14 d的抗體效價最高，這也與閆素梅等［14］的研究結(jié)果相似。

3.4 鋅對鵝抗氧化功能的影響

動物的健康程度與機體防御體系的抗氧化能力有著密切的聯(lián)系。T-AOC是體內(nèi)酶促抗氧化體系的重要組成部分，能清除機體不斷產(chǎn)生的氧自由基，從而維持機體的代謝平衡。馮望寶等［15］報道，低鋅顯著降低蛋鴨T-AOC，補鋅后T-AOC逐漸增加，但在高鋅(1 000 mg/kg)條件下，T-AOC受到抑制。本試驗結(jié)果與上述研究相似，表明鋅能夠顯著提高動物體內(nèi)T-AOC，并且隨鋅水平的升高T-AOC呈現(xiàn)先升高后降低趨勢。血清T-AOC為Ⅳ組最高，肝臟T-AOC為Ⅱ組最高。

CAT是以鋅為活性中心的一種酶類清除劑，它能催化過氧化氫(H2O2)分解為水和氧，消除H2O2對機體的傷害，在機體防御體系中發(fā)揮重要作用。鐘映梅等［16］研究發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧鋅添加量的增加，血清CAT活性有升高的趨勢，55日齡缺鋅與高鋅組血清CAT活性均顯著下降。本試驗結(jié)果表明，鋅能顯著提高血清和肝臟中的CAT活性，CAT活性隨鋅水平的升高呈現(xiàn)先升高后降低趨勢;飼糧鋅水平在 131.28 ～181.28mg/kg時，鵝血清和肝臟中的CAT活性最高。

GSH-Px是機體內(nèi)廣泛存在的一種重要的含鋅酶。主要參與還原型谷胱甘肽對H2O2的還原反應(yīng)，能夠保護細胞膜等結(jié)構(gòu)和功能的完整，從而防止脂質(zhì)過氧化，提高機體的抗氧化能力。CuZn-SOD是一種鋅依賴酶，主要功能是使超氧自由基(O2－·)發(fā)生歧化反應(yīng)，消除O2－·毒性，防止機體過氧化。蔣宗勇等［17］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加鋅顯著提高黃羽肉雞血清GSH-Px和CuZn-SOD活性，以添加120 mg/kg鋅達到最高值;飼糧添加鋅對肝臟中CuZn-SOD活性基本無影響。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加鋅能顯著提高血清和肝臟中GSH-Px活性;血清和肝臟中CuZn-SOD活性均隨飼糧鋅水平的升高呈先升高后降低的趨勢，血清和肝臟中CuZn-SOD活性均以Ⅳ組最高。

氧自由基能夠攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并形成脂質(zhì)過氧化物MDA等。MDA含量能間接反映生物體內(nèi)氧自由基的代謝狀況以及脂質(zhì)過氧化程度。Sahin等［18］報道指出，鋅能降低家禽血清和肝臟中MDA含量。鐘映梅等［19］的研究表明，當飼糧鋅水平為110 mg/kg時，鵝血清MDA和肝臟MDA含量較低。本試驗結(jié)果表明，鵝血清和肝臟中MDA含量以Ⅲ組最低，表明適宜水平鋅能夠有效地降低體內(nèi)自由基水平。

3.5 鋅對鵝肝臟中MT-Ⅰ mRNA表達量的影響

MT是一種低分子質(zhì)量、半胱氨酸富集的金屬結(jié)合蛋白，于1957年在馬的腎臟中首次發(fā)現(xiàn)?，F(xiàn)已證實，MT具有廣泛的生物學(xué)功能，對機體的調(diào)節(jié)和代謝具有重要影響［20］。MT具有 MT-Ⅰ、MT-Ⅱ、MT-Ⅲ 和 MT-Ⅳ 4 種 異 構(gòu) 體。其 中，MT-Ⅰ主要存在于動物的肝臟中。Wei等［21］報道，飼糧添加或注射鋅均可使雛雞組織 MT-ⅠmRNA水平升高。曹家銀等［22］研究表明，飼糧中添加200 mg/kg鋅可提高肉仔雞肝臟MT mRNA水平。本研究結(jié)果表明，添加鋅能使鵝肝臟中MT-ⅠmRNA表達量快速上升;飼糧鋅水平高于181.28 mg/kg時，MT-Ⅰ mRNA表達量急速下降，且處于穩(wěn)定狀態(tài)。以131.28 mg/kg鋅水平的MT-ⅠmRNA表達量最高。

3.6 肝臟中MT-ⅠmRNA表達量與抗氧化能力的相關(guān)性分析

MT是一種富含半胱氨酸(20% ～30%)的蛋白質(zhì)。因為在自然狀態(tài)下，半胱氨酸的巰基(－SH)多以還原狀態(tài)存在，具有很強親核性，從而使MT對O2－·、羥自由基(·OH)以及一氧化氮(NO)等自由基產(chǎn)生作用，達到保護機體的目的。Jourdan等［23］研究表明，鋅的抗氧化作用與其誘導(dǎo)MT合成有關(guān)。劉湘新等［24］發(fā)現(xiàn)MT能夠提高SOD活性，防止氧化性應(yīng)激損傷。李峰等［25］報道，運動大鼠補充MT后，血清抗氧化酶活性呈上升趨勢。本試驗結(jié)果表明，鵝肝臟中 MT-ⅠmRNA表達量與血清和肝臟CAT活性和血清中CuZn-SOD活性呈顯著正相關(guān)，與血清中MDA含量呈顯著負相關(guān)。有關(guān)鋅影響MT-Ⅰ mRNA調(diào)控鵝抗氧化能力的機理還有待于繼續(xù)研究。

4 結(jié)論

① 飼糧鋅水平為112.51 mg/kg時平均日增重最大，飼糧鋅水平為106.05 mg/kg時料重比最低。

② 飼糧鋅水平在81.28～181.28 mg/kg時，機體免疫和抗氧化力處于高位水平;顯著提高機體免疫器官指數(shù)和鵝副黏病毒疫苗免疫后抗體效價水平;顯著提高機體抗氧化功能，降低自由基含量。

③ 機體MT-Ⅰ mRNA表達量與機體抗氧化能力指標密切相關(guān)。適宜鋅水平能夠影響MT-ⅠmRNA的表達量，從而調(diào)控機體抗氧化能力。

④高位免疫與抗氧化力狀態(tài)下鋅的需要量要比最佳生長性能狀態(tài)鋅的需要量高。鋅水平過高生長性能免疫與抗氧化功能開始下降。

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