教學(xué)實(shí)驗(yàn)中不同方法測(cè)定安痛定注射液中安替比林含量的比較

郁韻秋+李霞+李嫣

摘要：教學(xué)實(shí)驗(yàn)中有關(guān)安痛定注射液中安替比林的測(cè)定方法采用的是雙波長(zhǎng)法，現(xiàn)采用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）對(duì)其進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)兩種方法的結(jié)果進(jìn)行了比較和評(píng)價(jià)。采用t檢驗(yàn)法對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較，說明在學(xué)生實(shí)驗(yàn)中可以以HPLC法代替雙波長(zhǎng)法進(jìn)行安替比林的含量測(cè)定。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的目的：（1）使學(xué)生更深入地理解分析方法的原理，并且懂得同樣的化合物可選擇不同的分析方法;（2）使學(xué)生將統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)的方法運(yùn)用到具體案例中。

關(guān)鍵詞：雙波長(zhǎng)法;高效液相色譜法;安痛定注射液;安替比林;教學(xué)實(shí)驗(yàn)

中圖分類號(hào)：G642.41 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? ? 文章編號(hào)：1674-9324（2015）20-0214-02

分析化學(xué)是醫(yī)、藥學(xué)院校本科教學(xué)的必修課，也是一門基礎(chǔ)課程，其理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技能是藥物分析學(xué)、藥物化學(xué)、天然藥物化學(xué)、藥劑學(xué)、藥理學(xué)和中藥學(xué)等各學(xué)科的必備基礎(chǔ)[1]。分析化學(xué)教學(xué)不僅要求學(xué)生掌握有關(guān)的基礎(chǔ)知識(shí)和基本原理，而且要求學(xué)生學(xué)習(xí)和掌握基本的實(shí)驗(yàn)操作和技能，將分析化學(xué)的原理與分析實(shí)驗(yàn)有機(jī)地融合是至關(guān)重要的。因此，我們?cè)诮虒W(xué)過程中進(jìn)行了多方面的探索，啟迪學(xué)生積極思考，提高其分析問題和解決問題的能力。在學(xué)習(xí)基本知識(shí)的同時(shí)，學(xué)會(huì)融會(huì)貫通，用學(xué)到的知識(shí)去指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，反之，對(duì)于具體的分析對(duì)象要懂得如何選擇分析方法。

對(duì)于某些藥品（比如復(fù)方制劑）的測(cè)定，雙波長(zhǎng)法可以消除干擾組分而達(dá)到測(cè)定目的;HPLC法具有分離分析的功能，也可以消除干擾而進(jìn)行目標(biāo)組分的測(cè)定。因此，我們采用HPLC法對(duì)安痛定注射液中安替比林的含量進(jìn)行了測(cè)定，并將測(cè)定結(jié)果與原來教學(xué)實(shí)驗(yàn)中采用的雙波長(zhǎng)法進(jìn)行了比較和分析。

一、試劑

氨基比林、安替比林對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，甲醇（色譜純）購(gòu)自德國(guó)默克化工試劑公司，鹽酸（分析純）購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，去離子水由Millipore Direct-Q純水發(fā)生器制得。

二、高效液相色譜法

1.色譜條件。

儀器：Agilent_HPLC_1200系列

色譜柱：Welch Ultimate○AQ-C18（4.6x250mm，5μm）

流動(dòng)相：甲醇∶水（60∶40）

流速：0.8mL/mim

柱溫：30℃

檢測(cè)波長(zhǎng)：260nm

進(jìn)樣體積：10μL

色譜分析工作站：Agilent ChemStation

2.溶液制備。

（1）儲(chǔ)備液。精密稱取氨基比林和安替比林各50mg，分別置于50mL容量瓶，加甲醇溶解，制得氨基比林甲醇溶液，1mg/mL;氨替比林甲醇溶液，1mg/mL。4℃儲(chǔ)藏。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線。用60∶40（v/v）的甲醇水溶液將儲(chǔ)備液稀釋成含氨基比林2、5、10、15、20、25、30μg/mL（含10μg/mL的氨基比林）的溶液。

（3）樣品。取安替比林和氨基比林儲(chǔ)備液適量，用流動(dòng)相稀釋成含安替比林10μg/mL（含10μg/mL的氨基比林）的溶液5份。

3.方法學(xué)驗(yàn)證及樣品測(cè)定。在上述色譜條件下安替比林和氨基比林得到完全分離，峰形對(duì)稱性好且無(wú)明顯的干擾峰。安替比林和氨基比林的保留時(shí)間分別為5.12分鐘和6.62分鐘。

（1）線性范圍。依照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線配置法，配制成含氨基比林2、5、10、15、20、25、30μg/mL，并含10μg/mL的氨基比林的溶液。依照上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析，記錄色譜圖。以色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)（y），氨基比林濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x），以最小二乘法進(jìn)行回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，安替比林在2～30μg/mL的范圍內(nèi)，線性良好。其中回歸方程為y=35.441x-1.4319，R=0.9996。

（2）準(zhǔn)確度和精密度。配制含氨基比林5、15、30μg/mL（含10μg/mL氨基比林）的低（L）、中（M）、高（H）三個(gè)水平的標(biāo)準(zhǔn)液，每個(gè)濃度水平各5份，依照上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣三天，記錄色譜圖，以進(jìn)行日內(nèi)和日間精密度與準(zhǔn)確度的考察。其中精密度以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（relative standard deviation，RSD）來表示，準(zhǔn)確度以相對(duì)誤差（relative error，RE）來表示。結(jié)果如表1所示。

（3）樣品測(cè)定。依照上述樣品制備法制備含安替比林10μg/mL（含10μg/mL的氨基比林）的溶液5份，依照上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析。結(jié)果如表2所示。

三、雙波長(zhǎng)法

1.測(cè)定條件。儀器：HITACHI U-2900

2.測(cè)定方法及結(jié)果。

（1）λ1與λ2的選定。用HCl（0.1mol/L）為溶劑，將氨基比林儲(chǔ)備液稀釋至約5μg/mL，以HCl為空白測(cè)定吸光度，在230nm附近和265nm附近各找5個(gè)不同波長(zhǎng)的吸光度，找出吸光度相等的λ■與λ■。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇的兩個(gè)波長(zhǎng)為：λ■=231nm，λ■=268nm。

（2）安替比林標(biāo)準(zhǔn)品及模擬樣品的測(cè)定。用HCl（0.1mol/L）為溶劑，將氨替比林儲(chǔ)備液稀釋至約5μg/mL，以HCl為空白測(cè)定吸光度，測(cè)定其在λ1與λ2處的吸光度A1和A2。用HCl（0.1mol/L）為溶劑，將氨基比林和安替比林儲(chǔ)備液稀釋至含氨基比林和安替比林各10μg/mL的模擬樣品溶液，以HCl為空白測(cè)定吸光度，測(cè)定其在λ1與λ2處的吸光度A■′和A■′。以上測(cè)定步驟重復(fù)進(jìn)行5次，記錄結(jié)果，以下式計(jì)算安替比林濃度。結(jié)果如表2所示。

四、F檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)

由HPLC法和雙波長(zhǎng)法測(cè)定濃度為10μg/mL的安替比林樣品，結(jié)果如表3所示。

F檢驗(yàn)F=1.36，查表得F■=5.05，F(xiàn)

t檢驗(yàn)t=0.617，查表得雙側(cè)檢驗(yàn)t■=2.228，t

五、討論

雙波長(zhǎng)法和高效液相色譜法都可用于多組分的含量測(cè)定，在有些分析工作中兩種方法是互相驗(yàn)證或替代的。作為現(xiàn)代化的分析檢測(cè)手段，HPLC法的應(yīng)用日益廣泛，《中國(guó)藥典》中涉及HPLC法進(jìn)行含量測(cè)定的項(xiàng)目，已從1985版中的8項(xiàng)增加到2010版中的千余項(xiàng)[2]。在測(cè)定安痛定注射液中安替比林的含量時(shí)，應(yīng)用HPLC法和雙波長(zhǎng)法的結(jié)果說明：高效液相色譜法快速、靈敏，適合批量樣品多種成分的同時(shí)、快速測(cè)定;雙波長(zhǎng)法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，適合少量樣品的快速測(cè)定。在學(xué)生實(shí)驗(yàn)中，采取兩種方法測(cè)定安痛定注射液中安替比林的含量，并且運(yùn)用統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)手段對(duì)方法進(jìn)行簡(jiǎn)要評(píng)價(jià)，不僅可以使學(xué)生了解儀器分析的原理，而且要關(guān)注儀器分析方法和應(yīng)用的進(jìn)展和動(dòng)態(tài)，對(duì)于給定的分析任務(wù)，可以結(jié)合方法原理選擇不同的分析方法，逐步培養(yǎng)靈活、多元化的思維方式。

參考文獻(xiàn)：

[1]李玲，劉健，周踐，等.從歷版中國(guó)藥典分析方法的統(tǒng)計(jì)與研究看我國(guó)藥物分析方法的發(fā)展[J].藥物分析雜志，1998，18（05）：349-352.

[2]劉紅云，鄭舉，張莉，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定安痛定注射液中氨基比林和安替比林的含量[J].中國(guó)獸藥雜志，2009，43（9）：5-7.