肝素結(jié)合蛋白在膿毒癥診斷中的臨床應(yīng)用價值*

許程，徐元宏

（安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科，安徽 合肥 230022）

·新進展研究·

肝素結(jié)合蛋白在膿毒癥診斷中的臨床應(yīng)用價值*

許程，徐元宏

（安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科，安徽 合肥 230022）

目的探討血漿肝素結(jié)合蛋白（HBP）定量檢測在膿毒癥診斷中的臨床應(yīng)用價值。方法選取20例健康志愿者、79例非膿毒癥患者、55例膿毒癥患者和42例嚴(yán)重膿毒癥患者，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿HBP、降鈣素原（PCT）、超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）水平，繪制受試者工作特征（ROC）曲線并計算曲線下面積（AUC），分析各指標(biāo)對膿毒癥的診斷意義；對PCT與HBP、hs-CRP進行線性相關(guān)性分析。結(jié)果健康對照組、非膿毒癥組、膿毒癥組、嚴(yán)重膿毒癥組HBP分別為（2.14±1.98）、（11.85±11.06）、（10.43±10.21）和（104.97± 106.84）ng/ml，健康對照組與非膿毒癥組、膿毒癥組及嚴(yán)重膿毒癥組HBP比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），其中嚴(yán)重膿毒癥組高于膿毒癥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；非膿毒癥組與膿毒癥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.45）。健康對照組、非膿毒癥組、膿毒癥組、嚴(yán)重膿毒癥組PCT分別為（0.03±0.01）、（0.12±0.06）、（0.78±0.50）和（17.24±23.21）ng/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。健康對照組、非膿毒癥組、膿毒癥組、嚴(yán)重膿毒癥組hs-CRP分別為（0.97±1.37）、（13.82±26.28）、（40.14±32.8）和（100.82±66.83）mg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。ROC曲線顯示，AUC為0.694，且HBP 11.5 ng/ml時靈敏性和特異性分別達73.2%和64.9%。線性相關(guān)分析提示PCT與HBP呈正相關(guān)（r=0.874，P＜0.01）；PCT與hs-CRP無線性相關(guān)（r=0.470，P=0.133）。結(jié)論血漿HBP、PCT、hs-CRP水平不僅可作為膿毒癥的檢測指標(biāo)，而且可用于病情嚴(yán)重程度的評估。

膿毒癥；肝素結(jié)合蛋白；降鈣素原；超敏C反應(yīng)蛋白

膿毒癥是指由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），臨床上證實有細菌存在或有高度可疑感染灶。膿毒癥發(fā)生率高，在美國嚴(yán)重膿毒癥發(fā)病率平均每年增長13.0%～13.3%[1]。近年來，盡管抗感染治療和器官功能支持技術(shù)廣泛應(yīng)用，但是膿毒癥的病死率仍很高，全球每天約有14萬人死于其并發(fā)癥，成為重癥監(jiān)護室內(nèi)非心臟疾病死亡的主要原因，因此膿毒癥的早期診斷和病情評估對患者的預(yù)后至關(guān)重要。降鈣素原（Procalcitonin，PCT）作為目前膿毒癥的常用診斷指標(biāo)之一，相比白細胞計數(shù)及C-反應(yīng)蛋白具有較高的靈敏性及特異性[2]。近期有研究報道，肝素結(jié)合蛋白（heparin-binding protein，HBP）作為膿毒癥新的診斷指標(biāo)，可以對嚴(yán)重感染患者即將發(fā)生的休克進行預(yù)測[3]，但未提及其與PCT是否存在相關(guān)性。超敏C反應(yīng)蛋白（hypersensitiveC-reactiveprotein，hs-CRP）用于診斷新生兒膿毒癥的研究報道居多[4]，是否具有普遍性仍有待進一步研究。本研究觀察膿毒癥及嚴(yán)重膿毒癥患者血漿HBP、PCT和hs-CRP水平，分析HBP、hs-CRP與PCT的相關(guān)性，闡述各指標(biāo)在診斷膿毒癥中的臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1研究對象

選取2014年3月-2014年8月在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科、急診科、呼吸科、重癥監(jiān)護室、新生兒科、感染科等就診的79例非膿毒癥患者，55例膿毒癥患者，42例嚴(yán)重膿毒癥患者及20例健康志愿者，抽取外周靜脈血，肝素鋰抗凝。根據(jù)健康狀態(tài)，有無膿毒癥及病情輕重將研究對象分為健康對照組、非膿毒癥組、膿毒癥組和嚴(yán)重膿毒癥組。膿毒癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2012年歐洲危重癥醫(yī)學(xué)學(xué)會、國際膿毒血癥基金會及美國重癥監(jiān)護醫(yī)學(xué)學(xué)會發(fā)布的重癥膿毒血癥和膿毒血癥休克診療指南[5]。

1.2試劑與儀器

HBP測定試劑盒（酶聯(lián)免疫法）由杭州中翰盛泰生物技術(shù)有限公司提供，采用Infinite 50分光光度計檢測；PCT定量測定試劑盒（酶聯(lián)熒光分析）由梅里埃診斷產(chǎn)品（上海）有限公司提供，采用Mimi VIDAS全自動熒光免疫測試系統(tǒng)檢測；hs-CRP測定試劑盒（免疫比濁法）由西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品（上海）有限公司提供，采用Nephstar plus（bCRP）儀器和KDC-2046低速冷凍離心機檢測。

1.3指標(biāo)檢測

肝素鋰抗凝血3 000 r/s離心5 min，分離出血漿，置入-80℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩２捎秒p抗體夾心法檢測HBP，酶聯(lián)熒光分析法檢測PCT，免疫比濁法檢測hs-CRP，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較用單因素方差分析，組間兩兩比較用SNK-q檢驗，健康對照組與其他各組比較用Dunnet-t檢驗，相關(guān)性分析用Pearson檢驗，繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲線，計算曲線下面積（area under cure，AUC），P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表14 組患者血漿PCT、HBP、hs-CRP水平比較（±s）

表14 組患者血漿PCT、HBP、hs-CRP水平比較（±s）

組別例數(shù)PCT/（ng/ml）HBP/（ng/ml）hs-CRP/（mg/L）健康對照組200.03±0.012.14±1.980.97±1.37非膿毒癥組790.12±0.0611.85±11.0613.82±26.28膿毒癥組550.78±0.5010.43±10.2140.14±32.80嚴(yán)重膿毒癥組P值4217.24±23.21 0.002 104.97±106.84 0.008 100.82±66.83 0.003

2 結(jié)果

2.1各組患者HBP、PCT、hs-CRP水平比較

健康對照組、非膿毒癥組、膿毒癥組、嚴(yán)重膿毒癥組HBP（F=50.27，P＜0.01）、PCT（F=35.58，P＜0.01）和hs-CRP水平（F=61.01，P＜0.01）差異有統(tǒng)計學(xué)意義。組間兩兩比較，健康對照組各指標(biāo)低于其他組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（PPCT=0.001和0.004，Phs-CRP=0.0038和0.009）。非膿毒癥組與膿毒癥組、膿毒癥組與嚴(yán)重膿毒癥組的PCT和hs-CRP水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中膿毒癥組高于非膿毒癥組，嚴(yán)重膿毒癥組高于膿毒癥組。嚴(yán)重膿毒癥組HBP水平高于膿毒癥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.028）；膿毒癥組與非膿毒癥組HBP水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.320）。見表1。

2.2ROC曲線分析

HBP的AUC值為0.694，低于PCT、hs-CRP（AUC分別為0.913和0.881）。當(dāng)HBP11.5ng/ml時，其診斷膿毒癥的靈敏性和特異性分別為73.2%和64.9%，提示血漿HBP檢測可作為膿毒癥的監(jiān)測指標(biāo)之一，輔助評估病情嚴(yán)重程度。見表2。

表24 組患者血漿PCT、HBP、hs-CRP的ROC曲線分析

2.3相關(guān)性分析

血漿PCT水平與HBP呈直線相關(guān)（r=0.874，P＜0.01），與hs-CRP無線性相關(guān)（r=0.470，P=0.133），提示聯(lián)合檢測血漿PCT與HBP可輔助判斷膿毒癥患者病情變化。

3 討論

機體發(fā)生感染時，血漿外滲，中性粒細胞活化聚集到感染部位是炎癥反應(yīng)過程的重要起始步驟，HBP由活化的中性粒細胞釋放，是唯一存在于中性粒細胞顆粒中的可分泌蛋白質(zhì)，具有顯著的殺菌活性、趨化特性及調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)作用。研究發(fā)現(xiàn)HBP可增強毛細血管滲透性，導(dǎo)致血管內(nèi)液體滲透至組織間隙，減少有效循環(huán)血量，推測其可能參與嚴(yán)重膿毒癥及膿毒性休克的病理生理過程[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，嚴(yán)重膿毒癥組血漿HBP水平明顯高于膿毒癥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而膿毒癥組與非膿毒癥組血漿HBP水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明HBP水平可反應(yīng)機體炎癥反應(yīng)程度及微循環(huán)功能狀態(tài)，在膿毒癥的發(fā)展中起重要作用。LINDER等[7]也認為嚴(yán)重膿毒癥及膿毒性休克患者血漿HBP水平明顯升高，監(jiān)測重癥患者HBP水平可輔助判斷病情嚴(yán)重程度。研究還發(fā)現(xiàn)HBP水平與PCT呈正相關(guān)，提示對于膿毒癥患者，聯(lián)合檢測血漿PCT與HBP水平可輔助判斷患者病情變化，早期診斷嚴(yán)重膿毒癥。

PCT是降鈣素的激素原，健康成人血漿PCT水平極低（PCT＜0.05 ng/ml），很多器官的不同類型細胞在受到促炎癥反應(yīng)刺激后分泌增加，特別是受到細菌感染引起的刺激。自PCT可能作為膿毒癥的標(biāo)志物以來，大量研究證實，其對膿毒癥的診斷價值優(yōu)于傳統(tǒng)炎癥指標(biāo)[8]。RAJKUMARI等[9]提出PCT水平是早期診斷膿毒癥及治療監(jiān)測的有效指標(biāo)，本研究發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重膿毒癥組血漿PCT明顯高于膿毒癥組，膿毒癥組高于非膿毒癥組，ROC曲線顯示AUC為0.913，且當(dāng)PCT 1.0 ng/ml時，其診斷膿毒癥的靈敏性和特異性分別為91.7%和78.1%。提示血漿PCT水平檢測對膿毒癥的診斷具有較好的靈敏性和特異性，可用于膿毒癥病情嚴(yán)重程度和治療效果的評估。TIAN等[10]也認為PCT水平可用于全身炎癥反應(yīng)綜合征與膿毒癥的鑒別診斷，評估膿毒癥的嚴(yán)重程度。

hs-CRP是臨床實驗室采用超敏感技術(shù)，準(zhǔn)確檢測出低濃度的CRP，屬于一種急性時相反應(yīng)蛋白，是區(qū)分低水平炎癥狀態(tài)的敏感指標(biāo)。臨床資料表明，hs-CRP＞15 mg/L提示有炎癥反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)，嚴(yán)重膿毒癥組血漿hs-CRP高于膿毒癥組，膿毒癥組高于非膿毒癥組，這與劉慧琳等[11]的研究結(jié)果一致。ROC曲線顯示AUC為0.881，hs-CRP15.0mg/L時，診斷膿毒癥靈敏性和特異性分別為88.6%和49.4%。提示血漿hs-CRP水平可以作為診斷膿毒癥的敏感指標(biāo)之一。

綜上所述，血漿HBP、PCT、hs-CRP水平可作為膿毒癥的檢測指標(biāo)，且可用于病情嚴(yán)重程度評估，但是存在樣本量偏少，未對膿毒癥患者進行動態(tài)觀察的局限。此外，不同種類病原微生物如革蘭陰性菌、革蘭陽性菌、真菌、病毒等所致的感染因素是否會對血漿PCT、HBP、hs-CRP水平產(chǎn)生影響尚不清楚。因此，需要擴大樣本量進一步深入研究，為臨床提供更可靠的理論基礎(chǔ)。

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（申海菊 編輯）

Diagnostic value of heparin-binding protein in sepsis*

Cheng XU,Yuan－h(huán)ong XU
(Department of Laboratory Diagnostics,the First Affiliated Hospital, Anhui Medical University,Hefei,Anhui 230022,P.R.China)

【Objective】To investigate the clinical value of blood plasma heparin－binding protein(HBP) in diagnosis of sepsis.【Methods】In this study,20 healthy volunteers,79 non－sepsis patients,55 sepsis and 42 severe sepsis patients were enrolled.The levels of HBP as well as procalcitonin(PCT)and hypersensitive C－reactive protein(hs－CRP)in their blood plasma were measured.Then receiver operating characteristic curve was constructed to calculate the area under the curve(AUC)and obtain the diagnostic capability of these three substances.The correlations of blood plasma level of PCT with HBP and hs－CRP were analyzed at last.【Results】In the control group,non－sepsis,sepsis and severe sepsis groups the mean levels of blood plasma HBP were(2.14±1.98),(11.85±11.06),(10.43±10.21)and(104.97±106.84)ng/ml respectively;the PCT levels were(0.03±0.01),(0.12±0.06),(0.78±0.50)and(17.24±23.21)ng/ml respectively;and the hs－CRP levels were(0.97±1.37),(13.82±26.28),(40.14±32.80)and(100.82±66.83)mg/L respectively.There were significant differences in the HBP levels between the patient groups and the control group(P＜0.01)and the HBP level in the severe sepsis group was significantly higher than that in the sepsis group(P＜0.01).There were significant differences in blood plasma PCT and hs－CRP levels between any two of the groups(P＜0.01).Moreover,the receiver operating characteristic curve showed that the AUC of plasma HBP was 0.694. When HBP level was 11.5 ng/ml,the sensitivity and specificity reached 73.2%and 64.9%respectively.Linearcorrelation analysis showed a positive correlation between PCT and HBP levels(r=0.874,P＜0.01).【Conclusions】The levels of HBP,PCT and hs－CRP in blood plasma could be used to detect sepsis and evaluate the severity of this disease.

sepsis;heparin－binding protein;procalcitonin;hypersensitive C－reactive protein

R631.2；R446.1

B

1005-8982（2015）32-0059-04

2015-01-26

安徽省科技創(chuàng)新公眾服務(wù)平臺項目（No：PT20081011）

徐元宏，E-mail：xyhong1964@163.com