干擾素-γ、白介素-6、白介素-17及轉化生長因子-β1在橋本甲狀腺炎患者血清中的表達

李紅林，鄭云會，陸衛(wèi)平，楊士軍，劉艷秋，高美華

（1.南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇 淮安 223300；2.青島大學醫(yī)學院免疫學教研室，山東 青島 266071）

干擾素-γ、白介素-6、白介素-17及轉化生長因子-β1在橋本甲狀腺炎患者血清中的表達

李紅林1，鄭云會1，陸衛(wèi)平1，楊士軍1，劉艷秋1，高美華2

（1.南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇 淮安 223300；2.青島大學醫(yī)學院免疫學教研室，山東 青島 266071）

目的探討干擾素-γ（IFN-γ）、白介素-6（IL-6）、白介素-17（IL-17）及轉化生長因子-β1（TGF-β1）4種細胞因子水平與橋本甲狀腺炎（HT）的相關性。方法用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測20例HT患者（HT組）和20例健康體檢者（對照組）的IFN-γ、IL-6、IL-17和TGF-β1濃度，用電化學發(fā)光法檢測游離三碘甲腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）、促甲狀腺激素（TSH）和甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）水平。結果HT組IFN-γ、IL-6及IL-17濃度顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；TGF-β1濃度比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。兩組IL-6、IFN-γ、IL-17與TPOAb呈正相關（r=0.3602、0.3391和0.5165，P＜0.05）；IL-6與FT3、IL-17與FT4呈負相關（r=-0.3582和-0.4295，P＜0.05）；IL-17與TSH呈正相關（r=0.3976，P＜0.05）。結論IFN-γ、IL-6及IL-17 3種炎癥細胞因子在HT患者血清中高表達，可能共同參與HT的免疫紊亂過程。

橋本甲狀腺炎；細胞因子；白介素-17；轉化生化因子β1

橋本甲狀腺炎（Hashimoto’s thyroiditis，HT）又稱為慢性淋巴細胞性甲狀腺炎，1912年由日本學者Hashimoto首先報道。隨著社會節(jié)奏加快、環(huán)境壓力增加，HT成為臨床常見的器官特異性自身免疫性疾病。HT可誘發(fā)甲狀腺腫大或結節(jié)，增加甲狀腺腫瘤發(fā)生的風險[1]。HT好發(fā)于育齡期女性，導致多種不良妊娠結局[2]，嚴重威脅人類的健康。目前其發(fā)病機制尚未完全闡明。近年來，中外學者認為輔助性T細胞1（helper T cells 1，Th1）、Th17等淋巴細胞及相關細胞因子水平變化引起的免疫功能紊亂與HT的發(fā)生、發(fā)展密切相關。但相關研究結果不一致，細胞因子與HT患者甲狀腺激素的相關性，更是少有報道[3-4]。本實驗就HT患者外周血中干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白介素-17（Interleukin-17，IL-17）及轉化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）4種細胞因子水平及其與甲狀腺功能指標的相關性進行研究，以探討其在HT中的作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1研究對象

選取2013年10月-2014年6月在江蘇省淮安市第一人民醫(yī)院初次診斷為HT且未治療的患者（HT組）20例。其中，男性3例，女性17例；年齡（45.3±13.12）歲。所有入選患者符合以下診斷標準[5]：①有甲狀腺功能減退的臨床癥狀和體征；②可觸及彌漫性甲狀腺腫大，質地較韌，伴峽部錐體葉腫大：③患者血清甲狀腺過氧化物酶抗體（thyroid peroxidase antibody，TPOAb）、促甲狀腺激素（thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH）濃度升高，游離三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine，F(xiàn)T3）、游離甲狀腺素（free thyroxine，F(xiàn)T4）水平減低；④甲狀腺B超回聲不均，伴發(fā)多發(fā)性低回聲灶或甲狀腺結節(jié)。另選取同期健康體檢者20例作為對照組。男性6例，女性14例；年齡（42.8±17.7）歲。對照組無甲狀腺疾病史，甲狀腺功能正常，自身抗體檢測結果為陰性。所有研究對象排除妊娠、感染、腫瘤、過敏性疾病及其他自身免疫性疾病、未使用免疫抑制劑。

1.2標本采集

抽取早晨空腹靜脈血5 ml，2 500 r/min離心10 min，立即檢測甲狀腺激素和自身抗體，其余血清分裝于離心管中，密封置于-20℃冰箱保存，以備成批檢測細胞因子。

1.3主要儀器及試劑

酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測IFN-γ、IL-6、IL-17及TGF-β1濃度，試劑盒由美國Rapidbio公司提供，儀器采用北京普朗公司的DNM-9602型酶標儀；用電化學發(fā)光法檢測FT3、FT4、TSH及TPOAb水平，儀器采用瑞士Roche公司生產的E170模塊型電化學發(fā)光免疫分析儀，試劑為專用配套試劑。所有操作嚴格按產品說明書進行。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較用成組資料t檢驗，計數(shù)資料以率表示，用χ2檢驗，各指標間相關性用Pearson相關性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1性別、年齡及甲狀腺功能比較

兩組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)學意義（P＞0.05）。HT組患者FT3、FT4水平明顯降低（P＜0.05），TSH、TPOAb水平明顯升高（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者性別、年齡及甲狀腺功能比較（n=20±s）

表1 兩組患者性別、年齡及甲狀腺功能比較（n=20±s）

組別男/女/例年齡/歲FT3/（pmol/L）FT4/（pmol/L）TSH/（mIU/L）TPOAb/（IU/L）對照組6/1442.8±17.74.45±0.3411.94±1.991.67±0.530.91±1.27 HT組3/1745.3±13.13.78±0.798.96±3.6425.56±29.23546.29±369.48 t/χ2值0.5740.5083.4843.2123.6546.601 P值0.4490.6150.0010.0030.0010.000

2.2細胞因子水平比較

HT組患者IFN-γ、IL-6及IL-17濃度顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。兩組TGF-β1水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.3相關性分析

兩組患者IL-6、IFN-γ、IL-17與TPOAb呈正相關（P＜0.05）；IL-6與FT3、IL-17與FT4呈負相關（P＜0.05）；IL-17與TSH呈正相關（P＜0.05）；TGF-β1與甲狀腺功能指標無相關性（P＞0.05）。見表3。

表2 兩組患者細胞因子水平比較（n=20±s）

表2 兩組患者細胞因子水平比較（n=20±s）

組別IFN-γ/（ng/L）IL-17/（pg/ml）IL-6/（ng/L）TGF-β1/（ng/L）對照組250.65±67.61594.84±169.9649.66±13.16478.26±152.56 HT組305.12±46.17771.75±142.1862.47±11.34521.14±117.84 t值2.9753.5703.2980.995 P值0.0050.0010.0020.326

表3 甲狀腺功能與4種細胞因子的相關性

3 討論

HT以患者甲狀腺出現(xiàn)淋巴細胞浸潤和組織結構破壞、功能低下、血清中出現(xiàn)高滴度的TPOAb和甲狀腺球蛋白抗體為主要特征。其發(fā)病機制尚未完全闡明，但有文獻報道個體內的甲狀腺細胞凋亡[6]、Treg/Th17細胞軸異常[7]因素在HT的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。與細胞凋亡密切相關的細胞因子IFN-γ，以及與Th17細胞分化成熟過程密切相關的IL-6、TGF-β1和IL-17在HT發(fā)病過程中的作用，也逐漸引起學者們的關注。

IFN-γ主要由Th1細胞和自然殺傷細胞產生，能直接調節(jié)靶細胞對凋亡的易感性，參與細胞凋亡信號的傳導，誘導甲狀腺濾泡上皮細胞的Fas、腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體以及細胞凋亡的關鍵分子群Caspase的表達上調，活化DNA酶，降解染色體，促使甲狀腺濾泡上皮細胞發(fā)生凋亡，導致甲狀腺組織破壞[6]。

IL-17既是Th17細胞產生的特征性細胞因子，也是Th17細胞的主要效應分子[8]，具有強烈的促炎作用。IL-17能刺激人成纖維細胞表達細胞間黏附分子-1[9]，募集中性粒細胞和巨噬細胞在甲狀腺組織中浸潤，并誘導人內皮細胞和巨噬細胞分泌IL-6、IL-8、前列腺素E2等多種促炎癥細胞因子[10]，介導炎癥反應和甲狀腺組織的免疫損傷，促進自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生、發(fā)展。

IL-6主要由Th2細胞和單核巨噬細胞合成，可促進B細胞增殖、分化和分泌抗體，激活自身反應性T細胞，引發(fā)甲狀腺上皮細胞內的體液免疫功能紊亂。TGF-β是一種多肽類活性物質，因其能夠促進成纖維細胞的轉化生長而得名，共有6種亞家族成員，其中TGF-β1主要由Th3細胞和單核細胞產生，具有干預Na?ve T細胞分化，抑制巨噬細胞激活，下調機體免疫應答的功能。在IL-6的協(xié)同作用下，TGF-β1能啟動Th17效應細胞的分化，增強致炎癥細胞因子IL-17的表達，介導甲狀腺組織炎癥反應的發(fā)生[11]。

本實驗結果顯示，HT患者血清中炎癥細胞因子IFN-γ、IL-6、IL-17水平顯著高于對照組，且兩組患者的IL-6、IFN-γ、IL-17與TPOAb呈正相關；IL-6與FT3、IL-17與FT4呈負相關；IL-17與TSH呈正相關。該結果與筆者之前所報道的彌漫性毒性甲狀腺腫（graves disease，GD）患者血清中的相應細胞因子表達模式類似[12]，提示上述3種細胞因子參與甲狀腺的免疫紊亂過程，共同促進自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生。HT組調節(jié)性細胞因子TGF-β1水平略高于對照組，差異無統(tǒng)計學意義，且TGF-β1與甲狀腺功能指標無相關性。與薛海波等[7]的報道相似，但明顯不同于MANOLOVA等[13]的研究結果，可能是由于研究對象種族不同、病程差異的原因引起，有待更多的研究證實。

綜上所述，HT患者血清中炎癥細胞因子IFN-γ、IL-6及IL-17高表達，且與甲狀腺激素、TPOAb有一定的相關性。調節(jié)性細胞因子TGF-β1高表達不明顯，提示其在HT的發(fā)病過程發(fā)揮不同作用，而與HT的病情輕重程度有關。

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（童穎丹 編輯）

Expression of IFN-γ,IL-6,IL-17 and TGF-β1in serum of patients with Hashimoto's thyroiditis

Hong－lin LI1,Yun－h(huán)ui ZHENG1,Wei－ping LU1,Shi－jun YANG1, Yan－qiu LIU1,Mei－h(huán)ua GAO2
(1.The First Huai'an Hospital,Nanjing Medical University,Huai'an,Jiangsu 223300, P.R.China;2.Department of Immunology,Medical College,Qingdao University, Qingdao,Shandong 266071,P.R.China)

Abastract:【Objective】To explore the role of cytokines in the pathogenesis of Hashimoto's thyroiditis (HT)by detecting the levels of IFN－γ,IL－6,IL－17 and TGF－β1in HT patients.【Methods】A total of 20 patients with HT and 20 gender－and age－matched normal controls were examined.The levels of serum IFN－γ,IL－6,IL－17 and TGF－β1were measured by ELISA.FT3,FT4,TSH and TPOAb levels were determined by ECLIA.【Results】The levels of serum IFN－γ,IL－6 and IL－17 in the HT group were significantly higher than those in the controls group(P＜0.05).There were no significant difference in TGF－β1between the HT and control groups(P＞0.05).Correlation analysis revealed that IFN－γ,IL－6 and IL－17 were positively correlated with TPOAb(r=0.3602,0.3391 and 0.5165,P＜0.05),IL－6 was negative correlated with FT3(r=－0.3582,P＜0.05),IL－17 was negative correlated with FT4(r=－0.4295,P＜0.05),and a positive correlation was found between IL－17 and TSH(r=0.3976,P＜0.05).【Conclusion】IFN－γ,IL－6 and IL－17 are highly expressed in the peripheral blood of the patients with HT,which play important roles in the pathogenesis of HT with humoral immune disorder.

Hashimoto's thyroiditis;cytokine;interleukin 17;transforming growth factor－β1

R392.6

B

1005-8982（2015）32-0089-04

2015-07-20

高美華，E-mail：meihuagao66@163.com