氣相色譜法測(cè)定制痂酊中龍腦、異龍腦的含量

白 娟，劉增輝，周秀紅，朱倩云

(安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，安徽合肥 230061)

制痂酊由黃芩、黃柏、兒茶、冰片四味中藥經(jīng)乙醇浸提制成，為醫(yī)院制劑，具有清熱燥濕、收斂止痛等功效，臨床用于I度、Ⅱ度燒傷、燙傷等，該制劑收載于安徽省制劑規(guī)范中，未建立定量測(cè)定方法，冰片為方中君藥，而龍腦、異龍腦為冰片的主要活性成分，本文選擇龍腦、異龍腦作為控制該產(chǎn)品質(zhì)量的定量指標(biāo)，采用氣相色譜法進(jìn)行定量和測(cè)定方法的研究［1-10］，結(jié)果表明本方法簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

惠普6890型氣相色譜儀;FID檢測(cè)器;XP56-2型百萬分之一電子天平(AETTLER TOLEDO公司);BP210S型萬分之一電子天平(德國(guó)賽多利斯)。制痂酊(批號(hào):201308、201309、201310)和陰性制劑均由安慶市宜城醫(yī)院制劑室提供;龍腦對(duì)照品(批號(hào):110881-201107)、異龍腦對(duì)照品(批號(hào):110881-200802)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;萘、環(huán)己烷、乙醇等試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:HP-INNOWax Polyethylene Glycol毛細(xì)柱(30.0 m ×250 μm ×0.25 μm)，柱溫:130℃;進(jìn)樣口溫度:210℃;FID 檢測(cè)器，溫度:250℃;載氣(N2)流速:1.2 mL·min-1;氫氣流速:40 mL·min-1;空氣流速:400 mL·min-1;進(jìn)樣量:2μL;理論板數(shù)按龍腦峰計(jì)算為13 519，龍腦、異龍腦分離度為1.86。

2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 分別取龍腦、異龍腦對(duì)照品適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1 mL含0.271 0 mg 、0.235 2 mg的混合溶液，即得。

2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取萘適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1 mL含0.500 1 mg的溶液，即得。

2.4 對(duì)照品溶液的制備 精密量取2 mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別精密加入0.5 mL內(nèi)標(biāo)溶液，2 mL 80%乙醇溶液，加環(huán)己烷至10 mL，渦旋混合5 min后放置，待分層后取上層環(huán)己烷液，即得。

2.5 供試品溶液的制備 制痂酊搖勻，精密量取2 mL于15 mL帶塞試管中，精密加入0.5 mL內(nèi)標(biāo)溶液，加環(huán)己烷至10 mL，渦旋混合5 min后放置，待分層后取上層環(huán)己烷液，即得。

2.6 陰性對(duì)照溶液的制備 取缺冰片的缺味陰性制劑，按“2.5”項(xiàng)下的方法處理，即得。

2.7 專屬性實(shí)驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各2μL，注入氣相色譜儀測(cè)定，結(jié)果在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，供試品溶液與其它組分分離度良好，陰性對(duì)照無干擾，見圖1。

2.8 線性關(guān)系考察 精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL 分別置于 5 個(gè) 10 mL 量瓶中，分別精密加入0.5 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。同對(duì)照品儲(chǔ)備液分別進(jìn)樣2μL，測(cè)定峰面積，以龍腦、異龍腦進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，龍腦、異龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)萘峰面積的比值為縱坐標(biāo)，計(jì)算得回歸方程:龍腦 Y=25.794X-0.015(r=0.999 8，n=6)、異龍腦 Y=26.334X-0.007(r=0.999 8，n=6)。結(jié)果表明:龍腦、異龍腦分別在0.027 1 ～0.271 0 g·L-1、0.023 5 ～ 0.235 2 g·L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.9 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定。重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果龍腦、異龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)萘峰面積的比值RSD分別為0.62%、0.65%，表明本法精密度良好。

2.10 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品6份，分別按上述方法制備、測(cè)定龍腦、異龍腦含量，結(jié)果龍腦、異龍腦RSD分別為1.73%、1.66%，表明本法重現(xiàn)性良好。

2.11 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別間隔0、2、4、6、8 h 后依法測(cè)定，結(jié)果龍腦、異龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)萘峰面積的比值RSD分別為0.49%，0.58%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.12 回收率試驗(yàn) 精密量取龍腦、異龍腦含量分別為 0.303 7、0.216 1 g·L-1的供試品 9 份各 1 mL，置于15 mL帶塞試管中，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液(龍腦 0.271 0 g·L-1、異龍腦 0.235 2 g·L-1)0.6、0.6、0.6、1.0、1.0、1.0、1.5、1.5、1.5 mL ，內(nèi)標(biāo)溶液0.5 mL，80%乙醇溶液1 mL，加環(huán)己烷至10 mL，按供試品溶液制備方法平行制備并測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明加樣回收率較好，結(jié)果見表1。2.13 樣品測(cè)定 取三批樣品，按“2.5”項(xiàng)下制備樣品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表2。

3 討論

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

表2 樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)

龍腦、異龍腦為冰片主要成分，已報(bào)道的分析方法有氣相色譜法、氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法、衍生化高效液相色譜法、薄層掃描法等，GC法因靈敏度高、重現(xiàn)性好、方便快捷而優(yōu)于其它方法，且GC法還能進(jìn)一步區(qū)分合成冰片中龍腦與異龍腦各自的對(duì)映異構(gòu)體，用于區(qū)分合成冰片與天然冰片。故本實(shí)驗(yàn)采用GC法作為該制劑的含量測(cè)定方法。

基于毛細(xì)管色譜柱的高效性，分離效果比填充柱好，參考文獻(xiàn)［1-9］，本實(shí)驗(yàn)選擇 HP-INNOWax Polyethylene Glycol極性毛細(xì)管柱，各組分依據(jù)沸點(diǎn)從低到高和極性的差異，順序出峰，在已優(yōu)化的色譜條件下，無需程序升溫，采用130℃柱溫即可達(dá)到分析要求。

本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)法定量，對(duì)正十四烷［10］和萘［2］兩種內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行了比較，結(jié)果與供試品色譜峰均分離良好、無干擾，考慮萘相對(duì)正烷烴價(jià)平易買，且萘具有和冰片一樣的升華特性，可減少樣品供試液制備和測(cè)定過程中回收率的不穩(wěn)定性，故本實(shí)驗(yàn)選擇萘作為內(nèi)標(biāo)。

制備供試品溶液選擇提取方法時(shí)，曾對(duì)超聲提取與直接渦旋混合兩種方法進(jìn)行了比較，結(jié)果直接渦旋混合龍腦、異龍腦即可提取完全。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:本法準(zhǔn)確可靠，可用于制痂酊的質(zhì)量控制。

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