接觸性檢材502膠熏顯后手印脫落細胞的DNA提取

王先文，冷雪峰，王守玉

（1.海口市公安局刑警支隊，海南?？?570208；2.海口市公安局瓊山分局刑警大隊，海南?？?571100）

·技術(shù)與應(yīng)用·

接觸性檢材502膠熏顯后手印脫落細胞的DNA提取

王先文1，冷雪峰1，王守玉2

（1.?？谑泄簿中叹ш牐Ｄ虾？?570208；2.?？谑泄簿汁偵椒志中叹箨?，海南?？?571100）

目的建立接觸性檢材中手印定位、檢材轉(zhuǎn)移、DNA提取純化的方法。方法66例接觸性檢材經(jīng)502膠熏顯，手印接觸部位明確后，分別采用普通擦拭法及丙酮擦拭法進行檢材上手印脫落細胞的轉(zhuǎn)移，并使用超微量磁珠法試劑盒提取純化手印脫落細胞DNA，擴增后分析結(jié)果。結(jié)果用丙酮擦拭法得到的33例檢材有30份獲得了較好的STR分型結(jié)果，峰值范圍為1000～4000RFU，峰型均勻；而普通擦拭法很難獲得理想的STR分型。結(jié)論通過丙酮擦拭法轉(zhuǎn)移502膠熏顯的手印脫落細胞，STR分型效果更優(yōu)良，可應(yīng)用于法庭科學(xué)實踐。

法醫(yī)遺傳學(xué)；DNA；細胞；丙酮；手印；黏著劑

在法醫(yī)DNA檢驗中，接觸性檢材的細胞轉(zhuǎn)移一直是DNA檢驗工作中的重點和難點之一[1]，尤其是對接觸部位不明確的檢材，在脫落細胞轉(zhuǎn)移過程中盲目地隨機粘取或擦拭提取，往往遺漏或者混合了多個體基因。而使用502膠熏顯后，物證檢材接觸部位的手印能夠得到精確定位。因502膠的特殊性，使用普通棉簽擦拭法轉(zhuǎn)移手印脫落細胞[2]，整體檢測成功率偏低。本研究利用普通擦拭法和丙酮擦拭法轉(zhuǎn)移502膠熏顯后物證上的手印脫落細胞，使用超微量磁珠法純化提取DNA[3]，比較兩種檢材轉(zhuǎn)移方法對STR分型結(jié)果的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

BTSP-Ⅱ型502手印熏顯柜（北京布蘭特警用裝備有限責(zé)任公司），0808型恒溫混勻儀（珠海博邁杰生物科技有限公司），DR-MIX型翻轉(zhuǎn)搖勻儀（北京昊諾斯科技有限公司），KingFisher核酸純化儀（美國Thermo Fisher公司），Identifiler誖Plus PCR擴增試劑盒、9700型PCR擴增儀、3130XL型遺傳分析儀（美國AB公司），LC-超微量磁珠法DNA提取試劑盒、生物物證提取棉簽（長春市博坤生物科技有限公司），丙酮（廣東光華公司）。

1.2 樣本

實驗室日常受理檢驗的案件物證檢材66份，包

括工具、抽屜、座椅、不銹鋼防盜網(wǎng)、電器外殼、塑料制品、玻璃、首飾盒等，目標(biāo)均為物證上人體掌指接觸部位的遺留細胞。物證均置入潔凈502手印熏顯柜進行手印熏顯。在成功熏顯出手?。▓D1）并精確定位后，將樣本分為A、B兩組，每組33份，每組物證表面光滑程度、手印顯現(xiàn)的面積大小與色澤深淺基本相同。

圖1 窗玻璃經(jīng)502膠熏顯的手印

1.3 方法

1.3.1 檢材轉(zhuǎn)移

（1）普通擦拭法：用粘取高純水的半濕潤棉簽及干棉簽各1支，二步法擦拭A組33份檢材上手印部位。

（2）丙酮擦拭法：用粘取丙酮溶液的半濕潤棉簽及干棉簽各1支，二步法擦拭B組33份檢材上手印部位。

1.3.2 DNA提取

將A、B兩組棉簽拭子分別剪取放入1.5mL離心管中，加入LC-超微量磁珠法DNA提取試劑盒中的消化液200～600 μL（液面完全覆蓋載體），10 mg/mL蛋白酶K 10～30μL，振蕩15s，瞬時離心15s，恒溫混勻儀56℃消化1～2h（期間保持750r/min的轉(zhuǎn)速）。消化溫浴后，取出振蕩，以12000×g離心3min。吸取上清液，放入新的1.5mL或2mL離心管中，加入上清液2倍體積的吸附液及15μL磁珠，振蕩30s，放在翻轉(zhuǎn)搖勻儀60r/min 15min。室溫吸附后，將離心管放在磁力架上吸磁1 min，棄去上清液，保留150～200 μL濃縮磁珠吸附液。

將A、B兩組檢材中含有磁珠的濃縮吸附液轉(zhuǎn)移至LC-超微量磁珠法DNA提取試劑盒的試劑條中（內(nèi)有定裝洗滌液、85%乙醇溶液），在洗脫孔中加入20μL高純水，然后將分裝好的試劑條置于KingFisher核酸純化儀內(nèi)自動運行洗滌、洗脫程序。自動化程序結(jié)束后，將洗脫孔中的DNA溶液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。1.3.3 PCR擴增及電泳

使用Identifiler誖Plus PCR擴增試劑盒對上述方法獲取的A、B兩組檢材的DNA進行PCR擴增。擴增體系為10 μL（4 μL Master Mix+2 μL Primer Set+ 4μL DNA模板）。置于9700型PCR擴增儀按標(biāo)準(zhǔn)程序30個循環(huán)進行復(fù)合擴增[4]。擴增產(chǎn)物經(jīng)3130XL型遺傳分析儀電泳，GeneMapper ID v3.2軟件分析計算結(jié)果。

2 結(jié)果

利用普通擦拭法轉(zhuǎn)移的A組33份檢材STR分型結(jié)果中，僅8份檢材分型結(jié)果較好，RFU值在100～300；其余25份存在未出峰、大片段峰值較低、位點缺失、出現(xiàn)雜帶等現(xiàn)象（圖2）。而利用丙酮擦拭法轉(zhuǎn)移的B組33份檢材STR分型結(jié)果中，有30份檢材獲得完整分型結(jié)果，且大部分檢材的峰值范圍為1000～4000RFU，不同基因座的峰值高低均勻，雜合子兩峰高比例>75%，無雜帶（圖3）。

圖2 普通擦拭法轉(zhuǎn)移的檢材STR分型結(jié)果

圖3 丙酮擦拭法轉(zhuǎn)移的檢材STR分型結(jié)果

3 討論

502 膠是以α-氰基丙烯酸乙酯為主，加入增粘劑、穩(wěn)定劑、增韌劑、阻聚劑等合成的瞬間固化黏合劑。由于很強的吸電子基氰基和酯基的存在，這類單體很容易在水或弱堿的引發(fā)下，進行陰離子型聚合。人體汗液中含有水和氨基酸，502膠揮發(fā)后，在水和氨基酸的引發(fā)下，會發(fā)生聚合。在物體表面，凡有汗?jié)n的部位，就會引發(fā)502膠聚合，變成固體狀的聚合物，顯現(xiàn)出手印[5]，從而判斷出接觸DNA在物體表面的具體位置。但是，手印中人體脫落細胞也因聚合被牢牢固定在物體表面。因其不溶于水，使用純水浸濕的棉簽擦拭轉(zhuǎn)移物體表面手印中人體脫落細胞時，往往不能有效地將細胞轉(zhuǎn)移出來。

丙酮也稱二甲基甲酮，是有特殊氣味的無色可燃液體，能溶解油、脂肪、樹脂和橡膠等，也能溶解醋酸纖維素和硝酸纖維素，是一種重要溶劑，能有效溶解502膠，用其濕潤棉簽后擦拭502膠熏顯固定的手印時，可以充分轉(zhuǎn)移物證上的遺留人體細胞。

人體手印中因脫落細胞含量少，如轉(zhuǎn)移不充分，會嚴重影響檢驗效果。為了得到有效的生物檢材，提高實驗室DNA檢出率，首先必須對物證及載體種類有充分的認識，根據(jù)其特性做出科學(xué)的轉(zhuǎn)移提取方案[6]。對于經(jīng)502膠熏顯后的物證檢材，使用丙酮擦拭轉(zhuǎn)移手印中的脫落細胞，DNA的丟失可得到有效控制，大大提高了檢驗成功率。該方法操作簡單、檢出率高，但考慮到手印脫落細胞的微量性、所黏附物證載體的污染性及抑制性，在DNA模板的制備、PCR擴增過程中需使用純化效果優(yōu)良的超微量磁珠法提取試劑盒及抗抑制性強的擴增試劑。

[1]劉開會，王傳海，周靜，等.汗?jié)撝赣NA提取方法的初步研究[J].刑事技術(shù)，2002，（3）：12-13，19.

[2]郭燕霞，郝金萍，王寶榮，等.短暫接觸性人體脫落細胞DNA檢驗1例[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（3）：227.

[3]張廣峰，陳松，涂政，等.接觸DNA檢驗成功率的影響因素探討[J].刑事技術(shù)，2013，（3）：9-13.

[4]張璐，王保捷，丁梅，等.循環(huán)次數(shù)與體系對DNA檢測靈敏度的影響[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2013，29（2）：125-126.

[5]郭燕錦，高文淵，徐安華，等.“502”膠顯現(xiàn)手印技術(shù)的研究進展[J].化學(xué)試劑，2010，32（7）：613-616，670.

[6]Anslinger K，Selbertinger U，Bayer B，et al.Ninhydrin treatment as a screening method for the suitability of swabs taken from contact stains for DNA analysis[J].Int J Legal Med，2004，118（2）：122-124.

（本文編輯：李成濤）

DNA Extraction of Cast-off Cells of Fingerprints from 502 Glue Fumigated Contact Samples

WANG Xian-wen1,LENG Xue-feng1,WANG Shou-yu2
（1.Criminal Police Branch,Haikou Public Security Bureau,Haikou 570208,China;2.Criminal Police Brigade of Qiongshan Branch,Haikou Public Security Bureau,Haikou 571100,China）

Objective To establish a method of fingerprint position,sample transfer and fingerprint DNA extraction in contact samples.Methods Sixty-six cases were visualized by 502 glue fingerprint fumigation.Two methods,ordinary wipe and acetone wipe,were used to transfer cast-off cells of fingerprints from testing samples,respectively.DNA was extracted and purified by ultramicro magnetic bead kit.The data was resolved on genetic analysis after amplification.Results In 33 samples,30 samples got better STR analysis by acetone wipe method.The peak range was 1 000-4 000 RFU and peak shapes were equable.It was hard to get ideal STR typing by ordinary wipe method.Conclusion The samples are visualized by 502 glue fingerprint fumigation and the case-off cells are transferred by acetone wipe method.The method shows better STR analysis result,which might be a better method for forensic science practice.

forensic genetics;DNA;cells;acetone;fingerprint;adhesives

DF795.2

A

10.3969/j.issn.1004-5619.2015.06.010

1004-5619（2015）06-0454-02

王先文（1979—），男，侗族，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)學(xué)DNA檢驗鑒定；E-mail：wxw5411@163.com