氣相色譜法對(duì)丹參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的分析研究

李妮娜，王舉濤

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，現(xiàn)代中藥安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230031)

中草藥被用做藥品和食材已有數(shù)千年的歷史［1］，與西藥和化學(xué)藥品相比，中藥具有標(biāo)本兼治、療效溫和確切、毒副作用小等優(yōu)勢(shì)。隨著回歸自然的潮流，中草藥受到越來越多人的歡迎。如今為了滿足中草藥的生產(chǎn)需求，現(xiàn)代農(nóng)業(yè)大量的使用農(nóng)藥來控制農(nóng)作物生長期間的病蟲害以提高產(chǎn)量。由于缺乏對(duì)農(nóng)藥本身的性質(zhì)、農(nóng)藥對(duì)中草藥的作用機(jī)制、農(nóng)藥殘留特性和規(guī)律以及農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的影響等方面的認(rèn)識(shí)，往往造成中草藥中農(nóng)藥殘留污染［2］。

有機(jī)氯農(nóng)藥由于其殺蟲效果顯著、曾是各國用量最大的殺蟲劑，其使用歷史長、范圍廣、用量大，雖已禁用多年，但由于穩(wěn)定性高、半衰期長，不易降解和代謝，長期積存于植物和土壤中，至今果蔬、中草藥、土壤中檢出率仍相當(dāng)高。

丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖，具有血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消痛功效［3］。隨著對(duì)中藥丹參的研究，發(fā)現(xiàn)丹參制劑［4－7］及其單組份—丹參多酚酸［8－9］具有顯著的治療作用。因此保證其質(zhì)量對(duì)臨床安全有效的使用非常重要。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用氣相分析方法對(duì)不同產(chǎn)地不同批次的丹參藥材進(jìn)行了測(cè)定分析。

1 材料

1.1 儀器 GC2014型氣相色譜儀(日本島津)，63Ni ECD電子捕獲檢測(cè)器，超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (鄭州長城科公貿(mào)有限公司)。

1.2 藥材 丹參藥材采集于亳州藥材市場(chǎng)，來自四川、山東、河北、山西4個(gè)產(chǎn)地。

1.3 試劑 農(nóng)藥對(duì)照品液:α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、P.P’-DDE、O.P’-DDT、P.P’-DDD、P.P’-DDT，濃度均為 100 mg·L－1，購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所。其編號(hào)分別為:GSB05－2276－2008、GSB05－2277－2008、GSB05－2278－2008、GSB05－2279 －2008、GSB05 －2280 －2008、GSB05－2281－2008、GSB05－2282－2008、GSB05－2283－2008，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm ×0.25 μm)rtx-5，進(jìn)樣口溫度 230°C，檢測(cè)器溫度300°C，分流進(jìn)樣，分流比 20∶1，程序升溫初始溫度105°C，每分鐘升 6°C 至 200°C，保持 10 min。再每分鐘升6°C至240°C，保持15 min。載氣為高純氮(99.99%)。在此條件下對(duì)照品、樣品中各農(nóng)藥出峰順序見圖1及圖2。

2.2 對(duì)照品混合儲(chǔ)備液的制備 用石油醚將濃度均為 100 mg·L－1的 α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、P.P’-DDE、O.P’-DDT、P.P’-DDD、P.P’-DDT分別制成濃度均為4 mg·L－1的單標(biāo)儲(chǔ)備液。精密量取上述各單標(biāo)儲(chǔ)配液0.5 mL置10 mL容量瓶中，用石油醚(60～90°C)定容至刻度，得各成分濃度均為0.2 mg·L－1的混合溶液，作為對(duì)照品混合儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液的制備 參考《中國藥典》2010年版第一部制備方法［3］:取樣品于60°C干燥4 h，粉碎成細(xì)粉，過60目篩。取約2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲處理15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置(使分層)，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 mL具塞錐形瓶中，放置4 h。

精密量取35 mL，置50 mL圓底燒瓶中，置40℃水浴上旋蒸濃縮至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚(60～90℃)溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，加石油醚(60～90℃)精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸 1 mL，振搖 1 min，離心(3 000 r·min－1)10 min，精密量取上清液2 mL，置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，40℃下旋蒸溶液至適量，精密稀釋至l mL，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品混合儲(chǔ)備液，各0，0.05，0.25，0.5，2.5 mL 于 5 個(gè)10 mL容量瓶中，用石油醚(60～90℃)定容至刻度，制成每升含有 0，1，5，10，50 μg 的溶液。分別取1 μL注入氣相色譜儀，每個(gè)濃度平行進(jìn)樣3次，以平均峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。有機(jī)氯農(nóng)藥混合對(duì)照品溶液在0～50 μg·L－1線性關(guān)系良好，如表1。

表1 有機(jī)氯農(nóng)藥線性相關(guān)方程

2.5 檢測(cè)限 按照上述供試品制備的方法制備不含藥材的空白供試品溶液，精密吸取空白供試品溶液與濃度為1 μg·L－1的有機(jī)氯混合對(duì)照品溶液各1 μL注入氣相色譜儀，測(cè)得8種有機(jī)氯農(nóng)藥的最低檢測(cè)限均 ＜0.01 ×10－6。

2.6 精密度試驗(yàn) 取50 μg·L－1的對(duì)照品混合溶液連續(xù)進(jìn)6次，方法精密度的峰面積RSD(%)值分別為:α-BHC:2.58、β-BHC:2.12;γ-BHC:1.9;δ-BHC:2.9;P.P’-DDE:2.26;O.P’-DDT:0.97;P.P’-DDD:2.3;P.P’-DDT:1.75，結(jié)果顯示方法的精密度符合要求。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取丹參樣品6份，每份2 g，按供試品溶液制備的方法進(jìn)行處理，上述色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算丹參藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留量，結(jié)果丹參中的 α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、P.P’-DDE、O.P’-DDT、P.P’-DDD、P.P’-DDT 峰面積RSD(%)值均＜3.0%，結(jié)果表明該方法具有一定的重復(fù)性且重復(fù)性符合要求。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取50 μg·L－1的對(duì)照品混合溶液在 0，6，12，18，24，48 h 不同的時(shí)間進(jìn)行測(cè)定，方法穩(wěn)定性的峰面積 RSD(%)值分別為:α-BHC:1.57%;β-BHC:1.48%;γ-BHC:1.79%;δ-BHC:2.49%;P.P’-DDE:1.82%;O.P’-DDT:2.27%;P.P’-DDD:1.64%;P.P’-DDT:2.32%，結(jié)果顯示該方法的穩(wěn)定性符合要求。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 在丹參樣品中，分別加入一定量的對(duì)照品，按供試品溶液制備的方法進(jìn)行處理，分別取1 μL注入氣相色譜儀中，經(jīng)6次平行測(cè)定，測(cè)得含量并計(jì)算回收率，計(jì)算結(jié)果如表2。

表2 有機(jī)氯農(nóng)藥加樣回收率試驗(yàn) /ng

2.10 樣品測(cè)定 不同產(chǎn)地的丹參藥材按上述供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理，平行處理2次，取1 μL注入氣相色譜儀中，每份供試品測(cè)定3次，結(jié)果分析見表3。

表3 不同丹參藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥的含量/ng·g－1

3 討論

本實(shí)驗(yàn)建立了中藥丹參中有機(jī)氯農(nóng)藥六六六(BHC)和滴滴涕(DDT)殘留量的彈性毛細(xì)管氣相色譜分析方法，對(duì)以后研究其他中藥中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的研究提供了一定的參考價(jià)值。從樣品的測(cè)定分析結(jié)果來看，丹參藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥BHC和DDT的異構(gòu)體均有檢出。另外有研究指出，從實(shí)際情況看農(nóng)藥污染并不一定是中藥材在種植期間使用農(nóng)藥造成的，還有可能是因?yàn)榉N植土壤和空氣中殘留的農(nóng)藥對(duì)中藥材的間接污染以及中藥材在采收、加工、貯存、運(yùn)輸過程中造成的污染［10－11］。因此，在種植中藥材時(shí)不僅要嚴(yán)格控制農(nóng)藥的使用，選擇合適的土壤種植中藥材及避免農(nóng)藥的間接污染也及其重要。農(nóng)藥殘留量是影響中藥材質(zhì)量的重要因素之一，同時(shí)成為中藥材走向國際市場(chǎng)的攔路虎［12］，因此，降低中藥材中農(nóng)藥殘留量成為目前急需解決的問題。

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