玉竹糖蛋白分離純化及其體外抗氧化能力

王 艷，胡一鴻，陳秋志，尹洛毅，張雪嬌，劉景順，蔣秋情，金晨鐘，陳 勇*

（湖南人文科技學(xué)院生命科學(xué)系，湖南 婁底 417000）

玉竹糖蛋白分離純化及其體外抗氧化能力

王 艷，胡一鴻，陳秋志，尹洛毅，張雪嬌，劉景順，蔣秋情，金晨鐘，陳 勇*

（湖南人文科技學(xué)院生命科學(xué)系，湖南 婁底 417000）

采用磷酸緩沖液浸提法提取玉竹糖蛋白粗品（Polygonatum odoratum glycoprotein，PDG），經(jīng)葡聚糖凝膠G-100和刀豆凝集素A分離純化，得到糖蛋白組分PDG1和PDG3，經(jīng)高效液相色譜測定其分子質(zhì)量，并檢測PDG、PDG1和PDG3的體外抗氧化活性。結(jié)果表明，PDG1和PDG3的分子質(zhì)量分別為186 kD和28.3 kD；玉竹糖蛋白具有一定的還原能力，對羥自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有較強的清除作用，對脂質(zhì)過氧化具有抑制作用，且在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)（1～10 mg/mL）存在劑量關(guān)系，其抗氧化能力隨著玉竹糖蛋白質(zhì)量濃度的增加而增強，PDG1和PDG3的抗氧化能力優(yōu)于PDG。

玉竹；葡聚糖凝膠G-100；刀豆凝集素A；糖蛋白；抗氧化

玉竹（Polygonatum odoratum (Mill.) Druce）為百合科黃精屬多年生草本植物，廣泛分布在東北、華北、華東、西南和華南等省區(qū)，是我國傳統(tǒng)的藥食類植物，其中湖南湘玉竹和四川玉竹栽培面積較大[1]，其根莖常用于保健和食療，具有滋陰養(yǎng)肺、消炎抑菌、育發(fā)烏發(fā)和生津止渴等功效。玉竹富含多糖、黃酮、生物堿、甾醇和強心苷等生物活性物質(zhì)和多種人體需要的礦質(zhì)元素[2]。有研究表明，玉竹具有多種藥理作用，能夠顯著提高高糖小鼠的糖耐量，降低血糖含量[3-4]；提高酪氨酸酶的活性，促進(jìn)黑色素的合成[5]；有較強的清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picryl hydrazy，DPPH）自由基的能力[6]。在已發(fā)現(xiàn)的玉竹生物活性物質(zhì)中，研究最為透徹的是玉竹多糖，具有抗氧化[7]、提高保護(hù)酶和堿性磷酸酶活性[8]、抗動脈粥樣硬化[9]及抗腫瘤[10]作用。

糖蛋白是蛋白質(zhì)和多糖鏈的共價結(jié)合物，其種類多、分布廣，動植物、微生物及病毒中均有發(fā)現(xiàn)，是組成酶、激素、免疫球蛋白、載體蛋白、結(jié)構(gòu)蛋白和細(xì)胞膜等的結(jié)構(gòu)成分[11]，是一類重要生物活性物質(zhì)，具有增強免疫調(diào)節(jié)、抑制腫瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等功能[12-13]?？寡趸芰κ呛饬繝I養(yǎng)健康食品或植物生物活性成分的重要指標(biāo)，目前人工合成的抗氧化劑有二丁 基羥基甲苯、沒食子酸丙脂等，其抗氧化能力很強，但是人工合成抗氧化劑有禁忌和副作用，長期使用有致癌風(fēng)險。因此，人們更傾向于尋找天然的植物抗氧化劑。目前植物糖蛋白的研究主要以甘薯為材料，對糖蛋白的分離、純化、提取和保健功能進(jìn)行探討，如糖蛋白活性產(chǎn)生機理、糖蛋白調(diào)節(jié)免疫能力和降血脂的作用等[14]。由于糖蛋白具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和潛在保健作用與藥效，植物糖蛋白成為繼多糖之后的研究熱點。玉竹是我國廣泛栽培的中藥材，雖然前人對其多種活性成分進(jìn)行了詳盡的研究，但目前對玉竹糖蛋白的研究報道仍很少，對其分離純化往往采用膠過濾和離子交換，難以高效獲取均一產(chǎn)品。因此，本實驗以湘玉竹為研究對象，對糖蛋白采用親和層析進(jìn)行分離純化，并對其部分性質(zhì)進(jìn)行測定，以期為玉竹保健產(chǎn)品的深度開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

玉竹根莖 湖南新化縣藥材市場；DPPH、標(biāo)準(zhǔn)分子質(zhì)量蛋白質(zhì) 美國Sigma公司；TSKgel G5000PWXL-CP色譜柱 日本Tosoh公司；葡聚糖凝膠G-100（Sephadex G-100）、刀豆凝集素A（concanavalin A） 瑞典Amersham Biosciences公司。其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

SP-754型分光光度計 上海光譜儀器公司；Biological LP低壓色譜系統(tǒng) 美國Bio-Rad公司；LC-10Avp plus高效液湘色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀 日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 玉竹糖蛋白粗提取

切成片的玉竹于80 ℃烘干，粉碎過80 目篩，用2 倍體積的石油醚混勻，室溫放置過夜脫脂后過濾，置于45 ℃條件下烘干，然后用磷酸緩沖液按一定料液比于0～4 ℃低溫條件下浸提，10 000 r/min離心10 min，收集上清液置于真空冷凍干燥干燥24 h，得到玉竹糖蛋白（Polygonatum odoratum glycoprotein，PDG）粗制品。

1.3.2 提取工藝條件優(yōu)化

分別設(shè)定不同浸提時間和料液比（g/mL）對PDG預(yù)提，考馬斯亮蘭法測定蛋白質(zhì)含量，用蛋白質(zhì)粗略估計PDG，每個處理重復(fù)3次。

1.3.3 葡聚糖凝膠G-100過濾

參照Hu Yihong等[15]的方法。采用5 cm×70 cm層析柱，每次上樣10 mL PDG （1 mg/mL），洗脫液采用25 mmol/L Tris-HCl（pH 7.2）緩沖液，洗脫流速1 mL/min，分別收集各蛋白洗脫峰組分。

1.3.4 刀豆凝集素A親和層析純化

參照吳娟等[16]的方法純化PDG。采用0.5cm×10 cm的刀豆凝集素A層析柱，用200 mL 20 mmol/L pH 7.4的Tris-HCl緩沖液（含1 mmol/L MnCl2、1 mmol/L CaCl2和0.5 mmol/L NaCl）以1 mL/min流速平衡柱子，再以0.5 mL/min流速上樣，然后用100 mL 20 mmol/L pH 7.4的Tris-HCl緩沖液（含1 mmol/L MnCl2、1 mmol/L CaCl2和 0.5 mmol/L NaCl）洗滌層析柱中未結(jié)合的蛋白質(zhì)，再用150 mmol/L甘露糖洗脫液（含150 mmol/L的葡萄糖）以0.5 mL/min流速洗脫，收集洗脫液，透析除糖并用固體聚乙二醛反透析至原體積，分別測定每管280 nm波長處吸光度，并按照孫興力等[17]的方法測定490 nm波長處的吸光度。

1.3.5 HPLC測定PDG分子質(zhì)量

參照陳海相等[18]的方法測定。采用色譜純牛肝過氧化氫酶（250 kD）、β-半乳糖苷酶（118 kD）、牛血清蛋白（66.43 kD）、辣根過氧化物酶（40 kD）和α-胰凝乳酶（25 kD）為標(biāo)樣，所有樣品均用0.1 mol/L pH 7.8的磷酸鹽緩沖液配成25 mg/mL質(zhì)量濃度，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后進(jìn)樣。其中，經(jīng)刀豆凝集素A親和層析純化的PDG先用固體聚乙二醇反透析濃縮到原體積的1/10。色譜條件：采用30 cm×7.8 mm的TSKgel G5000PWXL-CP蛋白質(zhì)專用色譜柱，流動相為0.1 mol/L pH 7.8的磷酸鹽緩沖液，洗脫流速0.3 mL/min。

1.3.6 體外抗氧化活性的測定

總還原能力和羥自由基清除率測定按照胡一鴻等[19]的方法，體外清除DPPH自由基能力按照Chung等[20]的方法，F(xiàn)e2+誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的抑制作用按照張爾賢等[21]的方法。以上測定均用1/10 PDG質(zhì)量濃度的VC作對照。并分別按如下公式計算：

式中：A樣品為含PDG和H2O2吸光度；A損傷為只含H2O2吸光度；A未損為不含H2O2吸光度。

式中：Aj為對照品吸光度；Ai為樣品吸光度。

式中：A0為空白對照管吸光度；A為樣品管吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 料液比、浸提時間對玉竹蛋白得率的影響

表 1 浸提時間、料液比對玉竹蛋白得率的影響Table 1 Effects of extraction time and material/liquid ratio on the extraction rate of P. odoratum glycoproteins

如表1所示，按浸提時間（12、24、32 h）和料液比（1∶10、1∶20、1∶30）進(jìn)行實驗，當(dāng)料液比1∶20、提取時間24 h時蛋白質(zhì)的得率達(dá)到13.1%，進(jìn)一步提高溶劑用量和延長浸提時間蛋白質(zhì)的得率上升很少。蛋白質(zhì)提取在考慮得率的前提下盡量縮短浸提時間和采用低的溶劑用量，以減少蛋白質(zhì)變性和節(jié)省成本。因此，本實驗采用浸提時間24 h、料液比1∶20。

2.2 PDG粗制品的純化

圖 1 葡聚糖凝膠G-100分離PDG的柱層析圖譜Fig.1 Elution of PDG on Sephadex G-100

圖 2 刀豆凝集素A分離PDG1（a）和PDG3（b）的柱層析圖譜Fig.2 Elution of PDG1(a) and PDG3(b) on concanavalin A

如圖1所示，PDG粗制品經(jīng)葡聚糖凝膠G-100層析，分離出峰1（48 mL）、峰2（60 mL）和峰3（54 mL）3 個組分，分別將峰1、峰2和峰3經(jīng)刀豆凝集素A親和層析純化，發(fā)現(xiàn)峰1和峰3能檢出糖與蛋白質(zhì)（圖2），得到PDG1和PDG3兩種糖蛋白，組分峰2未檢出糖，說明峰2不是糖蛋白。

2.3 HPLC測定糖蛋白分子質(zhì)量

通過對標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)進(jìn)行HPLC分析，測定標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)牛肝過氧化氫酶、β-半乳糖苷酶、牛血清蛋白、辣根過氧化物酶和α-胰凝乳酶的保留時間分別為19.35、 21.01、24.15、25.58、29.71 min（圖3），得到分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)曲線，其分子質(zhì)量的回歸方程為：lgM=—0.093 8t+ 7.105 8。對經(jīng)刀豆凝集素A純化后組分進(jìn)行HPLC分析，測得PDG1和PDG3的保留時間分別為19.58 min和28.29 min（圖4、5），求得PDG1和PDG3的分子質(zhì)量分別為186 kD和28.3 kD。

圖 3 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的HPLCFig.3 HPLC of protein marker

圖 4PDG1HPLC洗脫曲線Fig.4 HPLC chromatogram of PDG1

圖 5 PDG3HPLC洗脫曲線Fig.5 HPLC chromatograpm of PDG3

2.4 玉竹糖蛋白的體外抗氧化活性

2.4.1 總還原力的測定

總還原力用來衡量生物活性物質(zhì)失去電子的能力，其強弱與失去電子的能力呈線性關(guān)系。還原物質(zhì)能夠?qū)e3+還原為Fe2+，生成物在700 nm波長處有最大吸光度，因而700 nm波長處吸光度的大小反映了總還原力的強弱[19]。由圖6可知，1～10 mg/mL PDG、PDG1和PDG3的總還原力隨著質(zhì)量濃度的增加而呈上升趨勢，且PDG低于PDG1和PDG3，但PDG、PDG1和PDG3的總還原能力明顯低于VC。1 mg/mL的VC、PDG、PDG1和PDG3的總還原力分別為2.09、0.04、0.07和0.06，說明玉竹糖蛋白具有較弱的還原力。

圖 6 玉竹糖蛋白的總還原力Fig.6 Reducing power of PDG1and PDG3

2.4.2 體外清除DPPH自由基能力

圖 7 玉竹糖蛋白對DPPH自由基的清除作用Fig.7 DPPH radical-scavenging capacity of PDG1and PDG3

DPPH自由基是一種帶有單電子的自由基，醇溶液呈紫色并在525 nm波長處有強吸收。自由基能與單電子配對而使其吸光度逐漸消失，其褪色程度也與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因此可用525 nm波長處的吸光度來表示DPPH自由基的清除能力[22]。如圖7所示，1～10 mg/mL的PDG、PDG1和PDG3隨著質(zhì)量濃度的增加，清除DPPH自由基的能力也逐漸增加，最高清除率分別達(dá)18.67%、31.71%和 25.88%，說明玉竹糖蛋白具有較強的DPPH自由基清除能力。

2.4.3 對羥自由基的清除作用

圖 8 玉竹糖蛋白對羥自由基的清除作用Fig.8 Hydroxyl radical-scavenging capacity of PDG1and PDG3

羥自由基是對生物體危害最大的一種自由基，能使糖類、蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)發(fā)化生氧化和損傷，導(dǎo)致細(xì)胞壞死或突變，與衰老、腫瘤和細(xì)胞吞噬等作用有密切的聯(lián)系[23]。采用鄰二氮菲-金屬鐵離子-H2O2體系，通過Fenton反應(yīng)生成羥自由基，促使鄰二氮菲-Fe2+被氧化為鄰二氮菲-Fe3+，降低其水溶液在波長510 nm處最大吸收值測算對羥自由基的清除率。如圖8所示，1～10 mg/mL的PDG、PDG1和PDG3對羥自由基清除率隨著其質(zhì)量濃度的增加而增加，但PDG對羥自由基的清除率低于PDG1和PDG3，在10 mg/mL時，分別達(dá)8.1%、17.93%和14.85%。且他們的清除作用均遠(yuǎn)低于強抗氧化劑VC，在1 mg/mL時VC清除率高達(dá)79.37%。

2.4.4 對Fe2+誘發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的抑制作用

圖 9 玉竹糖蛋白對脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的抑制作用Fig.9 Inhibitory effects of PDG1and PDG3on lipid peroxidation

不飽和脂肪酸是維持細(xì)胞運輸系統(tǒng)和酶活性的重要物質(zhì)。由于不飽和脂肪酸容易被氧化，因而用保護(hù)不飽和脂肪酸不受氧化的能力來衡量生物活性物質(zhì)的抗氧化能力[24]。從圖9可知，1～10 mg/mL PDG、PDG1和PDG3對脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的抑制作用有劑量依賴關(guān)系，其PDG1和PDG3的抑制作用強于PDG，但明顯低于VC，1 mg/mL的VC、PDG、 PDG1和PDG3的抑制率分別達(dá)57.95%、0.37%、5.6%和0.87%。

3 討 論

植物糖蛋白是具有重要生理功能天然活性產(chǎn)物，在食品、藥品制造和抗氧化劑方面具有應(yīng)用潛力。目前人們已從甘薯中分離出分子質(zhì)量26.9～508 kD的多種甘薯糖蛋白[14,25]，鄒柯婷等[26]也采用DEAE-52陰離子交換、葡聚糖凝膠G-100過濾得到兩種分子質(zhì)量約為100 kD的玉竹糖蛋白。本實驗通過磷酸緩沖液浸提、葡聚糖凝膠G-100過濾和刀豆凝集素A親和層析3個步驟得到分子質(zhì)量為186 kD和28.3 kD的兩種玉竹糖蛋白PDG1和PDG3，分離出的糖蛋白分子質(zhì)量與前人的結(jié)果差異較大，說明分離出的糖蛋白是兩種新的糖蛋白。大部分植物糖蛋白具有一定的抗氧化能力，如80～320 μg/mL的紫甘薯糖蛋白的還原力隨著其質(zhì)量濃度的增加而呈上升趨勢[27]，28 mg/mL的山藥糖蛋白CYG-1、CYG-2還原力達(dá)83.35%和 88.14%[28]，糖蛋白的這種抗氧化性可能與蛋白質(zhì)所含琉基含量或類似于酶的活性有關(guān)[29-30]，本實驗中玉竹糖蛋白PDG、PDG1和PDG3有較弱的還原能力，1～10 mg/mL PDG、PDG1和PDG3的還原力隨著其質(zhì)量濃度的增加而增加。PDG、PDG1和PDG3清除羥自由基的能力也隨著其質(zhì)量濃度的增加而增加，在10 mg/mL時，其清除率達(dá)分別達(dá)8.1%、17.93%和14.85%，清除能力與建寧蓮子糖蛋白GLP-Ⅰ相似，但低于建寧蓮子糖蛋白GLP-Ⅱ和蒲公英糖蛋白的清除能力[31-32]。段玉峰等[33]報道丹參糖蛋白清除對DPPH自由基有一定的清除作用，但劑量效應(yīng)關(guān)系不是很明顯，本實驗中玉竹糖蛋白PDG、PDG1和PDG3隨質(zhì)量濃度的增加清除DPPH自由基的能力也逐漸增加，劑量效應(yīng)關(guān)系較明顯，但弱于DBD糖蛋白的清除作用[34]。植物多糖對Fe2+誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有較強的抑制作用[19]，本實驗發(fā)現(xiàn)PDG、PDG1和PDG3也對Fe2+誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)也有一定抑制作用，但抑制效果較弱。實驗結(jié)果表明玉竹糖蛋白具有一定的抗氧化功能，且玉竹糖蛋白粗品PDG的抗氧化能力弱于其純品PDG1和PDG3。蛋白質(zhì)與多糖鏈結(jié)合形成糖蛋白后，其穩(wěn)定性、耐熱性、溶解性均有所提高，多糖的活性基團(tuán)豐富了蛋白質(zhì)的功能。因此，對玉竹糖蛋白的進(jìn)一步研究，對于玉竹產(chǎn)品的深度開發(fā)和豐富糖蛋白生物學(xué)有著十分重要的意義。

[1] 全國中草藥匯編編寫組. 全國中草藥匯編[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1978: 84.

[2] LAN Gaoshuang, CHEN Haixia, WANG Zhaoshuai, et al. Extraction of Polygonatum odoratum polysaccharides using response surface methodology and preparation of a compound beverage[J]. Carbohydrate Polymers, 2011, 86: 1175-1180.

[3] SHU Xiaoshun, Lü Jinhai, TAO Jun, et al. Antihyperglycemic effects of total fl avonoids from Polygo natum odoratumin STZ and alloxaninduced diabetic rats[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2009, 124(3): 539-543.

[4] 郭常潤, 戴平, 張欣, 等. 玉竹總皂苷降血糖作用實驗研究[J]. 海峽藥學(xué), 2011, 23(4): 19-21.

[5] 羅少華, 李新榮. 玉竹對酪氨酸酶的激活作用[J]. 中國生化藥物雜志, 1996, 17(1): 25-27.

[ 6] 張軒銘, 王冬梅, 王瑾, 等. 不同產(chǎn)地玉竹黃酮提取物體外抗氧化活性研究[J]. 西北植物 學(xué)報, 2011, 31(3): 628-631.

[7] 楊穎, 孫文武, 周晨. 響應(yīng)曲面法優(yōu)化玉竹水溶性多糖 提取及體外抗氧化研究[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報, 2013, 32(3): 298-397.

[8] JIANG Qunguang, Lü Yunxia, DAI W eidong, et al. Extraction and bioactivity of Polygonatum polysaccharides[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2013, 54: 131-135.

[9] 許金波, 陳正玉. 玉竹多糖抗腫瘤作用及其對免疫功能影響的實驗研究[J]. 深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志, 1996, 6(1): 13-15.

[10] 劉燊, 胡彥君. 玉竹提取物玉竹多糖對1型糖尿病小鼠的作用研究[J].廣州醫(yī)藥, 2009, 40(6): 49-53.

[11] 劉興華, 趙浩如. 天然糖蛋白的提取、分離與純化[J]. 藥學(xué)進(jìn)展, 2006, 30(12): 542-547.

[12] 柳娜, 殷志, 莊英幟, 等. 蛞蝓糖蛋白提出多糖對肺腺癌作用的實驗研究[J]. 臨床腫瘤學(xué)雜志, 2008, 13(9): 779-783.

[13] 呂克凡, 高世勇. 糖蛋白抗腫瘤研究進(jìn)展[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2012, 33(12): 1642-1643.

[14] 連喜軍, 羅慶豐, 魯曉翔, 等. 國內(nèi)甘薯糖蛋白研究進(jìn)展[J]. 食品研究與開發(fā), 2008, 29(2): 184-188.

[15] HU Yihong, GUO Zhenfei. Purifi cation and characterization of oxalate oxidase from wheat seedlings[J]. Acta Physiologiae Plantarum, 2009, 31: 229-235.

[16] 吳娟, 金晨鐘, 劉姝梅, 等. 紅薯過氧化物酶的純化與性質(zhì)測定[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012(9): 41-43.

[17] 孫興力, 陳德球, 王文淵. 不同生長期玉竹中多糖含量變化的比較研究[J]. 現(xiàn)代中藥研究與實踐, 2010, 24(4): 9-11.

[18] 陳海相, 顧靖, 崔懷珠, 等. 用高效液相色譜測定絲膠分子質(zhì)量的研究[J]. 絲綢, 1997(4): 8-13.

[19] 胡一鴻, 葉龍, 朱術(shù)超, 等. 番荔枝種子粗多糖抗氧化能力研究[J].熱帶作物學(xué)報, 2011, 32(6): 1051-1054.

[20] CHUNG Y C, CHANG C T, CHAO W W, et al. Antioxidative activity and safety of the 50 ethanolic extract from red bean fermented by Bacillus subtilis IMR-NK1[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2002, 50(8): 2454-2458.

[21] 張爾賢, 俞麗君, 周意琳, 等. Fe2+誘發(fā)脂蛋白PUFA過氧化體系及對若干天然產(chǎn)物抗氧化作用的評價[J]. 生物化學(xué)與生物物理學(xué)報, 1996, 28(2): 218- 222.

[22] 張先廷, 周俊麗, 王迎進(jìn). 地皮菜粗多糖的抗氧化性研究[J]. 長治學(xué)院學(xué)報, 2012, 29(5): 69-71.

[23] 劉國安, 韓瀟, 侯國鵬, 等. 多種化合物對Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基的清除作用[J]. 蘭州大學(xué)學(xué)報, 2012, 48(2): 86-89.

[24] DESSI M, NOCE A, BERTUCCI P, et al. Atherosclerosis, dyslipidemia, and infl ammation: the signifi cant role of polyunsaturated fatty acid[J/OL]. ISRN Inflammation, 2013. http://dx.doi. org/10.1155/2013/191823.

[25] 龔魁杰. 甘薯糖蛋白研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2007, 28(6): 359-362.

[26] 鄒柯婷, 李淼, 陳雙, 等. 玉竹糖蛋白的分離純化及理化性質(zhì)的研究[J].食品工業(yè)科技, 2012, 33(8): 191-197.

[27] 羅秋水, 上官新晨, 蔣艷, 等. 紫紅薯糖蛋白體外抗氧化活性研究[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2012, 34(4): 809-813.

[28] 孫宇婧, 韓濤, 李麗萍, 等. 山藥糖蛋白體外抗氧化活性研究[J]. 園藝學(xué)報, 2010, 37(6): 1009-1014.

[29] 鄭裕國, 王遠(yuǎn)山, 薛亞平, 等. 抗氧化劑的生產(chǎn)及應(yīng)用[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2004: 251-252.

[30] 翁新楚. 杭氧化劑及其杭氧化機制[J]. 鄭州糧食學(xué)院學(xué)報, 1993(4): 20-29.

[31] 高居易, 陳彥. 建寧蓮子糖蛋白的分離、純化及清除自由基作用[J].武漢植物學(xué)研究, 2003, 21(2): 175-178.

[32] 鐘潔, 段玉峰, 陳雙. 蒲公英糖蛋白的體外抗氧化研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2008, 29(9): 152-157.

[33] 段玉峰, 李淼, 王應(yīng)強, 等. 丹參糖蛋白提取物抗氧化實驗研究[J].食品工業(yè)科技, 2009, 30(1): 139-141.

[34] OH P, LIM K. Antioxidant activity of Dioscorea batatas decne glycoprotein[J]. European Food Research and Technology, 2008, 226: 507-515.

Purifi cation of Glycoprotein from Polygonatum odoratum and Its Antioxidant Activity in vitro

WANG Yan, HU Yihong, CHEN Qiuzhi, YIN Luoyi, ZHANG Xuejiao, LIU Jingshun, JIANG Qiuqing, JIN Chenzhong, CHEN Yong*
(Department of Life Sciences, Hunan University of Humanities, Science and Technology, Loudi 417000, China)

Crude glycoproteins (PDGs) were obtained from Polygonatum odoratum through phosphate buffer extraction. PDGs were further purified by Sephadex G-100 gel filtration and concanavalin A affini t y chromatography, and PDG1and PDG3were acquired. The molecular weights and antioxidant activity of these two fractions were determined. The results showed that PDG1and PDG3had a molecular weight of 186 and 28.3 kD, respectively, and PDG, PDG1and PDG3had reducing power, strong abilities to scavenge hydroxyl radical and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazy (DPPH) radical and inhibitory effects against lipid peroxidation, showing a dose-effect relationship in the range o f 1–10 mg/mL. Generally, PDG1and PDG3exhibited better antioxidant activity than PDGs.

Polygonatum odoratum; Sephadex G-100; concanavalin A; glycoprotein; antioxidant activity

Q599

A

1002-6630（2015）02-0052-05

10.7506/spkx1002-6630-201502010

2014-04-11

湖南省教育廳優(yōu)秀青年項目（12B070）；湖南人文科技學(xué)院優(yōu)秀青年項目（2013QN01）；2014年湖南省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實驗計劃項目（504）

王艷（1985—），女，助教，碩士，主要從事天然產(chǎn)物的開發(fā)與利用及分子生物學(xué)研究。E-mail：wangyehaol@163.com

*通信作者：陳勇（1974—），男，高級農(nóng)藝師，碩士，主要從事農(nóng)產(chǎn)品加工研究。E-mail：henon@163.com