腦性癱瘓動(dòng)物模型造模方法研究進(jìn)展*

何 琪，邰先桃，張星賀，董美辰

（云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明650500）

腦性癱瘓（Cerebral palsy，CP）簡稱腦癱，是一組持續(xù)存在的中樞性運(yùn)動(dòng)和姿勢發(fā)育障礙、活動(dòng)受限癥候群，這種癥候群是由于發(fā)育中的胎兒或嬰幼兒腦部非進(jìn)行性損傷所致。患兒還常伴發(fā)許多其他的障礙，如感覺、知覺、認(rèn)知、交流、和行為障礙，以及癲癇和繼發(fā)性肌肉、骨骼問題[1].在發(fā)達(dá)國家新生兒CP發(fā)病率為2‰，甚至更高[2]，我國腦癱發(fā)病率有逐年增多的趨勢[3]。CP 不僅嚴(yán)重影響了患兒的正常生長發(fā)育、社會(huì)交往、學(xué)習(xí)和生存的能力，而且造成了家庭和社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，是一個(gè)重大的衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)問題。目前CP 的發(fā)病機(jī)制尚未完全，也無相應(yīng)的有效的治療策略。為了對該CP 進(jìn)行有效的預(yù)防和診斷治療，研究并明確CP 發(fā)生發(fā)展機(jī)制至關(guān)重要，而有效而實(shí)用的CP 動(dòng)物模型的制備是前提。因此，本文從CP 動(dòng)物模型的制作和評估方法兩方面進(jìn)行綜述。

1 CP 模型動(dòng)物的選擇

目前，國內(nèi)外報(bào)道的運(yùn)用于CP 模型的動(dòng)物主要有羊、豬、兔和鼠等。腦白質(zhì)損傷（White matter injury，WMI）是腦損傷的主要病理變化之一，能導(dǎo)致髓鞘損傷和神經(jīng)纖維不能髓鞘化等，從而導(dǎo)致CP患兒慢性神經(jīng)功能障礙[4]，發(fā)育中的大腦在缺氧缺血時(shí)特別容易形成腦白質(zhì)的損傷，而胎羊的腦白質(zhì)發(fā)育在生理和解剖方面與人類有很多共通之處，從而為研究復(fù)雜的人類腦損傷的病理生理過程提供了途徑[5]。

新生豬在生長發(fā)育、血液循環(huán)、新陳代謝等各方面與新生兒相似。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，新生豬在出生7d內(nèi)，大腦的發(fā)育成熟度與人類新生兒相近，在磁共振頻譜分析上，新生豬的波峰特點(diǎn)也與人類新生兒相吻合，因此我們可以選用新生豬來作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，模擬人類新生兒大腦缺氧缺血性時(shí)的病理變化[6]。

大鼠神經(jīng)解剖與人類極為接近[7]，且鼠的大小合適、繁殖能力強(qiáng)、抗感染能力強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)方便和比較經(jīng)濟(jì)；大鼠腦組織體積小，便于取材，進(jìn)行病理切片的觀察，同時(shí)，大鼠情緒反應(yīng)較為敏感，便于進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)觀察。由于胎羊和新生豬等大型動(dòng)物不易獲得、易死亡、費(fèi)用昂貴和飼養(yǎng)條件受到限制等原因，目前大多選用鼠做為實(shí)驗(yàn)CP 模型動(dòng)物。

2 CP 模型造模方法

小兒CP 的病因常被總結(jié)為窒息、早產(chǎn)和核黃疸等因素[8]。目前CP 模型的造模方法基本可分為頸總動(dòng)脈結(jié)扎法、宮內(nèi)感染法、神經(jīng)毒素法、宮內(nèi)缺氧缺血法等。

2.1 頸總動(dòng)脈結(jié)扎法

缺氧缺血是CP 發(fā)生的常見病因。典型的缺氧缺血CP 模型的操作有：參照Adem 等[9-10]的建模方法，使用出生滿7d 的健康Wistar 幼鼠進(jìn)行模型制備，首先吸入異氟醚麻醉后，用濃度為75%乙醇消毒頸部皮膚，在手術(shù)顯微鏡下于頸正中行一長約0.5cm 的縱行切口，然后分離皮下組織和淺筋膜等，頸總動(dòng)脈位于右側(cè)頸動(dòng)脈三角內(nèi)，在找到頸動(dòng)脈和伴行的迷走神經(jīng)后，將其小心分離，接著以絲線雙重結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈并離斷，最后縫合頸部皮膚切口。術(shù)后麻醉恢復(fù)2h 后，將模型幼鼠放置在由8%O2和92%N2的混合氣體造成的缺氧環(huán)境中，時(shí)間為2h。隨后在不同的時(shí)間點(diǎn)對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用動(dòng)物行為學(xué)試驗(yàn)如平衡木試驗(yàn)和足印分析等，運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位及病理檢測等來驗(yàn)證CP 模型。缺氧可導(dǎo)致腦血流增加，但白質(zhì)區(qū)不如灰質(zhì)區(qū)明顯，腦血流量增加導(dǎo)致代償能量利用，因此缺氧可導(dǎo)致嚴(yán)重的腦白質(zhì)損害。在胚胎早期缺血可引起腦發(fā)育畸形，胚胎后期可發(fā)生破壞，如孔洞腦、腦軟化癥和無腦性腦積水等，缺氧缺血發(fā)生在圍生期可造成腦梗死、腦出血等嚴(yán)重?fù)p傷。

但是也有部分報(bào)道稱該方法更易引起灰質(zhì)的損傷而非白質(zhì)，進(jìn)而提出了雙側(cè)頸總動(dòng)脈切斷的模型，然而，雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎的動(dòng)物存活率低于單側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎的存活率[11]。單側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法經(jīng)過多番驗(yàn)證被認(rèn)為是一種可靠且穩(wěn)定的模型[12]。

2.2 宮內(nèi)感染法

WMI 是早產(chǎn)兒腦損傷最常見的類型，腦白質(zhì)損傷產(chǎn)生的原因復(fù)雜，但炎癥反應(yīng)在腦白質(zhì)損傷中產(chǎn)生的作用在近幾年來受到較大重視[13]。近年來，大量研究表明圍產(chǎn)期感染，如絨毛膜羊膜炎和胎兒血管炎不僅是早產(chǎn)的重要原因，同時(shí)與早產(chǎn)兒腦損傷的發(fā)生密切相關(guān)[14]。采取孕鼠腹腔內(nèi)或子宮頸內(nèi)注射脂多糖，以建立CP 模型，最為常見，應(yīng)用最廣泛。

2.2.1 腹腔內(nèi)注射法

李曉婕等[15]將國外學(xué)者的腹腔內(nèi)注射建立CP模型的方法加以改進(jìn)，主要步驟有：將24 只Wistar孕鼠分為2 組，實(shí)驗(yàn)組16 只，對照組8 只，實(shí)驗(yàn)組每天注射1 次脂多糖，每次為350μg/kg，連續(xù)注射2d，對照組則腹腔注射同劑量的生理鹽水。觀察孕鼠的分娩時(shí)間并記錄新生鼠出生體重，凡早于孕22d 出生的新生鼠均視為早產(chǎn)鼠，待新生鼠出生后立即處死分娩后的母鼠，取其子宮和胎盤，通過做HE 染色觀察宮內(nèi)感染情況來驗(yàn)證CP 模型是否成功。

2.2.2 子宮頸內(nèi)注射法

邱洪斌等[16]復(fù)制CP 模型的方法是：模型動(dòng)物選用成熟Wistar 大鼠，孕鼠在受孕第10 天、第15天及第20 天分別代表妊娠早、中、晚的不同時(shí)段，對其分組后給藥，給藥時(shí)先乙醚吸入麻醉孕鼠，再用陰道擴(kuò)張器暴露孕鼠子宮頸，將0.1mL 脂多糖溶液用1mL 注射器注射到子宮頸肌肉內(nèi)（脂多糖溶液濃度為0.1mg/kg 孕鼠體重稱取脂多糖溶于0.1mL生理鹽水中），注射時(shí)不可將液體注入子宮腔內(nèi)，同時(shí)確保操作熟練度，每只孕鼠操作時(shí)間不得超過2min。

2.2.3 腹腔注射脂多糖合并缺氧法

高峰等[17]的CP 建模方法：選用受孕17dWistar孕鼠經(jīng)腹腔注射脂多糖，劑量為0.4mg/（kg·d），于注射12h 后將孕鼠置于由8%氧氣和92%氮?dú)鈽?gòu)成的缺氧環(huán)境中缺氧2～2.5h，待孕鼠恢復(fù)4h 后，再次腹腔注射同劑量脂多糖，最后放回籠中飼養(yǎng)，等待孕鼠自體分娩后將生下的乳鼠和母鼠同籠飼養(yǎng)。Hu 等[18]采用腹腔注射脂多糖宮內(nèi)感染合并全身缺氧的方法建立一種微創(chuàng)傷、簡單易行、成功率高、逼真模擬人類胎兒在圍產(chǎn)期缺血缺氧過程的CP 動(dòng)物模型。

2.3 神經(jīng)毒素法

膽紅素血癥時(shí)，膽紅素通過血腦屏障，損害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，病變特點(diǎn)在腦基底核、海馬、視丘下核和齒狀核等被感染成亮黃或深黃色。鏡下觀察上述部位的神經(jīng)細(xì)胞核小膠質(zhì)細(xì)胞不同程度變性，大量神經(jīng)元丟失和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生替代。孫葉強(qiáng)等[19]的CP 建模方法是：給2 組實(shí)驗(yàn)組仔兔分別腹腔注射膽紅素100 mg/kg、300 mg/kg，正常組及給藥后的實(shí)驗(yàn)組由母兔自然哺育45d。通過神經(jīng)學(xué)檢查和病理性檢查，發(fā)現(xiàn)其中部分仔兔有明顯運(yùn)動(dòng)姿勢異常，其病理改變也同人類相似，提示腹腔注射膽紅素300 mg/kg 能造成仔兔腦損傷并致CP。

2.4 宮內(nèi)缺氧缺血法

宮內(nèi)缺氧缺血法是近幾年研究的較多的方法之一，模型動(dòng)物多選用健康新西蘭白兔，Drobyshevsky等[20]的方法是選用妊娠22d 的新西蘭白兔，使用芬太尼（75μg/kg·h-1）和氟哌利多（3.75mg/kg·h-1）靜脈復(fù)合麻醉，隨后用0.75%布比卡因腰麻，沿著左側(cè)腹股溝中點(diǎn)切開皮膚，分離股動(dòng)脈和其他軟組織后，在股動(dòng)脈上做一縱行切口，由此插入一球囊導(dǎo)管，進(jìn)入下行的主動(dòng)脈至上段子宮動(dòng)脈。期間用直腸溫度探頭監(jiān)測體溫。氣囊充氣40min，導(dǎo)致子宮缺血和隨后的宮內(nèi)胎兔全腦缺氧缺血。待缺氧缺血期結(jié)束時(shí)，將氣囊放氣，造成子宮灌注和胎兒腦組織再灌注的復(fù)氧期，最后取出導(dǎo)管，修復(fù)股動(dòng)脈，使其恢復(fù)。

國內(nèi)的做法也大同小異，王能里等[21-22]則是在氣囊內(nèi)注入生理鹽水，且發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈供血阻斷的時(shí)間越長，隨之造成的腦損傷程度也不同。根據(jù)雌兔孕期長短的不同，子宮動(dòng)脈血流阻斷時(shí)間也要相應(yīng)改變。孕26d 的雌兔子宮供血阻斷的時(shí)間可以長達(dá)35～37min，而孕29d 的雌兔最佳的阻斷動(dòng)脈供血的時(shí)間應(yīng)該為25～28min，當(dāng)時(shí)間延長到40～50min，死胎率可以達(dá)到100%，合理的時(shí)間能控制死胎率同時(shí)造成理想的腦白質(zhì)損傷和神經(jīng)行為學(xué)的異常。

2.5 腹腔注射合并缺氧缺血法

Alexandre Savard 等[23]的模型制備方法是待孕鼠自然生產(chǎn)后，于第12 天給予乳鼠腹腔注射脂多糖（按200 μg/kg 稀釋于50μL 生理鹽水中），乳鼠恢復(fù)4h 后異氟醚麻醉進(jìn)行右側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)，使用加熱墊使溫度保持在37℃，回籠休息30min 后將幼鼠置于8%O2的缺氧空間內(nèi)1.5h，溫度保持為37℃。研究發(fā)現(xiàn)將腹腔注射脂多糖與缺氧缺血相結(jié)合時(shí)，能造成更嚴(yán)重的腦損傷，并且當(dāng)缺氧時(shí)間超過3h 后，乳鼠死亡率達(dá)到最高值[24]。

2.6 其他CP 模型

除以上幾種動(dòng)物模型外，還有采用電損毀錐體束建立一側(cè)肢體痙攣性CP 的模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康SD 大鼠，大鼠腹腔麻醉后固定在大鼠腦定位儀上，電極陽極針連接定位儀備用，大鼠頭頂備皮，同時(shí)鼠尾部插入電極陰極針，在頭頂后正中行一約3cm 的切口，逐層切開，暴露前囟和矢狀縫，根據(jù)大鼠腦癱立體定位圖定位，用骨鉆穿透顱骨，再垂直刺入電極針進(jìn)行電刺激，隨后拔針止血，用骨蠟封住鉆孔，最后縫合傷口[25]。由于動(dòng)物模型癥狀不典型或癥狀持續(xù)時(shí)間較短，李亮等[26]采用顱內(nèi)注射無水乙醇的方法制作痙攣性CP 模型。這種方法在定位后，使用微量注射器在顱內(nèi)注射無水乙醇造成模型動(dòng)物錐體束壞死，研究中發(fā)現(xiàn)注射劑量為15μL 時(shí)效果較好，能較好地模擬痙攣性CP 的生理病理改變。

3 模型評估方法

現(xiàn)有的模型評估方法主要有動(dòng)物一般情況評估法、行為學(xué)評估法及病理檢測法等。

3.1 一般情況觀察

模型動(dòng)物一般情況觀察主要包括間斷體重測量、幼鼠出生時(shí)及后期皮膚顏色、每日活動(dòng)量等，可以反映模型動(dòng)物出生及后期的生長情況。

3.2 行為學(xué)評估法

動(dòng)物行為學(xué)是判斷造模成功與否的重要觀察指標(biāo)，從檢測目的來看，基本可分為感覺運(yùn)動(dòng)類和學(xué)習(xí)記憶類。感覺運(yùn)動(dòng)類即觀察動(dòng)物運(yùn)動(dòng)發(fā)育情況，常用方法有平衡木、足印試驗(yàn)、翻身實(shí)驗(yàn)、懸吊實(shí)驗(yàn)、斜坡實(shí)驗(yàn)、旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)、圓筒試驗(yàn)、曠場試驗(yàn)等；學(xué)習(xí)記憶類主要包括水迷宮試驗(yàn)、穿梭試驗(yàn)等[27-29]。其中運(yùn)用最多的主要是曠場試驗(yàn)和水迷宮試驗(yàn)，前者用來評估全腦結(jié)構(gòu)的完整性，后者用來評估海馬的空間學(xué)習(xí)和記憶能力[30]。

3.3 病理切片鑒定法

病理切片是判斷造模成功與否最確切的證據(jù)。首先對造模成功的模型動(dòng)物使用4%多聚甲醛灌注固定，斷頭剝?nèi)∧X組織，放入4%多聚甲醛溶液內(nèi)固定，換蔗糖溶液至腦組織沉入瓶底，截取所需腦組織制成5μm 厚石蠟切片行HE 染色，分析切片。常可見到的異常是白質(zhì)與灰質(zhì)、海馬區(qū)界限不清，海馬區(qū)無規(guī)整緊實(shí)排列的單層神經(jīng)元細(xì)胞層，神經(jīng)元數(shù)量少，發(fā)育不成熟等[31]。

4 小結(jié)

研究急性和亞急性的生理和代謝機(jī)制的CP 模型多選用胎羊和新生豬等動(dòng)物，而嚙齒類動(dòng)物和靈長類動(dòng)物多被運(yùn)用于觀察長期的神經(jīng)病理學(xué)及行為學(xué)的CP 建模。宮內(nèi)缺氧缺血法的優(yōu)點(diǎn)在于不僅能逼真的模擬新生兒在子宮內(nèi)獲得的全腦缺氧缺血性病理損傷，并且能誘發(fā)胎兔在神經(jīng)行為學(xué)上的病理性異常改變，但其不足同子宮頸注射脂多糖的方法一樣，實(shí)驗(yàn)過程復(fù)雜，加大了實(shí)驗(yàn)的難度和不確定性；腹腔注射脂多糖造成宮內(nèi)感染的方法簡便易行，同樣能模擬胎兒在母體子宮內(nèi)獲得的感染，但我們在實(shí)踐過程中發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)感染的模型制備方法可重復(fù)性較低，難以制作出符合條件的腦癱模型，而其他的模型制作方法尚不成熟。綜上所述，最為經(jīng)典的是單側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎的方法，該法自發(fā)表以來已被國內(nèi)外學(xué)者廣泛采用，已經(jīng)趨向成熟穩(wěn)定，且實(shí)驗(yàn)簡便易行，可重復(fù)性好，是目前缺氧缺血性腦病模型優(yōu)先選擇的方法之一。在模型評估方面，無論用動(dòng)物行為學(xué)還是病理切片方法，一般情況觀察的均不可少，動(dòng)物行為學(xué)評估法還要根據(jù)實(shí)際需要選擇合適的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法。

[1] 李曉捷，唐久來，馬丙祥，等. 腦性癱瘓的定義、診斷標(biāo)準(zhǔn)及臨床分型[J]. 實(shí)用兒科臨床雜志，2014，29（19）：1520.

[2] Ouskoi M，Coutinho F，Dykeman J，et al. An update on the prevalence of cerebral palsy：a systematic review and metaanalysis[J]. Dev Med Child Neurol，2013，55（6）：509-519.

[3] 劉冬. 警惕小兒腦癱的發(fā)病率及預(yù)防 [J]. 中外醫(yī)療，2011，30（32）：71.

[4] 毛鳳霞. GPR17 調(diào)控腦白質(zhì)損傷后內(nèi)在修復(fù)潛能的研究進(jìn)展[J]. 臨床兒科雜志，2012，30（3）：287-290.

[5] Back SA，Riddle A，Dean J，et al. The instrumented fetal sheep as a model of cerebral white matter injury in the premature infant[J]. Neurotherapeutics，2012，9（2）：359-370.

[6] 李仰康. 新生豬缺氧缺血性腦損傷動(dòng)物模型磁共振ADC值、H-MRS 和組織病理學(xué)的對照研究[D]. 汕頭：汕頭大學(xué)，2005.

[7] Spiegler M，Villapol S，Biran V，et al. Bilateral changes after neonatal ischemia in the P7 rat brain[J]. J Neuropathol Exp Neurol. ，2007，66（6）：481-490.

[8] 尤登攀，王冬，王興宏，等. 小兒腦性癱瘓的病因?qū)W研究進(jìn)展[J]. 中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（19）：116.

[9] Aydin A1，Gen K，Akhisaroglu M，et al. Erythropoietin exerts neuroprotective effect in neonatal rat model of hypoxicischemic brain injury [J]. Brain Development，2003，25（7）：494-498.

[10] 李江. 新生乳鼠腦缺血缺氧模型制作及評價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 烏魯木齊：新疆醫(yī)科大學(xué)，2008.

[11] 連俊蘭，余琴，王艷. 幼年大鼠缺氧缺血性腦病動(dòng)物模型的研究[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16（27）：3947-3948，3950.

[12] 秦明，朱虹，魏云艷，等. 腦癱模型的制作與鑒定[J]. 中國婦幼保健，2014，29（26）：49.

[13] 郭琛，薛辛東. 感染/炎癥與早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷[J]. 中國新生兒科雜志，2014（2）：136-139.

[14] McElrath TF，Hecht JL，Dammann O，et al. Pregnancy disorders that lead to delivery before the 28th week of gestation：an epidemiologic approach to classification [J]. Am J Epidemiol，2008，168（9）：980-989.

[15] 李曉捷，高晶，孫忠人，等. 宮內(nèi)感染致早產(chǎn)鼠腦癱動(dòng)物模型制備及其鑒定的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2004，19（12）：885-889.

[16] 邱洪斌，王景濤，王柏欣，等. 宮內(nèi)感染致腦發(fā)育損害的動(dòng)物模型研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2008，31（2）：46-47.

[17] 高峰，楊小朋，陳剛，等. 應(yīng)用孕鼠腹腔注射脂多糖合并缺氧方法制作腦癱動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（7）：489-491.

[18] Hu Y，Chen G，Wan H，et al. A rat pup model of cerebral palsy induced by prenatal inflammation and hypoxia[J].Neural Regen Res，2013，8（9）：817-824.

[19] 孫葉強(qiáng)，李曉捷. 膽紅素致新生兔腦癱動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國康復(fù)，1999，14（2）：65-67.

[20] Drobyshevsky A，Takada SH，Luo K，et al. Elevated spinal monoamine neurotransmitters after antenatal hypoxia-ischemia in rabbit cerebral palsy model [J]. J Neurochem.2015，132（4）：394-402.

[21] 王能里，南燕，柳艷麗，等. 近足月胎兔持續(xù)宮內(nèi)缺氧缺血性腦損傷模型的建立[J]. 中國病理生理志，2012，28（4）：760-764，768.

[22] 南燕，唐震海，王能里等. 未成熟胎兔缺氧缺血性腦損傷模型的建立[J]. 臨床兒科雜志，2014，（6）：564-569.

[23] Savard A，Brochu ME，Chevin M，et al. Neuronal self-injury mediated by IL-1 and MMP-9 in a cerebral palsy model of severe neonatal encephalopathy induced by immune activation plus hypoxia-ischemia [J]. J of Neuroinflammation，2015，12（1）：111.

[24] Savard A，Lavoie K，Brochu ME，et al. Involvement of neuronal IL-1β in acquired brain lesions in a rat model of neonatal encephalopathy[J]. J Neuroinflammation，2013，10（1）：110.

[25] 曹冉. 電毀損法與無水乙醇破壞錐體束法分別制作SD大鼠痙攣性腦癱模型及其病理改變的的實(shí)驗(yàn)研究[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2013.

[26] 李亮. 建立SD 大鼠痙攣型腦癱模型的研究[D]. 石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2012.

[27] Zhang Y，Lan R，Wang J，et al. Acupuncture reduced apoptosis and up-regulated BDNF and GDNF expression in hippocampus following hypoxia-ischemia in neonatal rats[J]. J Ethnopharmacol，2015，172：124-132.

[28] Xie C，Zhou K，Wang X，et al. Therapeutic benefits of delayed lithium administration in the neonatal rat after cerebral hypoxia-Ischemia[J]. PLoS One，2014，9（9）：e107192.

[29] Mucci Dde B，F(xiàn)ernandes FS，Souza Ados S，et al. Flaxseed mitigates brain mass loss，improving motor hyperactivity and spatial memory，in a rodent model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy[J]. Prostaglandins Leukot Essential Fatty Acids，2015，97：13-19.

[30] Wilson MD. Animal models of cerebral palsy：hypoxic brain injury in the newborn[J]. Iran J Child Neurol，2015，9（2）：9-16.

[31] 賀媛媛. 宮內(nèi)感染序貫缺氧缺血性腦性癱瘓鼠模型構(gòu)建與評估[D]. 合肥：安徽醫(yī)科大學(xué)，2012.