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    刺五加對(duì)衰老大鼠海馬神經(jīng)元的恢復(fù)

    2015-12-09 03:49:04遼寧省基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所110101馬越嬌徐國峰劉永林周酈楠
    遼寧醫(yī)學(xué)雜志 2015年4期
    關(guān)鍵詞:光鏡刺五加半乳糖

    遼寧省基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所(110101)李 屹 馬越嬌 徐國峰 劉永林 張 曄 周酈楠

    衰老是生命過程中正常的生理現(xiàn)象,大量實(shí)驗(yàn)表明,自由基及其引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是引起生物衰老的主要原因。是機(jī)體各器官功能普遍的、逐漸降低的過程。表現(xiàn)為精神不振、健忘、形寒肢冷、納差少眠、腰膝無力、氣短乏力,甚則面浮腫等。海馬與空間學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān),還對(duì)記憶各種新知識(shí)起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。本文探討刺五加對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠海馬神經(jīng)元損傷保護(hù)的形態(tài)學(xué)改變。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物 8周齡(180~200g體重)SD大鼠。由沈陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證為遼寧省科學(xué)技術(shù)廳簽發(fā),許可證號(hào):SCXK(遼)2003-0016。動(dòng)物飼料為繁殖鼠全價(jià)顆粒飼料。

    1.2 藥品及儀器 D-半乳糖(D-gal)(Sigma公司),購于上海博蘊(yùn)生物科技有限公司。刺五加由西安賽奧生物技術(shù)有限公司提供。LKB-V型超薄切片機(jī)(德國Leica公司),奧林帕斯雙目顯微鏡CX21。

    1.3 方法 SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,然后將大鼠稱重、編號(hào),隨機(jī)分成5組,每組12只,雌雄各半,腹腔注射D-半乳糖(生理鹽水)200g/(kg·d),連續(xù)給藥8周,自造模第1天開始灌胃給藥,每日按照10mL/kg灌胃。1)衰老模型組:腹腔注射D-半乳糖,生理鹽水灌胃。2)刺五加高濃度組:腹腔注射D-半乳糖,刺五加15g/(kg·d)灌胃。3)刺五加中濃度組:腹腔注射D-半乳糖,刺五加10g/(kg·d)灌胃。4)刺五加低濃度組:腹腔注射D-半乳糖,刺五加5g/(kg·d)灌胃。5)空白對(duì)照組:腹腔注射生理鹽水,生理鹽水灌胃。各組連續(xù)給藥8周,所有大鼠均飼以常規(guī)動(dòng)物飼料和水。末次給藥4小時(shí)后處死動(dòng)物。

    1.4 取材 各組大鼠經(jīng)1%肝素鈉生理鹽水、含4%多聚甲醛的0.1M磷酸鹽緩液(PBS,pH=7.4)固定液內(nèi)固定灌注,取出大鼠腦組織分離海馬并置于固定液中后固定24小時(shí)。

    1.5 光鏡標(biāo)本制備 多聚甲醛戊二醛固定的海馬組織經(jīng)水洗后進(jìn)行系列乙醇脫水,二甲苯透明后石蠟定向包埋,行5μm厚切片,HE染色,光鏡下觀察。

    2 結(jié)果

    光鏡下海馬結(jié)構(gòu)由分子層、錐體細(xì)胞層和顆粒層組成,正常組海馬結(jié)構(gòu)清晰,神經(jīng)元排列整齊。衰老模型組海馬神經(jīng)元密度下降,神經(jīng)元在老化過程中出現(xiàn)一系列“空泡變性”的形態(tài)學(xué)變化,神經(jīng)元排列松散、紊亂、數(shù)目減少,并且與周圍神經(jīng)元的聯(lián)絡(luò)減少。神經(jīng)元胞體腫脹、水腫,呈海綿狀變性改變。刺五加高、中、低濃度組海馬神經(jīng)元形態(tài)較模型組有所恢復(fù),神經(jīng)元整齊,數(shù)量增多,但各組部分海馬神經(jīng)元細(xì)胞核固縮或腫脹,細(xì)胞輪廓不清,空泡現(xiàn)象仍存在,顆粒細(xì)胞少,高濃度組較中、低濃度組在神經(jīng)元數(shù)量、排列有明顯改善[1-3]。說明刺五加對(duì)衰老大鼠海馬神經(jīng)元損傷有保護(hù)作用,其保護(hù)作用與刺五加含量呈正相關(guān)。

    3 討論

    D-半乳糖亞急性中毒狀態(tài)下,體內(nèi)產(chǎn)生大量超氧陰離子自由基,自由基可以奪取一個(gè)電子而使其他物質(zhì)氧化,不僅可以直接損傷細(xì)胞引起衰老,還可以通過引起微循環(huán)障礙和缺血改變從而進(jìn)一步加重衰老進(jìn)程。這種生化和組織結(jié)構(gòu)的改變與自然衰老表現(xiàn)基本吻合,而且大鼠操作性條件反射的建立、鞏固和再現(xiàn)以及這一反射的分化受到明顯損害,損害程度與半乳糖用量存在著明顯的量效關(guān)系。

    中醫(yī)藥在改善海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)衰老變化有明顯的干預(yù)治療作用,可使神經(jīng)元數(shù)量增多,維持細(xì)胞及其細(xì)胞器形態(tài)的完整和規(guī)則。其機(jī)制可能與清除機(jī)體自由基,抑制凋亡相關(guān)蛋白的陽性細(xì)胞數(shù),從而阻斷凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生,抑制神經(jīng)元凋亡,以達(dá)到保護(hù)神經(jīng)元的作用[4-6]。刺五加根皮含揮發(fā)油、鞣質(zhì)、棕桐酸、亞麻仁油酸、維生素A、維生素B1。刺五加歸脾、肺、心、腎經(jīng),能補(bǔ)脾氣、益肺氣,且祛痰平喘,故可用治脾肺氣虛證;刺五加自古即被視為具有添精補(bǔ)髓及抗衰老作用的良藥[4,7]。其含有的刺五加甙,能刺激精神和身體活力、具有抗疲勞作用,增強(qiáng)持久力和能力,增加機(jī)敏和學(xué)習(xí)能力。刺五加中還含有多種化學(xué)成分[8],如苷類、黃酮類、多糖等,對(duì)中樞神經(jīng)的興奮和抑制過程均有影響,其不僅改善興奮過程,而且也加強(qiáng)抑制過程,使抑制趨于集中,使分化更完全,增加大腦皮層的內(nèi)抑制過程。它的興奮作用原理不同于苯丙胺類的化合物,不僅毒性低,而且不擾亂正常的睡眠,說明刺五加對(duì)衰老海馬神經(jīng)元具有保護(hù)作用,其作用與用藥時(shí)神經(jīng)系統(tǒng)的功能狀態(tài)和劑量大小頗有關(guān)系。

    [1]朱立志,李郭錦.大鼠缺血性急性腎損傷對(duì)海馬CA1區(qū)的形態(tài)學(xué)影響[J].天津醫(yī)學(xué),2014,42(2):164

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