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    福建不同產(chǎn)地三葉青葉中總黃酮含量比較

    2015-12-08 05:38:28范世明于虹敏黃學(xué)城黃澤豪
    福建中醫(yī)藥 2015年3期
    關(guān)鍵詞:青葉產(chǎn)地中醫(yī)藥大學(xué)

    范世明,陳 琳,林 婧,于虹敏,黃學(xué)城,許 文,3,陳 丹,黃澤豪

    (1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,福建 福州 350122;2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院,福建 福州 350122;3.福建中醫(yī)藥大學(xué)生物醫(yī)藥研發(fā)中心,福建 福州350122)

    三葉青是我國(guó)特有的珍稀藥用植物,又名三葉崖爬藤(Tetrastigmahemsleyanum Dielset Gilg),為葡萄科崖爬藤屬植物,主要分布于我國(guó)南方的浙江、江西、福建、廣東、廣西、云南、海南、臺(tái)灣等省區(qū),其塊根在民間被廣泛藥用。據(jù)《全國(guó)中草藥匯編》中記載:“三葉青,味苦性平。具有清熱解毒,祛風(fēng)化痰,活血止痛的功效?!保?]據(jù)報(bào)道[2]三葉青中的化學(xué)成分有黃酮、還原糖、甾類化合物、氨基酸等,其中黃酮是重要的生理活性物質(zhì)?,F(xiàn)代藥理研究表明三葉青總黃酮部位具有抗腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡等作用[3-5]。文獻(xiàn)[6]表明,三葉青的葉(或全株)在民間也供藥用,如《海南植物志》中記載三葉青全株可用于白喉、風(fēng)濕性腰痛等?!吨袊?guó)植物志》[7]中也記載全株供藥用?!杜_(tái)灣藥用植物圖鑒》中記載其鮮葉搗碎可以治皮膚?。?]。目前不同產(chǎn)地的三葉青塊根總黃酮含量測(cè)定方法已有報(bào)道[9-10],但未見三葉青葉的質(zhì)量評(píng)價(jià)報(bào)道,三葉青地上部分化學(xué)成分定性鑒別的結(jié)果表明,黃酮是其主要成分之一[11]。因福建的順昌、泰寧、福安等地已開始大量種植三葉青,有必要建立測(cè)定三葉青葉中總黃酮含量的方法,為三葉青葉的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器 UV 9100紫外可見分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司);SartoriusCPA225 D十萬(wàn)分之一電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司);KQ-500 E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);

    1.2 試藥 三葉青葉2013年8月~12月實(shí)地采自福建順昌、泰寧、福安等地,采下葉片(帶葉柄),晾干;部分購(gòu)自浙江臺(tái)州、麗水等地,經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室盧偉教授鑒定為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤Tetrastigmahemsleyanum Dielset Gilg.的干燥葉。蘆丁對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):110774-201113);甲醇(德國(guó) Merck公司,色譜純);水為超純水(美國(guó)m illipore公司);其它試劑為分析級(jí)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品,用甲醇制成每1m L含蘆丁0.402m g的對(duì)照品溶液,即得。

    2.2 供試品溶液制備 取三葉青葉供試品,粉碎過40目篩,取粉末1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加甲醇50m L,精密稱定,超聲(250 W,40k H z)處理30min,放冷,精密稱定后用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,0.45μm濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.3 總黃酮的顯色方法及測(cè)定波長(zhǎng) 參考文獻(xiàn)[9]測(cè)定方法,精密吸取供試品、對(duì)照品溶液各4m L分別置25m L量瓶中,分別加甲醇至10m L,按下述顯色方法顯色:加入15%新鮮配制的亞硝酸鈉溶液1 m L,10%硝酸鋁溶液1m L,搖勻后放置6min,加入10%新鮮配制氫氧化鈉溶液10m L,用甲醇定容,搖勻后放置15min,即得對(duì)照品顯色溶液及供試品顯色溶液。上述2種顯色溶液分別以同樣處理的空白顯色體系為參比,在410~800n m波長(zhǎng)處掃描,對(duì)照品與樣品紫外吸收基本一致,最大吸收波長(zhǎng)在500 n m,故選擇500n m為比色測(cè)定波長(zhǎng)。

    2.4 方法學(xué)考察

    2.4.1 線性范圍 精密吸取對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、9m L到25m L量瓶中,加甲醇至10m L,制備得不同梯度濃度的對(duì)照品溶液,按2.3項(xiàng)顯色,各對(duì)照品顯色體系,以同樣處理的空白顯色體系為參比,在500n m波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度A對(duì)濃度C進(jìn)行回歸計(jì)算,得線性回歸方程:

    A =0.0057 C+0.0410 r=0.9994

    線性范圍為16.08~144.72μg/m L。

    2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密移取對(duì)照品溶液和供試品溶液各4m L,分別置于25m L量瓶中,按2.3項(xiàng)分別顯色,在紫外分光光度計(jì)上連續(xù)測(cè)定6次,結(jié)果對(duì)照品和供試品顯色產(chǎn)物吸光度的RSD為0.21%、0.27%。

    2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同批三葉青的葉樣品1g,6份,按2.2項(xiàng)制成供試品溶液,精密吸取4 m L,按2.3項(xiàng)顯色,測(cè)定吸光度并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算,得該批次三葉青中總黃酮平均含量2.69%,RSD 2.09%。

    2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密移取對(duì)照品溶液和供試品溶液各4m L,分別置于25m L量瓶中,按2.3項(xiàng)顯色處理后,在120min內(nèi)每隔15min測(cè)定吸光度。結(jié)果表明,對(duì)照品和樣品顯色產(chǎn)物在室溫下120min內(nèi)穩(wěn)定。

    2.4.5 回收率試驗(yàn) 取重復(fù)性試驗(yàn)同批次三葉青的葉樣品0.5g,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,加入近似樣品總黃酮含有量的對(duì)照品量(蘆丁13.5 m g),按2.2項(xiàng)制成供試品溶液,精密吸取4m L,按2.3項(xiàng)顯色,測(cè)定吸光度并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算,平行測(cè)定6份,結(jié)果見表1。

    表1 加樣回收試驗(yàn)

    2.5 樣品含量測(cè)定 精密稱取不同產(chǎn)地三葉青的葉樣品各1g,每批測(cè)定3份,按2.2項(xiàng)制成供試品溶液,精密吸取4m L,按2.3項(xiàng)顯色,以相應(yīng)的空白顯色體系試劑為參比,測(cè)定吸光度。同時(shí)測(cè)定各個(gè)批次三葉青葉含水量,按干燥品,計(jì)算得不同產(chǎn)地三葉青葉中總黃酮含量,結(jié)果見表2。

    表2 福建不同產(chǎn)地三葉青葉總黃酮的含量測(cè)定

    3 討 論

    3.1 采用紫外可見分光光度法測(cè)定閩產(chǎn)三葉青的葉中總黃酮含量,該方法經(jīng)過方法學(xué)考察符合分析要求,方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,適合于三葉青葉的定量分析和品質(zhì)評(píng)價(jià),為三葉青葉的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    3.2 福建不同產(chǎn)地三葉青葉總黃酮含量測(cè)定比較表明不同產(chǎn)地其總黃酮含量差異較大,其中以永泰、大田、閩侯、仙游、漳平的含量較高,達(dá)到3%以上,相對(duì)高于浙江三葉青主產(chǎn)地,提示閩產(chǎn)三葉青中這些產(chǎn)地品質(zhì)較好,適合開發(fā)利用。

    [1]《全國(guó)中草藥匯編》編寫組 .全國(guó)中草藥匯編:上冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1975:31-32.

    [2]陳麗蕓,郭素華 .三葉青的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,36(12):1368-1370.

    [3]丁麗,紀(jì)其雄 .三葉青抗腫瘤活性部位的篩選研究[J].海峽藥學(xué),2011,23(12):46-48.

    [4]倪克鋒,金波,蔣福升,等 .三葉青黃酮對(duì) H 22荷瘤小鼠T I MP-2 mRNA表達(dá)的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2009,16(3):195-196.

    [5]張立明,樊瑞軍,楊鳳琴 .三葉青黃酮誘導(dǎo)S MMC-7721肝癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(11):2850-2851.

    [6]廣東省植物研究所 .海南植物志[M].北京:科學(xué)出版社,1974,3-23.

    [7]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì) .中國(guó)植物志:2冊(cè)[M].北京:科學(xué)出版社,1998:48,122-123.

    [8]張憲昌 .臺(tái)灣藥用植物圖鑒[M].臺(tái)中:晨星出版有限公司,2007:201.

    [9]范世明,林婧,許文,等 .不同產(chǎn)地三葉青中總黃酮含量的比較[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,23(3):44-45.

    [10]鄭軍獻(xiàn),胡軼娟,梁衛(wèi)青,等 .紫外可見分光光度法測(cè)定三葉青中總黃酮的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2009,16(5):386-387.

    [11]蔡韋煒,陳丹,范世明,等 .三葉青地上部分化學(xué)成分分析[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,23(5):34-35.

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