不同基質(zhì)的氟他胺凝膠劑中氟他胺體外透皮特性比較＊

陳 璐，曾明輝

1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院（成都 610072）；2.邛崍市醫(yī)療中心醫(yī)院（邛崍 610038）

氟他胺（flutamide）是一種口服非甾體抗雄性激素，資料［1－5］表明，氟他胺具有抗雄性激素與抗腫瘤的作用，在治療與雄性激素相關(guān)的前列腺癌、前列腺增生和卵巢癌等疾病有良好前景。經(jīng)皮給藥途徑具有避免肝臟首關(guān)效應(yīng)、藥物在胃腸道降解與吸收不受胃腸道因素影響以及無(wú)胃腸道不良反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。但經(jīng)皮給藥時(shí)要求藥物有一定透皮速率，該劑型僅適用于少數(shù)劑量小和適宜溶解特性的小分子藥物［6－8］。本文通過(guò)氟他胺透皮吸收劑的不同凝膠基質(zhì)下氟他胺的累計(jì)釋放量，比較不同透皮促進(jìn)劑的釋藥速率，以?xún)?yōu)選其最佳處方組成。

1 材料與方法

1.1 材料

Waters2690型高效液相分析儀（美國(guó) Waters公司），Waters996型紫外檢測(cè)器（美國(guó) Waters公司），Sartorius電子天平（德國(guó)），數(shù)字式黏度計(jì)（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），PHSJ－4A酸度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司），DK－98－Ⅱ型電子恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司），透皮擴(kuò)散儀（上海楷凱科技貿(mào)易有限公司）。

氟他胺原料藥（江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，批號(hào)20110808，純度98.6%），氟他胺對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），卡波姆940（北京奧利化學(xué)試劑有限公司），羥丙基甲基纖維素（HPMC，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠(chǎng)），海藻酸鈉（化學(xué)純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），氮酮（北京化學(xué)試劑公司），薄荷醇（北京化學(xué)試劑公司），三乙醇胺（廣東汕頭市西隴化工廠(chǎng)），甘油（浙江遂昌惠康藥業(yè)有限公司），醫(yī)用酒精（北京市志偉達(dá)工貿(mào)有限公司），丙二醇（色譜純），甲醇（色譜純），其他試劑均為分析純。

Wistar大鼠，雄性（180～200g），購(gòu)自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（川 ）2013－110，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證NO：0017566。

1.2 HPLC法測(cè)定透皮接收液中的氟他胺含量

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇∶水（65∶35）；檢測(cè)波長(zhǎng)：227nm；流速：1mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：20μL［9－10］。

1.2.2 測(cè)定方法 取氟他胺對(duì)照品甲醇溶液和空白透皮接收液，在上述色譜條件下測(cè)定。結(jié)果表明，氟他胺的保留時(shí)間為23.1min，樣品液的主峰保留時(shí)間與氟他胺對(duì)照品溶液一致，且空白液對(duì)藥物的測(cè)定無(wú)干擾（圖1）。

1.2.3 氟他胺標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 精密稱(chēng)取氟他胺對(duì)照品，配成質(zhì)量濃度為350μg/mL的甲醇溶液，用甲醇稀釋為質(zhì)量濃度3.5、7、14、21、42、84μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，按1.2.1項(xiàng)色譜條件取20μL進(jìn)樣，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程：Y＝102.3C－13.45（r＝0.999 6，n＝5）。

1.2.4 精密度與方法回收率 配制低、中、高（4、30、75μg/mL）3個(gè)質(zhì)量濃度氟他胺甲醇溶液，取20μL進(jìn)樣，以測(cè)得質(zhì)量濃度和理論質(zhì)量濃度比較，計(jì)算方法回收率。低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度氟他胺溶液的平均回收率為（97.22±1.53）%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.34%，方法回收率較好。低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度日內(nèi)精密度的RSD值分別為2.89%、1.52%、1.83%（n＝6），日間精密度的 RSD值分別為2.09%、1.86%、1.49%（n＝6），該方法的精密度較好。

1.2.5 樣品透皮接收液前處理方法 精密吸取透皮接收液0.5mL，加甲醇1.0mL，渦旋1min，于14 000r/min離心5min，吸取200μL上清液于進(jìn)樣瓶中，20μL進(jìn)樣測(cè)定。

圖1 氟他胺空白對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)品與透皮接收液HPLC色譜圖

1.3 凝膠基質(zhì)的選擇

1.3.1 凝膠基質(zhì)的制備 參考文獻(xiàn)［11－12］，稱(chēng)取適量卡波姆940，加入甘油32g潤(rùn)濕研磨，用適量水溶脹24h作為凝膠基質(zhì)，備用。稱(chēng)取適量HPMC，加水溶解后，冷藏靜置至完全溶脹；在攪拌下加入適量注射用水，直至完全溶解形成均一溶液備用。稱(chēng)取適量海藻酸鈉加入到一定體積水中，溶解、超聲脫氣和靜置過(guò)夜，備用。

1.3.2 氟他胺凝膠基質(zhì)的制備 精密稱(chēng)取適量氟他胺，用適量水溶解后分別加入以上3種凝膠基質(zhì)中，緩慢加入乙醇溶液，攪拌均勻，用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH至7～8，加水至100g，研磨均勻，即得乳白色、均勻、細(xì)膩和半透明狀的氟他胺凝膠。

1.3.3 鼠皮的制備 取雄性 Wistar大鼠，脫頸椎處死后用電動(dòng)剔毛器將其腹部脫毛，剪下腹部皮膚，小心剝離脂肪層、筋膜，備用。

1.3.4 體外透皮試驗(yàn) 采用改良法Franz擴(kuò)散池裝置（有效擴(kuò)散面積為3.8cm2），將上述氟他胺凝膠基質(zhì)分別緊密貼于處理好的鼠皮角質(zhì)層，排除氣泡，固定于滲透擴(kuò)散裝置的擴(kuò)散室和接收室之間，背襯層向上。接收室加滿(mǎn)生理鹽水作為擴(kuò)散介質(zhì)，使液面恰與鼠皮接觸。水浴加熱，溫度控制在（37±0.2）℃，開(kāi)動(dòng)磁力攪拌器，攪拌轉(zhuǎn)速設(shè)定為400r/min，分別在1、2、4、6、8h將接收室中的接收液全部倒出，同時(shí)補(bǔ)加同樣體積的新鮮接收液。取接收液按1.2項(xiàng)方法測(cè)定總氟他胺含量，計(jì)算累積釋放量 Q［13－14］。

Q：時(shí)間t的累積釋放量；Cn：時(shí)間t的濃度值；v0：每次取樣體積；CPS：時(shí)間t以前的濃度測(cè)量值。

1.4 透皮促進(jìn)劑的制備

分別以氮酮、丙二醇和薄荷醇為透皮促進(jìn)劑，加入對(duì)氟他胺具有良好滲透性的凝膠基質(zhì)制備氟他胺透皮吸收劑。

2 結(jié)果

2.1 氟他胺凝膠基質(zhì)

2.1.1 氟他胺凝膠基質(zhì)的處方優(yōu)化 依據(jù)文獻(xiàn)研究結(jié)果［1，15－16］，分別考察卡波姆940、HPMC 和海藻酸鈉的用量。以氟他胺累積透過(guò)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，評(píng)價(jià)3種不同濃度的凝膠基質(zhì)對(duì)氟他胺透皮特性的影響。結(jié)果表明：比較3種不同基質(zhì)，確定氟他胺經(jīng)離體鼠皮的累積釋放量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，卡波姆940凝膠基質(zhì)較優(yōu)越，其中以1.5%卡波姆940凝膠基質(zhì)為最佳。故凝膠基質(zhì)優(yōu)化處方確定為1.5%卡波姆940加甘油所成基質(zhì)（表1、表2）。

表1 氟他胺透皮吸收劑凝膠基質(zhì)的處方優(yōu)化因素與水平表

2.1.2 驗(yàn)證試驗(yàn) 按優(yōu)選處方的比例進(jìn)行3批樣品的驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果表明，所確定的優(yōu)選處方配比適宜，重復(fù)性較好，表明該基質(zhì)處方合理，穩(wěn)定可行（表3）。

表2 3種凝膠基質(zhì)的氟他胺經(jīng)離體鼠皮的累積釋放量Q/（μg/mL）（n＝3）

表3 凝膠基質(zhì)優(yōu)選工藝的驗(yàn)證試驗(yàn)

2.2 透皮促進(jìn)劑的選擇

將1.4項(xiàng)中3種不同促透劑制成的氟他胺透皮吸收劑，緊密涂布于處理好的鼠皮角質(zhì)層，按1.3.4項(xiàng)方法操作，接取接收液按1.2項(xiàng)方法測(cè)定總氟他胺含量，計(jì)算累積釋放量Q，將Q對(duì)時(shí)間t進(jìn)行回歸，得體外透皮動(dòng)力學(xué)方程及透皮速率［17－18］。

穩(wěn)態(tài)流量J＝v/A·dQ/dt；滲透系數(shù)Kp＝J/A·C0

以上公式中，A：皮膚有效面積；dQ/dt：穩(wěn)態(tài)時(shí)的斜率；J：穩(wěn)態(tài)流量，單位時(shí)間通過(guò)單位面積皮膚的藥物量；Kp：滲透系數(shù)。

體外透皮實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，以氮酮為促透劑，氟他胺透皮吸收劑的體外經(jīng)皮滲透Q與t相關(guān)性較好，二者呈線(xiàn)性關(guān)系，體外經(jīng)皮滲透均符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)過(guò)程（表4、表5和圖2）。

表4 不同促透劑基質(zhì)的氟他胺經(jīng)離體鼠皮的累積釋放量

表5 氟他胺體外透皮試驗(yàn)

圖2 氟他胺體外經(jīng)皮滲透曲線(xiàn)

3 討論

氮酮是一種新型經(jīng)皮滲透促進(jìn)劑，也是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究較多的透皮吸收促進(jìn)劑，它能使角質(zhì)中類(lèi)脂質(zhì)生產(chǎn)不規(guī)則的排列，同時(shí)可溶解皮膚的類(lèi)脂以增加藥物透皮吸收［19］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，該凝膠劑中最佳透皮吸收劑為1%氮酮。

氟他胺口服引起明顯的胃腸道刺激如惡心、嘔吐和腹瀉，與促黃體激素釋放激素劑（LHRH）聯(lián)用時(shí)更為多見(jiàn)，且氟他胺存在明顯的首過(guò)效應(yīng)。若制成透皮吸收制劑不僅可以避免消化道不良反應(yīng)，還可以控制血藥濃度，降低全身尤其肝臟的不良反應(yīng)。氟他胺其理化性質(zhì)符合透皮制劑對(duì)藥物的基本要求，經(jīng)皮給藥制劑的研究開(kāi)發(fā)必將具有廣泛的應(yīng)用前景以及深遠(yuǎn)的社會(huì)意義。

對(duì)氟他胺凝膠劑透皮特性的考察，其目的是優(yōu)化并確定氟他胺凝膠劑處方，并制備氟他胺凝膠劑，繼續(xù)考察氟他胺凝膠劑的體外釋藥過(guò)程及其穩(wěn)定性等特征。更可進(jìn)一步考察經(jīng)皮吸收后，氟他胺在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程，以及開(kāi)展氟他胺凝膠劑體內(nèi)外血藥濃度和藥效學(xué)的相關(guān)性研究。

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