不同沙棘葉中槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量比較＊

杜蕾蕾，陳 雛

1.成都中醫(yī)藥大學 民族醫(yī)藥學院（成都 611137）；2.四川省中醫(yī)藥科學院（成都 610041）

沙棘屬（Hippophae）植物為胡頽子科落葉灌木或小喬木，是一類具有重要醫(yī)藥價值的植物類群。沙棘的果實為藏族、蒙古族的習用藥材［1］。研究［2－3］表明，沙棘含有維生素類、黃酮類、甾醇類、多糖類和有機酸類等多種類型的活性成分，具有較高的營養(yǎng)和藥用價值。其中，沙棘總黃酮具有降血脂、降血糖作用，可以加強心肌收縮性、降低心肌耗氧量、減少總外周血管阻力和增加血管彈性，減輕大鼠心肌再灌注損傷區(qū)超微結構的病理改變，臨床用于治療缺血性心臟病、心絞痛和高血脂癥等，同時用于預防動脈粥樣硬化和腦血栓等疾病［4－7］。近年研究［8］發(fā)現(xiàn)，沙棘葉也含有大量黃酮類成分，其資源量更大且易于采集。本研究對不同基源的沙棘葉樣品進行了對比分析，探究沙棘屬植物葉中所含黃酮類成分的主要特點，對科學開發(fā)沙棘資源和擴大沙棘黃酮的原料來源具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

Shimadzu LC－10ATvp 高效液相色譜儀（LC－10ATvp泵、SPD－10Avp紫外檢測器、CTO－10Asvp柱溫箱、SCL－10Avp系統(tǒng)控制器、Class－vp色譜工作站）；Sartorius BP211D電子天平；KQ3200超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）。槲皮素（批號：081－9003）、山柰酚（批號：0861－200002）和異鼠李素（批號：110860－200205）對照品均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純，水為 Milli－Q超純水，其余試劑均為分析純；沙棘葉樣品收集自川西高原甘孜州、阿壩州等地，其原植物鑒定分別為柳葉沙棘Hippophae salicifolia D.Don、中 國 沙 棘Hippophae rhamnoides subsp.sinensis Rousi、云南沙棘 Hippophae rhamnoindes subsp.yunnanensis Rousi、臥龍沙棘 Hippophae rhamnoides subsp.wolongensis Lian，K.Sun et X.L.Chen、理塘沙棘Hippophae litangensis Lian et X.L.Chen ex Swenson et Bartish、棱 果 沙 棘 Hippophae goniocarpaLian et al.Swenson et Bartish、江孜沙棘 Hippophae gyantsensis（Rousi）Lian、密毛肋果沙棘 Hippophae neurocarpasubsp.stellatopilosa Lian et al.ex Swenson et Bartish、肋 果 沙 棘Hippophae neurocarpasubsp.neurocarpaS.W.Liu et T.N.He、西藏沙棘 Hippophae tibetana Schlechtend 10種不同基源的沙棘葉。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件色譜柱 Shim－pack VP－ODS（4.6mm×150mm，5μm）；流動相甲醇－0.4%磷酸（50∶50），流速1.0mL/min；柱溫30℃；檢測波長370nm；進樣量10μL。在此條件下，槲皮素、山柰酚和異鼠李素能與其他組分達到基線分離，理論塔板數(shù)按異鼠李素計算為7 300?；旌蠈φ掌贰⒐┰嚻啡芤旱纳V圖（圖1）。

圖1 混合對照品（A）和供試品溶液（B）的色譜圖

1.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取適量槲皮素、山柰酚和異鼠李素對照品于容量瓶中，甲醇溶解并定容，得對照品儲備液。分別吸取各對照品儲備液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0mL于10mL容量瓶中，甲醇定容，得對照品溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備 沙棘葉經(jīng)50℃減壓干燥，粉碎。精確稱取沙棘葉粉末0.5g，精密加入甲醇－水（8∶2）混合溶劑30mL浸泡12h，超聲提取30min，提取液放冷至室溫并過濾。精密量取續(xù)濾液10mL于100mL圓底燒瓶中，加入6mol/L鹽酸10mL，甲醇10mL，混勻后于沸水浴上加熱回流30min，迅速冷卻，移至50mL容量瓶中，甲醇定容，0.45μm微孔濾膜過濾即得。

1.2.4 線性關系考察 分別吸取“1.2.2”項下不同濃度的對照品溶液10μL進樣，測定峰面積值，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果表明，槲皮素在1.67～106.60μg/mL范圍內線性良好，回歸方程為y＝35 588x＋7 242，r＝0.999 9；山柰酚在0.51～32.64μg/mL范圍內線性良好，回歸方程為y＝43 894x＋5 399，r＝0.999 6；異鼠李素在0.78～49.92μg/mL范圍內線性良好，回歸方程為y＝39 030x＋6 154，r＝0.999 9。

1.2.5 重復性試驗 精密稱取同一沙棘葉粉末6份，分別按“1.2.3”項下方法制備供試品溶液，按“1.2.1”項下色譜條件測定槲皮素、山柰酚和異鼠李素含量。結果表明，槲皮素、山柰酚和異鼠李素含量的 RSD分別為0.69%、1.63%和1.28%。

1.2.6 回收試驗 精密稱取同一沙棘葉粉末9份，每份約0.25g，平均分為3組，每組精密加入相當于已知含量50%、100%和150%的對照品儲備液，按“1.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“1.2.1”項下色譜條件測定槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量，計算加樣回收率。結果顯示，槲皮素、山柰酚和異鼠李素的平均回收率（n＝9）分別為99.50%（RSD＝0.91%）、98.00%（RSD＝1.33%）和 100.80%（RSD＝1.55%）。

1.2.7 樣品測定 分別取不同基源的沙棘葉樣品，按“1.2.3”項下方法制備供試品溶液。將供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2 結果

按外標法計算樣品中槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量（表1）。所測定的10種不同基源的沙棘葉中槲皮素的含量為0.58～4.42mg/g；山柰酚的含量為0.12～3.32mg/g；異鼠李素的含量為0.00～2.58mg/g；而總黃酮含量為1.26～8.08mg/g，最低和最高含量相差約6.4倍。在10種不同沙棘葉中，云南沙棘和臥龍沙棘的總黃酮平均含量較高，分別為5.29mg/g和5.01mg/g。

表1 不同基源沙棘葉中槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量測定結果

3 討論

廖麗云等［9］報道了高效液相色譜法測定心達康片中槲皮素、山柰酚和異鼠李素含量的方法。但與制劑不同，沙棘果實、葉子等新鮮原料中，總黃酮是由以槲皮素、山柰酚和異鼠李素為主要苷元所形成的數(shù)十種黃酮苷類化合物所組成。在缺少化學對照品的情況下，很難對果實中數(shù)十種黃酮苷的含量進行直接測定，因此采用加酸水解的方法，可使數(shù)量眾多的黃酮苷轉化為數(shù)個主要的黃酮苷元，通過測定各苷元的含量藉以評價果實樣品中黃酮類化合物總含量的高低［10］。試驗證明，本研究所建立的分析方法能同時測定沙棘葉中3種主要黃酮苷元的含量，該方法準確、簡便、重復性好，可用于沙棘葉的質量評價。

測定結果顯示：不同基源的沙棘葉樣品中總黃酮含量為1.26～8.08mg/g，其含量差異較大，提示云南沙棘和臥龍沙棘的總黃酮含量較高，適宜作為提取沙棘葉黃酮的原料。

在測定的不同基源沙棘葉中槲皮素、山柰酚和異鼠李素的相對比例差異較大，多數(shù)樣品中槲皮素的相對含量較高，而沙棘果實中異鼠李素的含量較高［11］。研究［12］表明，相同濃度的槲皮素比異鼠李素清除2，2－二苯基－1－苦肼基自由基（2，2－diphenyl－1－picry－h(huán)ydrazyl radical，DPPH）自由基、2，2－聯(lián)氮－二（3－乙基－苯并噻唑－6－磺酸）二銨鹽（2，2＇－azinobis－（3－ethylbenzthiazoline－6－sulphonate），ABTS）自 由基能力更強。因此，筆者推測沙棘葉中總黃酮的抗氧化能力可能優(yōu)于沙棘果實。

綜上所述，沙棘葉中含有一定量的黃酮成分，且具有資源量大、易于采集的優(yōu)勢，可作為提取沙棘黃酮的原料之一。但沙棘葉中的黃酮含量受品種和生長環(huán)境等因素影響較大，今后將作進一步的研究和篩選。

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