前列腺癌組織中ALKBH3和Bcl-xl蛋白的表達(dá)*

楊德京，李沛寰，武玉東

1)鄧州市人民醫(yī)院泌尿外科 鄧州474150 2)鄭州大學(xué)學(xué)報編輯部 鄭州450001 3)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科 鄭州450052

近年來我國前列腺癌的發(fā)病率快速上升，目前已是最常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤，由于我國未常規(guī)開展前列腺癌篩查，因此就診患者腫瘤多已進(jìn)展至晚期，失去手術(shù)機(jī)會。雖然采用內(nèi)分泌治療和放療的綜合治療方案，但患者生存率并沒有顯著改善，尋找與前列腺癌進(jìn)展相關(guān)的蛋白成為前列腺癌治療的關(guān)鍵。ALKBH3 與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，但作用機(jī)制尚不明確［1-2］。Bcl-xl 是Bcl-2 家族成員之一，其作用為抑制細(xì)胞的程序性凋亡，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用［3］。該研究采用免疫組化SP 法檢測前列腺癌組織中ALKBH3 和Bcl-xl 蛋白的表達(dá)，探討ALKBH3 在前列腺癌中的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系。

1 對象與方法

1．1 研究對象 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2010年1月至2013年5月收治的前列腺癌患者的病理組織標(biāo)本143例。年齡57～83歲，中位年齡68歲。分化程度依照Gleason 評分標(biāo)準(zhǔn)判斷:高、中分化癌83例，低分化癌60例;TNM 分期:T1、T2 期71例，T3、T4 期72例?；颊咝g(shù)前均未接受化療或激素治療。收集同期住院的前列腺增生患者組織標(biāo)本125例，患者年齡65～87歲，中位年齡69歲。所有組織標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)確診。

1．2 兩種前列腺組織中ALKBH3 和Bcl-xl 蛋白的檢測 采用免疫組化SP 法。ALKBH3 和Bcl-xl 一抗及二抗(SP-9002 通用試劑盒)和DAB 顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。組織標(biāo)本4 μm 厚切片，滴加稀釋150 倍的一抗，DAB 顯色，常規(guī)脫水、透明、封片。用PBS 代替一抗作陰性對照。ALKBH3 及Bcl-xl 蛋白以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或者黃色顆粒為染色陽性細(xì)胞。于陽性細(xì)胞最密集處連續(xù)觀察5個高倍視野，計數(shù)每個視野中的陽性細(xì)胞，取均值。按陽性細(xì)胞百分比計分:0%為0 分，～20%為1 分，～50%為2 分，＞50%為3 分;按染色強(qiáng)度計分:淡黃色為1 分，棕黃色為2分，棕褐色為3 分。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比評分的乘積＞3 分為陽性。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17．0 處理數(shù)據(jù)，兩種組織中ALKBH3 或Bcl-xl 蛋白陽性表達(dá)率的比較以及前列腺癌組織中ALKBH3 和Bcl-xl 蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系應(yīng)用χ2檢驗，以列聯(lián)系數(shù)評估前列腺癌組織中兩種蛋白表達(dá)的關(guān)系。檢驗水準(zhǔn)α=0．05。

2 結(jié)果

2．1 兩種前列腺組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白的表達(dá) 見圖1、表1。

圖1 兩種組織中ALKBH3(1)和Bcl-xl(2)蛋白的表達(dá)(SP，×400)

表1 前列腺增生與前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白的表達(dá)例(%)

2．2 前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 ALKBH3 和Bcl-xl 的蛋白表達(dá)與前列腺癌的分化程度及TNM 分期有關(guān)，與年齡無關(guān)。見表2。

2．3 前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析 前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl蛋白的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián)(rp=0．261，P =0．001)。見表3。

表2 前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系例(%)

表3 前列腺癌組織中兩種蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性例

3 討論

隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)前列腺特異性膜抗原、前列腺特異抗原等與前列腺癌的發(fā)生及進(jìn)展相關(guān);隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)這些蛋白的表達(dá)可作為前列腺癌的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行早期診斷，但是作為靶點進(jìn)行治療意義不大［4］。隨著我國快速進(jìn)入老齡化社會，前列腺癌的發(fā)病人數(shù)與日俱增，內(nèi)分泌治療患者不可避免地會進(jìn)展為去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)，CRPC 的治療即將成為個人及社會的沉重負(fù)擔(dān)。因此尋找安全有效的治療靶點，從而提高患者的生存率迫在眉睫。ALKBH3 是2005年利用熒光差異顯示分析技術(shù)克隆出的一種新的腫瘤基因［1］，與前列腺癌的發(fā)展密切相關(guān)，但是其作用機(jī)制尚不清楚。該研究采用免疫組化技術(shù)檢測ALKBH3 蛋白在不同前列腺組織中表達(dá)的情況，同時分析其與前列腺癌腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系。

細(xì)胞凋亡是受一系列基因控制的程序化細(xì)胞死亡方式，是通過外源性或內(nèi)源性的凋亡信號激活細(xì)胞內(nèi)的自殺程序而發(fā)生。已在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)Bcl-2 是重要的抑凋亡蛋白［5-6］。有研究［7］表明，定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的Bcl-2 可能通過阻斷Ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向胞質(zhì)的流動，使依賴Ca2+的核酸內(nèi)切酶活性降低，從而阻斷細(xì)胞凋亡。有學(xué)者［8］認(rèn)為Bcl-2 通過抗氧化劑或抑制氧自由基的產(chǎn)生而發(fā)揮其抑制細(xì)胞凋亡的功能。Bcl-xl 是Bcl-2 家族中重要的凋亡抑制基因，其激活與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。Bcl-xl 通過抑制死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合體形成，從而抑制Caspase 的活化［9］;而且可以通過與Apaf-1 和Caspase-9 形成三元復(fù)合物阻斷細(xì)胞凋亡的級聯(lián)反應(yīng)［10］。Bcl-xl 通過打破細(xì)胞自穩(wěn)平衡機(jī)制，使得受損的細(xì)胞不能及時清除，導(dǎo)致細(xì)胞惡變，而且Bcl-xl 的過量表達(dá)與腫瘤的耐藥性相關(guān)［11］。

該研究結(jié)果顯示，前列腺癌組織中ALKBH3 的陽性表達(dá)率為88．8%，遠(yuǎn)高于前列腺增生組織;ALKBH3 蛋白表達(dá)與前列腺癌的腫瘤分化程度和臨床分期有關(guān)。以上結(jié)果提示ALKBH3 的表達(dá)與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可以作為預(yù)測因子輔助判斷患者的預(yù)后。此外，該研究結(jié)果顯示Bcl-xl在前列腺癌中的表達(dá)與患者腫瘤分化程度及病理分期明顯相關(guān)，并且前列腺癌組織中Bcl-xl 的表達(dá)與ALKBH3 的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián)，提示ALKBH3 可能是通過抑制前列腺癌細(xì)胞凋亡促進(jìn)前列腺癌的進(jìn)展。

［1］Konishi N，Nakamura M，Ishida E，et al．High expression of a new marker PCA-1 in human prostate carcinoma［J］．Clini Cancer Res，2005，11(14):5090

［2］劉秉乾，王義昆，武玉東，等．前列腺癌抗原1 蛋白表達(dá)下調(diào)對前列腺癌LNCaP 細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響［J］．中華腫瘤雜志，2013，35(11):828

［3］梁博，王新軍，周少龍．膠質(zhì)瘤組織中CPEB4 和Bcl-xL的表達(dá)及預(yù)后影響因素分析［J］．鄭州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2013，48(5):605

［4］Crawford ED，Ventii K，Shore ND．New biomarkers in prostate cancer［J］．Oncology，2014，28(2):135

［5］Hofman P．Molecular regulation of neutrophil apoptosis and potential targets for therapeutic strategy against the inflammatory process［J］．Curr Drug Targets Inflamm Allergy，2004，3(1):1

［6］Culmsee C，Plesnila N．Targeting Bid to prevent programmed cell death in neurons［J］．Biochem Soc Trans，2006，34(Pt 6):1334

［7］遲萬好，曹明富，朱睦元．細(xì)胞凋亡的基因調(diào)控研究進(jìn)展［J］．杭州師范學(xué)院學(xué)報:自然科學(xué)版，2001，10(18):45

［8］Hajnóczky G，Csordás G，Das S．Mitochondrial calcium signalling and cell death:approaches for assessing the role of mitochondrial Ca2+uptake in apoptosis［J］．Cell Calcium，2006，40(5):553

［9］Voutsadakis IA．Apoptosis and the pathogenesis of lymphoma［J］．Acta Oncol，2000，39(2):151

［10］張嵐，高冬玲，溫洪濤，等．Bcl-XL 反義寡核苷酸對食管癌EC9706 細(xì)胞和裸鼠移植瘤組織的誘凋亡作用［J］．鄭州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2014，49(2):146

［11］Zhou F，Yang Y，Xing D．Bcl-2 and Bcl-xl play important roles in the crosstalk between autophagy and apoptosis［J］．FEBS J，2011，278(3):403