運(yùn)脾消食顆粒對厭食癥大鼠模型血清八肽膽囊收縮素、鋅含量影響的研究

杜晨光，丁培杰，曹 穎，徐丁潔，鄭彩慧，白素芬，柳月娟，董玉山

（河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000）

厭食癥是臨床中常見的小兒消化系統(tǒng)疾病，表現(xiàn)為非疾病因素而出現(xiàn)較長時期的見食不貪、食欲不振、甚則拒食，多見于1～6歲的兒童，城市發(fā)病率高于農(nóng)村，一年四季均可發(fā)病，尤以夏末秋初多見。厭食癥對小兒的生長發(fā)育、營養(yǎng)狀況、智力發(fā)展均有影響。長期厭食，可使小兒攝取營養(yǎng)物質(zhì)不足，不能滿足迅速生長發(fā)育的需要，導(dǎo)致小兒營養(yǎng)不良、貧血、佝僂病及免疫力低下，出現(xiàn)反復(fù)呼吸道感染，嚴(yán)重影響小兒身體健康［1］。運(yùn)脾消食顆粒為治療厭食癥的經(jīng)驗(yàn)方，筆者導(dǎo)師焦平教授臨床應(yīng)用該方20余年，療效肯定。本實(shí)驗(yàn)主要探討八肽膽囊收縮素（CCK-8）、鋅（Zn）在小兒厭食癥發(fā)病過程中發(fā)揮的作用及該藥的治療機(jī)制，為新藥開發(fā)和臨床安全用藥提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 選用SPF級健康SD大鼠，日齡35～40d，體重（60±10）g，雌雄兼用，共 60只。由天津山川紅實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司提供，合格證號：SCXK（2009-001）。

1.1.2 藥品及試劑 運(yùn)脾消食顆粒：由焦三仙、炒白術(shù)、半夏、陳皮、雞內(nèi)金、胡黃連、佩蘭等中藥組成。所需中藥材均購自同仁堂藥店，再由我院制劑室水煎濃縮，加輔料攪拌成膏，烘干粉碎，再用滾動制粒機(jī)制成顆粒，封裝機(jī)分裝成袋，每袋9g。江中健胃消食片（小兒）：購自唐山市唐人藥店，江中藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號1401006。CCK-8放免試劑盒（北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供，批號20140611）。血清Zn試劑盒（上海信裕生物科技有限公司提供，批號 20140801）。

1.1.3 特制高蛋白高脂飼料（以下簡稱特制飼料）用奶粉、魚松、豆粉、玉米粉、白糖、鮮雞蛋、鮮肥肉，按1∶1∶2∶1∶1∶2∶2比例配制，所用配料均購自家樂福超市。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 放射免疫分析儀、半自動生化分析儀、臺式高速低溫離心儀、電子分析天平、常用手術(shù)器械、試管等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將60只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，然后隨機(jī)分為正常組、模型對照組（模型組）、江中健胃消食片組（消食片組）、運(yùn)脾消食顆粒小劑量組（小劑量組）、運(yùn)脾消食顆粒大劑量組（大劑量組）5組，每組12只。采用病因模擬法造模［2］，正常組用常規(guī)鼠飼料喂養(yǎng)，其余4組用特制飼料喂養(yǎng)。所有動物均單籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水，每日記錄攝食量及體質(zhì)量，以造模大鼠平均攝食量低于正常組20%～30%為造模成功。造模成功后，小劑量組和大劑量組分別灌服運(yùn)脾消食顆粒12.5g/（kg·d）、25g/（kg·d），消食片組灌服江中健胃消食片水溶劑25g/（kg·d），正常組和模型組灌服等體積（均為2mL）蒸餾水。各組每日灌胃1次，連續(xù)20d。于末次給藥后次日，斷頸采全血2mL盛于一次性塑料試管內(nèi)，每只試管采血前均按組做好標(biāo)記。待5組大鼠采血完畢，將盛血的試管分別置于離心機(jī)中以3000r/min離心15min，取血清，-20℃保存待測。采用放免法檢測血清CCK-8含量，半自動生化分析儀檢測血清Zn含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組動物攝食量、體質(zhì)量變化情況比較

結(jié)果見表1，表2。

表1 各組動物體質(zhì)量變化情況比較 （g，±s）

表1 各組動物體質(zhì)量變化情況比較 （g，±s）

注：與正常組比較，1）P<0.01；與模型組比較，2）P<0.05，3）P<0.01；與消食片組比較，4）P<0.05

組別 第1天 第7天 第14天 第21天 第28天正常組 64.35±10.96102.44±12.02139.71±13.80 161.37±7.87 188.64±13.22模型組 65.21±9.34 104.22±11.11131.96±9.481） 149.04±11.31 159.57±10.38消食片組 64.27±13.65102.82±10.94132.05±9.13 155.67±9.252） 174.42±12.803）小劑量組 66.51±9.48 104.30±11.86137.27±10.732） 167.00±12.443）4） 189.14±11.983）4）大劑量組 64.89±7.94 103.98±8.25 136.94±11.572） 168.50±11.843）4） 188.03±10.353）4）

表2 各組動物攝食量變化情況比較 （g，±s）

表2 各組動物攝食量變化情況比較 （g，±s）

注：與正常組比較，1）P<0.01；與模型組比較，2）P<0.05，3）P<0.01；與消食片組比較，4）P<0.05，5）P<0.01

組別 第1天 第7天 第14天 第21天 第27天正常組 11.37±2.5614.11±2.24 18.41±3.06 23.78±2.88 28.36±3.45模型組 10.78±1.9011.01±2.381） 13.55±2.47 14.11±1.73 16.59±2.76消食片組 11.20±3.2111.93±2.221） 14.76±3.12 17.93±2.452） 19.46±3.262）小劑量組 11.00±1.5711.89±2.041） 15.04±3.262） 20.33±2.553）4） 27.42±2.933）5）大劑量組 10.96±2.5111.43±1.981） 15.29±2.152） 23.88±1.873）5） 29.01±2.223）5）

由表1可知，第1天、第7天，各組大鼠體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；第14天，模型組體質(zhì)量較正常組明顯下降（P<0.01），大、小劑量組體質(zhì)量較模型組顯著增加（P<0.05），說明運(yùn)脾消食顆?？纱龠M(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，增加大鼠體質(zhì)量；第21天、第28天，大、小劑量組及消食片組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01），大、小劑量組與消食片組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明以上2種藥物均能使厭食大鼠的體質(zhì)量增加，運(yùn)脾消食顆粒的療效優(yōu)于健胃消食片。

由表2可知，第1天，各組大鼠攝食量相當(dāng)（P>0.05）；第7天，模型組、消食片組、小劑量組、大劑量組大鼠攝食量與正常組比較均顯著下降（P<0.01），攝食量平均下降23.6%，而這4組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），造模成功。給藥1w后（即第14天），大、小劑量組的攝食量較模型組顯著增加（P<0.05），而給藥2w后（即第21天），消食片組與模型組比較差異才有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明運(yùn)脾消食顆粒比健胃消食片起效更快；第21天，大、小劑量組與消食片組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01），說明運(yùn)脾消食顆粒的療效優(yōu)于健胃消食片；同時，第27天，大、小劑量組與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果表明，這2組大鼠的攝食量已經(jīng)基本恢復(fù)至正常水平。

2.2 各組大鼠血清CCK-8、Zn含量變化比較

結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠血清CCK-8、Zn含量變化比較 （±s）

表3 各組大鼠血清CCK-8、Zn含量變化比較 （±s）

注：與正常組比較，1）P<0.01；與模型組比較，2）P<0.05，3）P<0.01

8（pg/mL） Zn（mg/L）±77.35 1.4451±0.4148±99.211） 0.8002±0.39121）消食片組 12 302.17±81.023） 1.4373±0.40503）小劑量組 12 273.67±84.933） 1.2079±0.41112）大劑量組 12 281.42±99.533） 1.4536±0.42583）

由表3可知：與正常組比較，模型組血清中CCK-8含量明顯升高，Zn含量明顯降低（P<0.01）；與模型組比較，大劑量組、小劑量組、消食片組血清中CCK-8含量明顯降低，Zn含量顯著升高（P<0.05，P<0.01）。以上結(jié)果表明，2種藥物對厭食癥大鼠模型體內(nèi)CCK-8的生成均有抑制作用，能明顯提高厭食癥大鼠血清Zn水平，且效果相當(dāng)（P>0.05）。

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為小兒厭食癥的發(fā)生主要是由于飲食不節(jié)、喂養(yǎng)不當(dāng)所致，脾運(yùn)失職，胃納失司，運(yùn)化功能失常是其發(fā)病的根本原因，現(xiàn)代食物結(jié)構(gòu)的改變、自然環(huán)境的污染等是其發(fā)病的外在因素。因此治療厭食癥的關(guān)鍵在于運(yùn)脾和胃、消食導(dǎo)滯。運(yùn)脾消食顆粒是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，結(jié)合長期臨床經(jīng)驗(yàn)和現(xiàn)代藥理研究，在朱丹溪保和丸基礎(chǔ)上加減化裁而來。其主要藥物包括焦三仙、炒白術(shù)、半夏、陳皮、雞內(nèi)金、胡黃連、佩蘭等，具有運(yùn)脾和胃、消食化滯之功，經(jīng)多年臨床應(yīng)用，對小兒厭食癥療效良好。方中焦三仙為消食化滯之要藥；白術(shù)燥濕和中，補(bǔ)脾益胃消食，與焦三仙共為君藥，取其消補(bǔ)兼施之意。雞內(nèi)金具有和胃健脾、寬中消食之作用，陳皮有理氣降逆、調(diào)中開胃之功效，善治中焦脾胃氣滯濕阻之證。半夏具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結(jié)之功。以上三藥，共為臣藥，收行氣化滯、健脾消食止嘔之效。胡黃連可清小兒疳積之熱，佩蘭芳香化濕醒脾，共為佐使，輔助君、臣之藥達(dá)運(yùn)脾和胃、消食化滯之功［3］。該方消補(bǔ)并舉，標(biāo)本同治，補(bǔ)而不滯，消導(dǎo)而不傷正，故對厭食癥有較滿意的療效。

膽囊收縮素（CCK）具有刺激胰酶分泌、引起膽囊收縮、促進(jìn)某些激素釋放等多種作用。近年來發(fā)現(xiàn)CCK在攝食控制中有重要作用，其分泌狀態(tài)受食物成分的影響，脂肪和蛋白質(zhì)是刺激CCK釋放最有效的物質(zhì)。其中CCK-8為內(nèi)源性CCK的重要功能片段，有研究表明大鼠進(jìn)餐后血中CCK-8立即升高2～6倍，并在 15min內(nèi)恢復(fù)到基礎(chǔ)水平［4］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，厭食癥大鼠模型血清中CCK-8含量顯著高于正常動物，同時攝食量明顯下降，并持續(xù)3w以上，表明用高脂高蛋白飼料喂養(yǎng)大鼠，可導(dǎo)致動物內(nèi)源性CCK-8的基礎(chǔ)濃度異常增高，從而長期抑制動物的攝食量。這一結(jié)果提示，小兒厭食癥的發(fā)生發(fā)展可能與飲食過于肥甘厚膩而導(dǎo)致CCK-8分泌增多有關(guān)。用運(yùn)脾消食顆粒治療的模型動物，攝食量顯著高于模型組，血清中CCK-8濃度明顯低于模型組，接近于正常動物，表明該藥對CCK-8的分泌有明顯抑制作用，能夠促進(jìn)動物攝食。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，兒童食欲正常與否與人體微量元素Zn密切相關(guān)。正常人唾液中每分子味覺素含2個Zn離子，體內(nèi)Zn缺乏時味覺素作用減弱，缺Zn還可以引起舌黏膜增生和角化不全，阻塞味蕾小孔使味覺敏感度下降，從而引起厭食［5］。本次實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示，模型組大鼠血清Zn明顯低于正常水平，治療后，血清Zn的含量增加，與臨床研究結(jié)果一致，為運(yùn)脾消食顆粒治療小兒厭食癥提供了有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］杜晨光.童胃沖劑治療小兒厭食癥的實(shí)驗(yàn)研究［D］.石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2007.

［2］汪受傳，杜永平，張?jiān)缕?，?特制飼料喂養(yǎng)幼齡大鼠建立小兒厭食癥模型［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，1999，15（3）：148-150.

［3］杜晨光，丁培杰，曹穎，等.運(yùn)脾消食方對厭食癥兒童唾液淀粉酶活性、血紅蛋白含量影響的研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（12）：315-318.

［4］Fink H，Rex A，Voits M，et al.Major biological actions of CCK-8：a critical evaluation of research findings［J］.Experimental Brain Research，1998，123（1/2）：77-83.

［5］范華，周士偉，高鐵祥，等.針刺四縫穴對實(shí)驗(yàn)性脾虛大鼠血清鋅及胃排空率的影響［J］.中國針灸，2007，27（8）：595-597.