探討酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在包蟲病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

王文碧

四川省阿壩藏族羌族自治州疾病預(yù)防控制中心，四川阿壩 624000

包蟲?。╤ydatidosis），又稱棘球蝴病（echinococcosis），呈全球性分布，屬于人畜共患疾病。包蟲病主要流行于畜牧地區(qū)，在我國此病多發(fā)于四川西部、青海、寧夏、新疆、西藏、甘肅、內(nèi)蒙、陜西等地[1]，包蟲可以在人體內(nèi)存活數(shù)年，患者的臨床表現(xiàn)與包蟲的寄生部位、囊腫大小密切相關(guān)且不盡相同。機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)是包蟲病感染早期的主要應(yīng)激反應(yīng)，免疫學(xué)診斷可以為該病的早期診斷提供重要診斷指標(biāo)[2]。該文中將以該院2014年1月—2014年12月期間收集的150份人血清樣本作為該組研究的檢測對象，分別采用ELISA與DIGFA對血清進(jìn)行包蟲病檢測，其中包括感染包蟲病患者、疑似包蟲病感染者以及健康人群血清各50份，對比兩種檢測方法在包蟲病臨床診斷中的敏感度與特異性，以探討酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在包蟲病診斷中的應(yīng)用價(jià)值，為今后的臨床工作提供思路,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA）與滴金免疫滲濾法（DIGFA）對該院采集的150份血清進(jìn)行檢測，其中包括感染包蟲病患者（感染組）、疑似包蟲病感染者（疑似組）以及健康人群（健康組）血清各50份。感染組中，男性29例，女性21例；年齡6～67歲，平均（43.64±4.49）歲。疑似組中，男性 27例，女性 23例；年齡8～62歲，平均（41.47±5.15）歲。健康組中，男性 27例，女性 23例；年齡 8～66歲，平均（42.53±5.41）歲。3組人員均來自同一牧區(qū)，且在性別、年齡方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 試劑 ①DIGFA-檢測：試劑盒采用包蟲病金標(biāo)快速診斷（DIGFA-kit）試劑盒（批號 20011015）；小牛血清（批號 100419）；鼠抗人聯(lián)辣根過氧化物酶抗體［IgG（H+L）］（批號：KL12737640）；②ELISA檢測：包蟲lgG抗體診斷試劑盒（批號20031109）。

1.2.2 檢測方法 ①DIGFA-檢測：將血液樣本經(jīng)A液稀釋后（1:5），加100 μL于反應(yīng)板的小孔中，滲入后加B液3滴，滲入后加C液3滴，滲入后加B液3滴，3 min后即可對結(jié)果進(jìn)行評定；檢測結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)由中國新疆包蟲病臨床研究所[3]提供：肉眼觀察以C點(diǎn)（+）為單房包蟲?。?xì)粒棘球蝴?。籇點(diǎn)（+）為多房包蟲?。ㄅ萸蚝。?。

②ELISA檢測：將待檢血液樣本經(jīng)稀釋液稀釋后（1:100）按常規(guī)ELISA法操作[4]；計(jì)算樣本與陰性對照的A值之比（S/N）≥3.0為陽性，S/N ＜3.0，為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用 SPSS 15.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用百分比（%）表示，數(shù)據(jù)對比采取χ2檢驗(yàn)，P＞0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，

2 結(jié)果

DIGFA法在包蟲病患者血清檢測中的特異性抗體的敏感度為 96%（48/50）、特異度為 100%（50/50）；ELISA 法在包蟲病患者血清檢測中的特異性抗體的敏感度為100%（50/50）、特異度為100%（50/50）；DIGFA與ELISA法檢測結(jié)果符合率為 91.67%，兩組在特異性抗體的敏感度 （χ2=0.141，P=0.24）與特異度 （χ2=0.203，P=0.17）方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表 1。

表1 兩種檢測方法結(jié)果對比分析[n（%）]

3 討論

包中病是指由細(xì)粒棘球絳蟲（單房棘球絳蟲）的幼蟲，即細(xì)粒棘球蝴（cystic echinococcosis，CE）和多房棘球絳蟲（泡性棘球絳蟲）幼蟲，即泡球蝴（alveococcosis，AE）所導(dǎo)致的寄生蟲病的統(tǒng)稱[5]。臨床中根據(jù)寄生蟲蟲種的不同將包蟲病分為囊型包蟲病（cysticechinococcosis，CE， 單房型包蟲?。?、 泡型包蟲?。╝lveolar echinococcosis，AE，多房型包蟲病）以及混合型包蟲病3種，混合型包蟲病是由伏氏棘球絳蟲或少節(jié)棘球絳蟲的幼蟲共同致病，在我國尚未見此類病例。CE和AE都屬于食源性疾病，終宿主以犬、狼、狐等食肉動(dòng)物為主，蟲卵會隨宿主糞便排出體外，被人類誤食后即會感染包蟲病。牧區(qū)一般均為山區(qū)，而且全年氣候干旱少雨，生活區(qū)域內(nèi)犬、狼、狐等動(dòng)物的糞便密度高，污染源眾多，因此是包蟲病的主要流行區(qū)，個(gè)別村落人群包蟲病的感染率可高達(dá)28.83%[6]，嚴(yán)重影響當(dāng)?shù)鼐用竦纳眢w健康。

現(xiàn)階段臨床中針對包蟲病的檢測與診斷以腹部超聲檢測與血清學(xué)檢測為主，腹部超聲檢測可以直觀地顯示包蟲的存在，而且對于被機(jī)體的免疫系統(tǒng)消滅包蟲病后出現(xiàn)的吸收癱痕或鈣化灶等具有良好的鑒定價(jià)值[7]，但是由于包蟲病的潛伏期較長，且以慢性損傷為主，早期感染并無明顯的癥狀與體征，因此超聲檢查對包蟲病的早期篩查效果非常有限。

近年來，血清學(xué)檢測方法以其操作簡便、敏感性高、特異性強(qiáng)、成本低廉等優(yōu)勢在臨床中的應(yīng)用程度越來越高，其經(jīng)常與超聲檢測、B超檢測等聯(lián)合應(yīng)用，已經(jīng)成為包蟲病臨床篩查與診斷的重要手段之一。

DIGFA法最早主要用于HIV抗體的檢測，其工作原理主要是利用微孔濾膜的垂直滲透濃縮，使標(biāo)本中的抗包蟲病特異性抗體與N·C膜包被的抗原快速形成抗原抗體復(fù)合物[8]，然后加入膠體金標(biāo)記的抗體，由于膠體金肉眼可見，因此陽性反應(yīng)會在膜上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，陰性反應(yīng)則不形成紅色斑點(diǎn)。DIGFA法操作簡便、速度快，對環(huán)境與設(shè)備的要求較低，因此近年來在其他傳染病的免疫檢測中的應(yīng)用程度越來越高。

ELISA法在包蟲病早期診斷中的應(yīng)用主要是由于機(jī)體在包蟲抗原的刺激下會產(chǎn)生IgM抗體，IgG替代IgM并成為抗包蟲特異性免疫球蛋白的主要組成部分，導(dǎo)致IgM抗體水平下降，IgG濃度在體內(nèi)持續(xù)升高。ELISA與DIGFA法相比，對環(huán)境、操作人員技術(shù)以及設(shè)備等要求較高，因此對其推廣有所局限。

該研究中，DIGFA法在包蟲病患者血清檢測中的特異性抗體的敏感度為96%、特異度為100%；ELISA法的敏感度為100%、特異度為100%；DIGFA與ELISA法檢測結(jié)果符合率為91.67%，兩組在特異性抗體的敏感度（χ2=0.141，P=0.24）與特異度（χ2=0.203，P=0.17）方面，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與歐仕穎等[9]研究相符。

綜上所述，DIGFA法與ELISA法在包蟲病臨床診斷中的敏感度與特異性均較高，其中ELISA法的敏感度更高，但是對檢測時(shí)間、操作技能以及設(shè)備的要求較高，不適合作為現(xiàn)場流調(diào)使用。

[1]黃菱,李正直,李燕兵,等.兩種特異抗體檢測與B超診斷在包蟲病流行病學(xué)調(diào)查中的應(yīng)用[J].寧夏醫(yī)科犬學(xué)學(xué)報(bào),2012,34（6）：557-560.

[2]Feng X，H.wen,z zhang,et al.Dot immunogold filtration assay(DIGFA)w ith multiple native antigens for rapid serodignosis of human cystic and alveolar echinococcosis[J].Acta Tropica,2010,113（2）：114-120.

[3]李宗吉,趙巍,王婭娜,等.細(xì)粒棘球蚴重組抗原mMDH用于囊型包蟲病血清學(xué)診斷的初步研究[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,33（3）：216-218.

[4]鄭云太.采用B型超聲波、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷包蟲病探討[J].中華流行病學(xué)雜志,2014,11（25）：1005.

[5]Yang YR,Craig PS,Vuitton DA,et al.Serological prevalence of echinococcosis and risk factors for infection among children in rural communities of southern Ningxia,China[J].Trop Med Int Health,2008,13（8）：1086-1094.

[6]劉海青,趙延梅,吳獻(xiàn)洪,等.青海省治多縣人群包蟲病血清流行病學(xué)調(diào)查[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2009,36（2）：366.

[7]Yang YR,Craig PS,Ito A,et al.A correlative study of ultrasound with serology in an area in China coendemic for human alveolar and vystic echinococcosis[J].Trop Med Int Health,2007,12（5）：637-646.

[8] Rausch RL,Wilson JF,Schantz PM,et al.Spontaneous death of Echinococcus multilocularis:cases diagnosed serologically (by Em2 Elisa)and clinical signifocance[J].The American Journal of Tropical Medicine and Hyginene,1987(36)：576-585.

[9]歐仕穎,余長芳.用DIGFA，ELISA兩種免疫診斷方法檢測包蟲病的綜合評價(jià)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,26（5）：121-123.