酸藤子提取物的抑菌活性研究

廖建良，王 正，秦 歆

（1.惠州學(xué)院 生命科學(xué)系/生物技術(shù)研究所，廣東 惠州 516007；2.江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司 江蘇 鎮(zhèn)江 212009）

1 前言

酸藤子［Embelia laeta（L.）Mez］又名信筒子、酸藤果、入地龍、雞母酸等，是紫金?？扑崽僮訉僦参?。其根、葉可散瘀止痛、收斂止瀉、治跌打腫痛、腸炎腹瀉、咽喉炎、胃酸少、痛經(jīng)閉經(jīng)等，民間人們有吃葉的習(xí)慣，無毒。果可食，強壯補血。分布于廣東、廣西、云南、臺灣、江西等省，福建南部地區(qū)常見，資源較豐富［1-2］。目前人們?yōu)榱搜娱L食品的保藏期限，在食品的生產(chǎn)、加工和貯藏過程中，常常采用添加防腐劑，細(xì)菌、霉菌、酵母菌等微生物的是造成食品腐敗變質(zhì)原因。但近來研究發(fā)現(xiàn)，合成食品防腐劑有一定的安全問題、不利于人體健康，因此選擇新的安全高效的天然食品防腐有現(xiàn)實意義。目前利用植物提取抑菌物，已對魚腥草、三叉苦葉等植物進行研究［3-8］。但有關(guān)酸藤子果與葉的醇提取物抑菌研究鮮見報道。本實驗將酸藤子果葉的醇提取物，進行抑菌活性實驗和抑菌防腐效果的研究，旨在研究開發(fā)出能集防腐與保健為一體的無毒無副作用的天然抑菌防腐劑。

2 材料與方法

2.1 材料與菌種

酸藤子，廣東省惠州學(xué)院后山采集。

金黃葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、綠膿桿菌（p.aeruginosa）、枯草芽孢桿菌［Bacillussubtilis（Ehrenberg）Cohn］、青霉菌（Penicillium sp.）、黑曲霉（Aspergillusniger）均由惠州學(xué)院微生物實驗室提供。

培養(yǎng)基

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、瓊脂15g，加水至1000ml，攪拌煮沸，調(diào)PH至7.3±0.2，于121℃、15min滅菌。用于細(xì)菌培養(yǎng)。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）：馬鈴薯300g、葡萄糖20g、瓊脂15g、氯霉素0.1g，取樣本40.1g，加水至1000ml，調(diào)PH至6.0±0.2，于121℃、20min滅菌。用于真菌培養(yǎng)。

2.2 方法

2.2.1 酸藤子果提取物和酸藤子葉提取物的制備

按照文獻［8］的方法得質(zhì)量濃度為1g·m L-1的醇提物供試品。

2.2.2 菌種活化及菌懸液制備

按照文獻［8］的方法活化菌種，制成菌懸液，備用。

2.2.3 抑菌作用的測定

采用濾紙片擴散法。圓濾紙片用打孔器在白色濾紙上打出直徑為6.0mm的小圓片，按照文獻［8］的方法將細(xì)菌置33℃培養(yǎng)24h，霉菌置28℃培養(yǎng)48h，取出后測量抑菌圈大小，比較其抑菌效果。

2.2.4 抑菌效力的測定

采用平板稀釋法。按照文獻［8］的方法將酸藤子果提取物和酸藤子葉提取物用無菌水進行稀釋（V/V），制成500mg·m L-1、250mg·m L-1、125mg·m L-1、62.5mg·m L-1、31.25mg·m L-1系列濃度稀釋液；按照文獻［8］的方法測定最低抑菌濃度（MIC）。提取物的MIC越低，其抗菌效力越強。

2.2.5 提取物熱穩(wěn)定性測定

將酸藤子果提取物和酸藤子葉提取物分別放在60℃、80℃、100℃水浴條件下處理15min后，將高壓蒸氣滅菌的直徑6.0mm的圓濾紙片分別放入各個溫度提取物中浸泡備用。按照文獻［8］的方法比較其抑菌效果，每個溫度做3次重復(fù)。結(jié)果取重復(fù)試驗的平均值。

主要儀器參考文獻［8］

3 結(jié)果與分析

3.1 酸藤子果與葉提取物抑菌作用效果

由表1可見，酸藤子果提取物對綠膿桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈平均直徑分別為27.40、29.10、24.40mm；酸藤子葉提取物對對綠膿桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈平均直徑分別7.70、9.90、7.70 mm。酸藤子果提取物和酸藤子葉提取物在含有細(xì)菌培養(yǎng)基上都有明顯的抑制圈，而在含霉菌的培養(yǎng)基上沒有抑菌圈出現(xiàn)；說明酸藤子果提取物、酸藤子葉提取物對細(xì)菌都有一定的抑菌作用，而對霉菌無抑制作用。由于酸藤子果提取物的抑菌圈明顯較大，說明酸藤子植物的果提取物抑菌作用明顯，主要取決于酸藤子果中的抑菌成分。結(jié)果表明，酸藤子果提取物比酸藤子葉提取物對細(xì)菌有較強抑制作用。

表1 酸藤子果提取物及酸藤子葉提取物對供試菌種的抑菌效果

3.2 酸藤子果與葉提取物M IC測定

由表2、表3可見，酸藤子果提取物和酸藤子葉提取物對細(xì)菌有一定的抑菌效力，酸藤子果提取物對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、綠膿桿菌的MIC值為62.5mg·m L-1，酸藤子葉提取物對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的MIC值為125mg·m L-1；酸藤子葉提取物對綠膿桿菌的MIC值為62.5mg·m L-1。由此可見，酸藤子葉提取物的抑菌力比酸藤子果提取物的抑菌力較低；由表2、表3可見，對照組物質(zhì)對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、霉菌均無抑制效果。同時也進一步說明酸藤子果提取物和酸藤子葉提取物對細(xì)菌的抑菌效力主要取決于酸藤子果和酸藤子葉中的抑菌成分，而對霉菌則沒有抑制效果。這與用濾紙片法測定抑菌作用試驗得出的結(jié)論一致。

表2 酸藤子果提取物的MIC測定結(jié)果

表3 酸藤子葉提取物的MIC測定結(jié)果

3.3 酸藤子果與葉提取物熱穩(wěn)定性研究

由表5可見，酸藤子果提取物和酸藤子葉提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌研究，兩種提取物對熱都有很好的穩(wěn)定性，在100℃以下，抑菌效力都沒有明顯的影響。可能是因為酸藤子果和酸藤子葉中的抑菌成分不會被高溫破壞，故不會明顯影響提取物的抑菌作用。因此，實際應(yīng)用時可以考慮溫度60～100℃之間提取。

表5 熱處理對提取物抑菌效果的影響

4 結(jié)語與討論

從本研究的抑菌結(jié)果表明，酸藤子果提取物及酸藤子葉提取物對3種供試菌種中的細(xì)菌都有抑制作用，這可能與提取物所含有的抑菌活性成分有關(guān)，其具體的作用機制有待于進一步探討。酸藤子果及葉提取物對霉菌沒有抑菌作用，但是對細(xì)菌有較強的抑制作用，且在60～100℃之間加熱提取對這些物質(zhì)沒有明顯的破壞作用。無論是酸藤子果還是酸藤子葉都具有抑菌作用，酸藤子果提取物比酸藤子葉提取物抑菌效果更加明顯，說明酸藤子果提取物對細(xì)菌有較強的抗菌作用，具有作為天然防腐劑應(yīng)用于食品工業(yè)的潛力。雖然唐天君［1］、馮旭［9］等人對酸藤子化學(xué)成分研究；但，目前對酸藤子果與葉的抑菌作用研究與應(yīng)用還沒有受到重視。酸藤子在廣東等地野外分布廣泛，且結(jié)果數(shù)量多。我們建議要充分開發(fā)酸藤子等野生植物資源并加以利用，積極開展野生植物的綜合利用研究，開拓山區(qū)新的產(chǎn)品，發(fā)展我國營養(yǎng)功能保健食品和天然食品防腐劑，滿足老百姓的日常生活需要。

［1］唐天君，吳鳳鍔.酸藤子化學(xué)成分的研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16（2）：129-130.

［2］中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志［M］.第58卷.北京：科學(xué)出版社，1979：120．

［3］熊大勝，席在星，鄧應(yīng)威.魚腥草提取物抑菌作用研究［J］.常德師范學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2002（4）：59-60.

［4］曾瑩，姚曉玲，夏服寶.荸薺皮提取物的抗菌性及其應(yīng)用研究［J］.食品工業(yè)科技，2003（11）：17-20.

［5］曾瑩，向新柱，夏服寶.荸薺皮提取物對細(xì)菌的作用方式研究［J］.食品科學(xué)，2004，25（12）：72-75.

［6］張百剛，高春燕，劉小風(fēng).甘草、黃花菜提取物復(fù)配抑菌防腐作用的研究［J］.食品工業(yè)科技，2009（9）：136-138

［7］譚宏亮，劉紅衛(wèi)，朱建新.夾竹桃葉提取物抑菌活性的初步研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（4）：70-71.

［8］廖建良，揭育霞.三叉苦葉提取物的抑菌活性研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，39（19）：90-92.

［9］馮旭，李耀華，梁臣艷等.酸藤子化學(xué)成分研究［J］.中藥材，2013，36（12），1947-1949.