尿素中縮二脲含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的評價

黃世英，高杜娟，劉俊保，趙又穆

（中國石油蘭州化工研究中心，甘肅蘭州 730060）

紫外-可見分光光度法是測定有色溶液中物質(zhì)含量的一種方法。其理論依據(jù)是郎伯-比耳定律，即吸收光譜的強度與呈色物質(zhì)的濃度成正比。測定被測樣品的吸光度，計算物質(zhì)的含量時，需要先配制一系列該物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到被測樣品吸光度對應(yīng)的值，即被測樣品的濃度，通過計算求出含量。因此標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性會影響被測樣品的結(jié)果。所以對標(biāo)準(zhǔn)曲線的評價尤為重要。綜合線性檢驗、截距檢驗、斜率檢驗三個方面評價標(biāo)準(zhǔn)曲線?，F(xiàn)有報道大部分只對標(biāo)準(zhǔn)曲線進行線性檢驗,很少對其進行截距檢驗[1-3]，還沒有文獻報道斜率檢驗。本文對尿素中縮二脲含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線通過三種檢驗方式對其進行評價，以便準(zhǔn)確地測定尿素中縮二脲含量。

1 儀器和試劑

儀器：紫外-分光光度計 Lambda35,美國PE 公司。

試劑：縮二脲，東京化成工業(yè)株式會社。

2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 2441.2-2010[4]，配制2.00g/L 的縮二脲標(biāo)準(zhǔn)溶液，用移液管依次移取不同體積，配制成8個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，見表1。

2.2 吸光度的測定

按照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 2441.2-2010[4]的規(guī)定，在30min 內(nèi)，以縮二脲量為零的溶液作為參比溶液，在波長550nm 處，用分光光度計測定上述標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度?？s二脲的量與吸光度值見表2。

表1 縮二脲標(biāo)準(zhǔn)溶液 Table 1 Standard solution of biuret

表2 不同量縮二脲對應(yīng)的吸光度值 Table 2 The absorbance of standard solution of different concentration

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用Excle 對縮二脲的量與吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1。

圖1 縮二脲的量與吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線 Fig.1 The standard curve of content and absorbance of biuret

3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗

通過線性檢驗、截距檢驗和斜率檢驗驗證所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性。

3.1 線性檢驗

線性檢驗，即檢驗標(biāo)準(zhǔn)曲線的精密度，當(dāng)|r|≥0.9990 時，說明線性關(guān)系好。用Excel 對標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合出線性方程公式（1）：

式中：x 為吸光度；y 為縮二脲的量；154.33為斜率b；-0.1056 為截距a。

由 Excel 給出該方程的 r2=0.9994，得出|r|=0.9997>0.9990，說明該方程的線性關(guān)系很好。

3.2 截距檢驗

截距檢驗，即檢驗標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確度，在線性檢驗合格的基礎(chǔ)上，對其進行線性回歸，得到回歸方程y=a+bx，然后將所得截距a 與0 作t 檢驗，當(dāng)取95%的置信水平時，經(jīng)檢驗無顯著性差異，截距檢驗合格。對公式（1）中的截距a 與0 進行t 檢驗。公式（1）中的截距a=-0.1056。

依據(jù)公式（2）-（7)[1]計算t 值：

n 為所測點數(shù)，n=7。

根據(jù)上述公式和已知的數(shù)據(jù)，用Excle 處理后的結(jié)果見表3。

表3 結(jié)果處理表 Table 3 The results of treatment with excle

(續(xù)表)

由表3 得出t=0.0025，查表知當(dāng)置信水平P=95%時，n=7 時，f（自由度）=6，t=2.45[5]。因為0.0025?2.45，所以將a 看作0 時，標(biāo)準(zhǔn)曲線無顯著性差異，即截距檢驗合格。

3.3 斜率檢驗

斜率檢驗，檢驗該方法的靈敏度，當(dāng)斜率的相對極差小于5%時，斜率檢驗合格。將配好的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測定五次吸光度，得到5 組數(shù)據(jù)。其測定結(jié)果見表4。

表4 5 組吸光度測試結(jié)果 Table 4 5 groups date of absorbance of standard solution

用Excle 對五組數(shù)據(jù)與縮二脲的量作圖，得到5個斜率b，求出其平均值，根據(jù)公式（8）、（9）計算5個斜率的相對差值（極差），與5%比較（分子吸光光度法要求相對差值小于5%）。五組數(shù)據(jù)的斜率及平均值、極差、相對極差見表5。

表5 5 組數(shù)據(jù)相關(guān)統(tǒng)計結(jié)果 Table 5 The relevant statistical results of 5 sets date

由表5 得出，相對極差值為0.73%，分子吸光光度法要求相對差值小于5%，0.73<5，所以斜率檢驗合格。

4 結(jié)論

對尿素中縮二脲含量測定建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線進行線性檢驗、截距檢驗和斜率檢驗，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系很好、標(biāo)準(zhǔn)曲線無顯著性差異、斜率的相對極差值小，尿素中縮二脲含量測定建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確，可以確保測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，在日常檢驗中可以直接使用。

[1]杜海波. Excel 在水質(zhì)分析標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程截距檢驗計算中的應(yīng)用[J]. 水文，2011，31（3）：88-89.

[2]張靜初，劉雅娜，薛志群. 一元線性回歸方程有關(guān)檢驗問題的研究[J]. 價值工程，2012(2)：1-2.

[3]陶冶，李芳林. 線性回歸分析中對截距項的檢驗[J].統(tǒng)計與決策，2001(11)：16.

[4]張求真，孫丹. GB/T 2441.2-2010 尿素的測定方法第2 部分：縮二脲含量分光光度法[S]. 北京，中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會，2010.

[5]武漢大學(xué)主編.分析化學(xué)[M]. 高等教育出版社，第四版：250.