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    紫菀藥材的HPLC指紋圖譜研究

    2015-11-26 10:53:28曹貴陽霍金海
    黑龍江中醫(yī)藥 2015年2期
    關(guān)鍵詞:紫菀項下產(chǎn)地

    曹貴陽 張 瑞 霍金海

    (黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·150036)

    紫菀為常用中藥,中國藥典(2010版)收載其來源為菊科植物紫菀(Aster tataricusL.f.)的干燥根莖及根,具潤肺下氣、鎮(zhèn)咳祛痰之功效,主治氣逆咳嗽,痰吐不利、肺虛久咳、痰中帶血等癥,在中醫(yī)臨床處方及中成藥中用量很大。但目前紫菀評價還停留在單一成分含量測定,急需一種全面評價藥材質(zhì)量的技術(shù)方法。本文所建立指紋圖譜是以3種已知化合物為標記峰,以14個共有峰作為特征峰的紫菀藥材指紋圖譜,其信息量多,方法簡便,重現(xiàn)性好,并所建立指紋譜與藥效密切相關(guān),使所建立的方法更行之有效。

    1 儀器與試藥

    1.1 藥材采集

    本研究收集了10個不同產(chǎn)地不同采收期的紫菀根及根莖藥材樣品(Aster tataricusL.f.)來源見表1-1(經(jīng)生藥學(xué)鑒定)。晾干,切成小段,置烘箱內(nèi),于40℃烘干8 h,取出,用粉碎機粉碎,過3號篩,置干燥器中,備用。本品應(yīng)符合中國藥典中藥材標準2000年版紫菀項下有關(guān)規(guī)定。

    1.2 儀器

    1100型高效液相色譜儀 (美國安捷倫公司 ),Shiseido C18色 譜 柱 (4.6mm×250mm,5μm),Agelient C18色 譜柱 (4.6mm×250mm,5μm), Diamonsil鉆 石 C18色 譜 柱(4.6mm×250mm,5μm);KQ-300DB型數(shù)控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司);RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);ATC2-5-U型超純水系統(tǒng)(重慶艾科浦公司);BP211D型電子天平 (德國Sartorius公司)。

    表1-1樣品產(chǎn)地

    4 2012.秋 吉林 9 2009.秋 山西5 2009.秋 遼寧 10 2009 秋 甘肅

    1.3 試藥

    乙腈、甲醇為色譜純(美國迪馬公司);冰乙酸為色譜純(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);水為自制超純水;其余試劑均為分析純,(沈陽化學(xué)試劑廠);

    1.4 參照物

    紫菀酮對照品(批號111581-200604)、槲皮素對照品(批號100081-200406)、山奈酚(批號110861-200406)、紫菀對照藥材(批號0956-9903)槲皮素由中國藥品生物制品檢定所提供。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件

    色譜柱:迪馬C18色譜柱 (4.6mm×250mm,5μm);流動相:0.02%磷酸溶液-乙腈;流速:1.0 ml/min;柱溫:30℃;檢測波長:200nm;進樣量:20 μl,梯度洗脫條件:0-10分鐘,90:10(水:乙腈);10-15分鐘,78:12(水:乙腈);15-30分鐘77:23(水:乙腈);30-43分鐘,65:35(水:乙腈);43-50分鐘,40:60(水:乙腈);50-60分鐘,35:65(水:乙腈)。

    2.2 供試品溶液的制備

    取紫菀藥材(過20目篩),精密稱取藥材2g,用100%甲醇超聲提取30min,濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。

    2.3 對照品的制備

    取紫菀酮、槲皮素、山奈酚對照品適量,精密稱定,加甲醇溶解并稀釋制成1mL中含1mg的溶液,即得。

    2.4 指紋圖譜的方法學(xué)考察

    2.4.1 精密度試驗 取編號為6的紫苑藥材,按2.2項下方法制備供試品溶液,精密吸取供試品溶液20 μl,連續(xù)進樣6次,按照2.1項下色譜條件進行測定,得到共有色譜峰面積及保留時間。結(jié)果峰面積及保留時間RSD均小于3%,說明此方法的精密度良好。

    2.4.2 重復(fù)性試驗 取編號為6的紫苑藥材,按2.2項下方法制備供試品溶液,平行制備6份,按照2.1項下色譜條件進行測定,測定主要色譜峰面積。結(jié)果峰面積及保留時間RSD均小于5%,表明方法重復(fù)性符合要求。

    2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取編號為6的紫苑藥材,按2.2項下方法制備供試品溶液,按照2.1項下色譜條件進行測定,分別在0、4、8、16、24h,測定指紋圖譜,測定主要色譜峰面積。峰面積及保留時間RSD均小于3%,表明供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。

    2.5 紫菀指紋圖譜的建立與分析

    2.5.1 指紋圖譜的采集 精密稱取10批紫苑藥材粉末各2.0g,分別按照2.2項方法制備供試品溶液,依據(jù)2.1項下色譜條件,進樣20μl,將各批次紫菀藥材的HPLC-UC指紋圖譜導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004版,設(shè)定匹配模板,生成對照指紋圖譜。結(jié)果見圖6-1。

    圖6-1不同產(chǎn)地紫菀藥材指紋圖譜的比較

    2.5.2 指紋圖譜共有峰的確定 用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版(國家藥典委員會)比較不同產(chǎn)地樣品的色譜圖,其中有14個色譜峰是共有的,確定為共有峰(圖5-1)。校正后的保留時間分別為8.725、10.034、21.336、23.474、25.73、26.147、29.225、30.568、34.145、42.516、52.339、58.046、61.598、63.421min。

    2.5.3 紫菀指紋圖譜相似度 按上述指紋圖譜條件,制備紫菀供試品溶液,進樣20ul,計算10批不同產(chǎn)地紫菀樣品的相似度,計算結(jié)果見表6-1。

    表6-1相似度軟件評價結(jié)果

    2.6 小結(jié)

    (1)采用相似度評價系統(tǒng)軟件,比較紫菀所有測定和記錄的色譜圖,我們分析了不同產(chǎn)地紫菀的HPLC指紋圖譜,目的在于更全面系統(tǒng)地評價紫菀的質(zhì)量。實驗過程中發(fā)現(xiàn),紫尤其是山東產(chǎn)地相似度最差。表明紫菀個別樣本之間相似性較差,說明不同的生長環(huán)境會對紫菀的質(zhì)量有一定的影響,仍然有一定產(chǎn)地藥材偏離整體水平較遠,在選擇藥材產(chǎn)地時應(yīng)予以注意,縮小藥材的產(chǎn)地范圍,無疑對保證紫菀的質(zhì)量一致具重要作用。

    (2)由于中藥成分復(fù)雜,在流動相及梯度選擇上,用單一流動難以實現(xiàn)各色譜峰的基線分離,而梯度洗脫可以使不同極性的各成分有效分離。實驗表明,冰醋酸加入到流動相中可以改善峰形,從而改善分離效果。通過大量的對比實驗表明,1%冰醋酸溶液-乙腈梯度洗脫分離效果良好,產(chǎn)生滿意的HPLC色譜圖,其它流動相系統(tǒng)組合均不能使其成分得到很好的分離。

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