• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    新疆哈薩克、漢族原發(fā)性高血壓與Cx37基因多態(tài)性相關(guān)性研究

    2015-11-24 08:43:30蘆碧含張文雯石文艷馬克濤李麗郭淑霞司軍強(qiáng)
    天津醫(yī)藥 2015年11期
    關(guān)鍵詞:漢族多態(tài)性基因型

    蘆碧含,張文雯,石文艷,馬克濤,李麗,郭淑霞,司軍強(qiáng)

    流行病學(xué)調(diào)查

    新疆哈薩克、漢族原發(fā)性高血壓與Cx37基因多態(tài)性相關(guān)性研究

    蘆碧含,張文雯,石文艷,馬克濤,李麗,郭淑霞,司軍強(qiáng)△

    目的探討新疆哈薩克族(哈族)、漢族人群縫隙連接蛋白(Cx)37基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓(EHT)的相關(guān)性。方法新疆地區(qū)EHT患者(EHT組)500例,哈、漢族各250例;同期健康體檢者(NT組)500例,其中哈、漢族各250例。比較2族EHT組與NT組人群年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、收縮壓(SBP)及舒張壓(DBP)等一般臨床特征情況。Cx37基因rs1630310、rs697372、rs705193的單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)基因多態(tài)性,對(duì)疾病人群進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢測(cè),計(jì)算各組哈族和漢族各位點(diǎn)基因型頻率及基因頻率差異。結(jié)果哈族、漢族EHT組與NT組BMI、SBP、DBP、載脂蛋白比值及同型半胱氨酸差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。EHT組與NT組rs705193位點(diǎn)基因型頻率和基因頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。哈族rs1630310位點(diǎn)基因型頻率及基因頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);哈族rs697372位點(diǎn)基因型頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),漢族2組rs1630310、rs697372位點(diǎn)基因型頻率及基因頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論Cx37基因多態(tài)性與新疆哈族EHT的發(fā)生有關(guān),rs1630310及rs697372位點(diǎn)多態(tài)性可能與哈族EHT的發(fā)生有關(guān)。

    連接蛋白類;基因型;多態(tài)性,單核苷酸;人種群;漢族;原發(fā)性高血壓;哈薩克族;縫隙連接蛋白37;rs1630310;rs697372;rs705193

    原發(fā)性高血壓(essential hypertertension,EHT)是遺傳易感性和環(huán)境因素共同作用的復(fù)雜疾病,受基因-基因、基因-環(huán)境間相互作用的影響[1]。血管壁之間的縫隙連接(gap junction,GJ)在血管舒縮反應(yīng)和血管張力調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用??p隙連接蛋白(connexin,Cx)類型及含量的改變能夠影響EHT的發(fā)?。?]。最近研究認(rèn)為,Cx37基因1019C/T多態(tài)性與EHT密切相關(guān)[3]。但關(guān)于Cx37基因rs1630310、rs697372及rs705193的3個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)的多態(tài)性與EHT關(guān)系的研究少見。新疆哈薩克族(哈族)是EHT的高發(fā)民族之一。本研究旨在探討新疆哈、漢族Cx37基因rs1630310、rs697372、rs705193多態(tài)性與EHT的關(guān)系,為EHT的預(yù)防、早期診斷及個(gè)性化治療提供參考。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料(1)研究對(duì)象。選取2012年10月—2013年12月新疆東灣縣、博爾通古鄉(xiāng)及喀什地區(qū)伽師縣EHT患者(EHT組)500例,哈族、漢族各250例;同期健康體檢者(NT組)500例,哈族、漢族各250例。納入標(biāo)準(zhǔn):①年齡30~75歲,在本地居住≥3代,非一、二級(jí)親屬,無(wú)異族通婚史。②符合2010年《中國(guó)高血壓防治指南》的標(biāo)準(zhǔn)。在未使用抗高血壓藥的情況下,經(jīng)非同日(一般間隔2周)3次測(cè)量取均值,收縮壓(SBP)≥140 mmHg(1 mm Hg=0.133 kPa)和(或)舒張壓(DBP)≤90 mmHg;NT組SBP<140 mmHg和DBP<90 mmHg。排除繼發(fā)性高血壓以及其他心血管疾病。所有研究對(duì)象均同意參加本研究并簽署知情同意書。(2)儀器與試劑。全血基因組DNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司);Veriti-384孔多任務(wù)梯度PCR儀(美國(guó)ABI公司);納升點(diǎn)樣儀、質(zhì)譜微陣列芯片、TOF-MS飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(美國(guó)SEQUENOM公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 一般資料比較2組均于石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科抽取外周靜脈全血4 mL,肝素鈉抗凝,分離血漿,全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)等常規(guī)血液生化指標(biāo)。比較哈、漢族EHT組與NT組生化指標(biāo)等一般臨床特征情況。

    1.2.2 靜脈血白細(xì)胞DNA提取抽取所有哈、漢族研究對(duì)象的外周靜脈血3 mL,置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中-80℃保存。使用DNA提取試劑盒提取DNA,用紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA純度和濃度,瓊脂糖凝膠電泳判定其質(zhì)量,置于-80℃冰箱保存。

    1.2.3 引物設(shè)計(jì)采用SEQUENOM公司Assay Designer 3.1軟件包設(shè)計(jì)擴(kuò)增、延伸引物,每個(gè)SNP對(duì)應(yīng)2條PCR擴(kuò)增引物和一條延伸引物,見表1。引物由北京天根生化科技有限公司合成。

    1.2.4 SNP等位基因分型將DNA樣本稀釋到10 μg/L,取1 μL DNA樣本,與0.95 μL水、0.5 μL 10×PCR緩沖液、0.4 μL MgCl2、0.1 μL dNTP、0.2 μL PCR酶、1.35 μL PCR引物混合,在384孔板常規(guī)擴(kuò)增待測(cè)片段。PCR反應(yīng)條件:94℃5 min;94℃30 s,55℃30 s,72℃30 s,40個(gè)循環(huán);72℃3 min。在PCR產(chǎn)物中加入10×SAP緩沖液0.17 μL,SAP酶0.3 μL,于37℃45 min,85℃5 min反應(yīng)后,根據(jù)SEQUENOM程序進(jìn)行單堿基延伸反應(yīng),加入5×iPlex緩沖液0.2 μL、水0.6 μL、iPlex延伸終止物0.2 μL、引物0.94 μL、iPlex酶0.041 μL混合。反應(yīng)條件:94℃30 s;94℃5 s,52℃5 s,80℃1 min,40個(gè)循環(huán);52℃5 s,80℃1 min,5個(gè)循環(huán);72℃延伸3 min。加入6 mg陽(yáng)離子交換樹脂脫鹽,混合后補(bǔ)充16 μL蒸餾水,用納升點(diǎn)樣儀將產(chǎn)物分點(diǎn)在質(zhì)譜微陣列芯片上。用Typer4.0軟件編輯相對(duì)應(yīng)的引物和樣本,并按順序讀取對(duì)應(yīng)的SNP分型數(shù)據(jù)。對(duì)NT人群進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢測(cè),計(jì)算各組哈族和漢族各位點(diǎn)基因型頻率及基因頻率差異。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用秩和檢驗(yàn),使用M(P25,P75)表示,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    Tab.1Cx37 gene SNP locus primers and extension primer sequences表1 Cx37基因SNP位點(diǎn)擴(kuò)增引物及延伸引物序列

    2 結(jié)果

    2.1 不同民族EHT組與NT組一般臨床特征的比較EHT組與NT組哈族、漢族人的體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、SBP、DBP、載脂蛋白比值及同型半胱氨酸水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2、3。

    2.2 SNP等位基因質(zhì)譜分型結(jié)果Cx37基因rs1630310、rs697372和rs705193位點(diǎn)都具有A和G 2種等位基因,AA、AG、GG 3種基因型,見圖1。

    2.3 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)哈族NT組Cx37基因rs1630310、rs705193、rs697372位點(diǎn)基因型頻率均符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)(χ2分別為1.349、0.003及0.001,均P>0.05)。漢族NT組Cx37基因rs1630310、rs705193、rs697372位點(diǎn)基因型頻率均符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)(χ2分別為0.001、0.131及0.380,均P>0.05),在遺傳學(xué)上有較好的群體代表性。

    Tab.2Comparison of clinical data between Kazak EHT and NT groups表2 哈族EHT與NT組一般資料比較[n=250,M(P25,P75)]

    Tab.3Comparison of clinical data between Han EHT and NT groups表3 漢族EHT與NT組一般資料比較[n=250,M(P25,P75)]

    Fig.1rs1630310 locus genotypes of different peak times of flight mass spectrometry figure圖1 rs1630310位點(diǎn)不同基因型的飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)峰值圖

    2.4 不同民族Cx37基因SNP基因型及等位基因頻率與EHT的關(guān)系哈族人群EHT組與NT組rs705193位點(diǎn)基因型頻率和基因頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);rs1630310位點(diǎn)基因型頻率及基因頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);rs697372位點(diǎn)基因型頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。漢族人群2組間3個(gè)位點(diǎn)基因型頻率及基因頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表4、5。

    Tab.4The relationship between genotype and allele frequency of Cx37 gene rs1630310,rs697372 and rs705193 with EHT in Kazak group表4 哈族Cx37基因rs1630310、rs697372和rs705193位點(diǎn)基因型及其等位基因頻率分布與EHT的關(guān)系

    3 討論

    EHT疾病受多重因素影響。生化檢測(cè)結(jié)果顯示,EHT組載脂蛋白比值、同型半胱氨酸含量高于NT組,此與張蕾等[4]研究相一致。哈族rs1630310

    基因位點(diǎn)的基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)意義,提示該基因頻率的改變可能與新疆哈族EHT的發(fā)病相關(guān);漢族EHT組Cx37基因rs1630310、rs697372、rs705193的SNP位點(diǎn)的基因頻率與NT組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,據(jù)此筆者推測(cè)rs1630310基因位點(diǎn)的基因分布在人群中的表達(dá)可能存在種族特異性。哈族2組rs697372位點(diǎn)的基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示哈族rs697372位點(diǎn)等位基因分布與EHT的發(fā)生可能存在一定的關(guān)聯(lián)。

    Tab.5The relationship between genotype and allele frequency of Cx37 gene rs1630310,rs697372 and rs705193 with EHT in Han group表5 漢族Cx37基因rs1630310、rs697372和rs705193位點(diǎn)基因型及其等位基因頻率分布與EHT的關(guān)系

    研究顯示,遺傳因素在疾病發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用[5]。Cx37基因位于1號(hào)染色體1p35.1位點(diǎn),由1個(gè)內(nèi)含子和2個(gè)外顯子構(gòu)成,序列長(zhǎng)度為2 750 bp[6]。Cx37是一種細(xì)胞間通訊相關(guān)的蛋白,并且是至今被認(rèn)定少數(shù)幾種與瓣膜[7]、冠心?。?]、動(dòng)脈粥樣硬化[9]密切相關(guān)的縫隙連接蛋白。鼠腎素依賴性高血壓模型結(jié)果研究顯示,鼠大動(dòng)脈平滑肌Cx37蛋白的表達(dá)有所增加,并且可參與上調(diào)eNOS的磷酸化水平,從而增加NO的釋放,最終影響內(nèi)皮以及平滑肌細(xì)胞血流動(dòng)力學(xué)[10]。但對(duì)于Cx37參與人類EHT發(fā)病機(jī)制尚不清楚,推斷可能原因有:(1)細(xì)胞間通過構(gòu)成Cx37/Cx37同型GJ,或Cx37與其他Cxs構(gòu)成異型GJ,進(jìn)而介導(dǎo)血管收縮物質(zhì),如血管緊張素、腎上腺素、Ca2+等運(yùn)輸,起到調(diào)節(jié)血管舒縮活動(dòng)作用。(2)Cx37分布于小動(dòng)脈阻力性血管,調(diào)節(jié)內(nèi)皮依賴性的血管緊張活動(dòng),從而影響EHT的發(fā)生發(fā)展[11]。本研究結(jié)果顯示,哈族人群EHT組Cx37基因rs1630310位點(diǎn)基因型以及基因頻率與NT組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明哈族人群EHT的發(fā)病與可能Cx37基因相關(guān),正常的血管緊張度和血壓的維持有賴于血管舒張和收縮反應(yīng)的平衡,一旦平衡被打破將對(duì)血壓及組織灌注產(chǎn)生影響。由于Cx37介導(dǎo)的細(xì)胞通訊參與血管舒縮運(yùn)動(dòng)的復(fù)雜調(diào)節(jié),而Cx基因位點(diǎn)基因頻率的不同可使GJ的結(jié)構(gòu)或功能發(fā)生不同程度的變化,從而導(dǎo)致血管緊張度平衡的破壞[12],最終導(dǎo)致高血壓的發(fā)生。

    綜上所述,種族、地區(qū)及環(huán)境等因素導(dǎo)致基因多態(tài)性,使EHT產(chǎn)生種族及地域差異性;Cx37蛋白基因與新疆哈族EHT的發(fā)生有關(guān),Cx37的結(jié)構(gòu)及功能的變化可能導(dǎo)致EHT的發(fā)生。但是,Cx37及多態(tài)性在EHT中的具體作用機(jī)制和影響有待進(jìn)一步深入研究。

    [1]Li NF,Zhou L,Wu WD,et al.The relationship between the variants in 5′upstream core promoter A(-6)G and A(-20)C of angiotensino?gen gene and essential hypertension in Kazakans of Xinjiang[J].Chi?nese Medical Genetics J,2004,21(1):23-28.[李南方,周玲,吳衛(wèi)東,等.血管緊張素原基因5’端核心啟動(dòng)子區(qū)(6)A-G和(-20)小C變異與哈薩克族原發(fā)性高血壓相關(guān)性分析[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,2004,21(1):23-28].

    [2]Kurltz A.Connexins.renin cell displacement and hypertension[J]. CurrOpin Pharmacol,2015,21:1-6.doi:10.1016/j.coph.2014.11.009.

    [3]Guo S,Chen W,Yang Y,et al.Association between 1019C/T polymor?phism in the connexin 37 gene and essential hypertension[J].Heat Lung Circ,2014,23(10):924-929.doi:10.1016/j.hlc.2014.02.016.

    [4]Zhang L,Cai WJ,Zhang LC,et al.Association between cystathio?nine β synthase gene T833C polymorphism and essential hyperten?sion in Xinjiang Kazakh population and Han population[J].Tianjin Med J,2015,43(1):8-11.[張蕾,蔡文娟,張麗翠,等.胱硫醚β合成酶基因T833C多態(tài)性與新疆哈、漢民族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究[J].天津醫(yī)藥,2015,43(1):8-11].doi:10.3969/j.issn.0253-9896.2015.01.004.

    [5]Zhang GL,Wang WF,Yang H,et al.Research of time of mass flight on the polymorphism of single nucleotide polymorphisms in IL-1α gene among population infected with A H1N1 influenza virus[J]. Practical Med J,2012,28(19):3204-3207.[張國(guó)良,汪文斐,楊輝,等.應(yīng)用飛行時(shí)間質(zhì)譜法研究甲型H1N1流感人群白細(xì)胞介素-1α基因單核苷酸多態(tài)性[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(19):3204-3207].

    [6]Zhang CL,Zheng L,Wang Q,et al.D istribution of Cx37 gene C1019Tpolymorphism in cantonese han nationality population of china[J].Laboratory Med J,2008,23(5):509-512.[張成祿,鄭磊,王前,等.廣東漢族人群Cx37基因C1019T多態(tài)性分布[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,23(5):509-512].

    [7]Munger SJ,Kanady JD,Simon AM.Absence of venous valves in mice lacking Cx37[J].Dev Biol,2013,373(2):338-348.doi: 10.1016/j.ydbio.2012.10.032.

    [8]Zhao L,Li Y,Wu D,et al.Cx37 C1019T polymorphism may contrib?

    ute to the pathyogenesis of coronary heart disease[J].Genet Test Mol Biomarker,2014,18(7):497-504.doi:10.1089/gtmb.2014.0034.

    [9]Guo S,Zhu J,Yang Z,et al.Reduction of connexin37 expression by RNA interference decreases atherosclerotic plaque formation[J].Mol Med Rep,2015,11(4):2664-2670.doi:10.3892/mmr.2014.3053.

    [10]Le Gal L,Alonso F,Mazzolai L,et al.Interplay between Cx40 and Ni?tric oxide signaling during hypertension[J].Hypertension,2015,65(4): 910-915.doi:10.1161/HYPERTENSIONAHA.114.04775.

    [11]Sandow SL,Tare M,Coleman HA,et al.Involvement of myoendotheli? al gap junctions in the actions of endothelium-derived hyperpolariz?ing factor[J].Circ Res,2002,90(10):1108-1113.

    [12]Wang EB,He F.The progress of gap junctions and Hypertension[J].Modern Medicine Journal of China,2010,12(9):122-124.[王恩幫,何芳.縫隙連接與高血壓的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2010,12(9):122-124].

    (2015-02-13收稿 2015-04-01修回)

    (本文編輯 陸榮展)

    Relationship between the Cx37 polymorphism of connexin gene and essential hypertension in Kazak and Han population in Xinjiang

    LU Bihan,ZHANG Wenwen,SHI Wenyan,MA Ketao,LI Li,GUO Shuxia,SI Junqiang△
    Department of Physiology,School of Medicine Shihezi University,Shihezi 832000,China△

    ObjectiveTo investigate the association of the Cx37 polymorphism of connexin gene with essential hyper?tension(EHT)in Xinjiang Han and Kazak population.MethodsIn Xinjiang region,500 EHT patients(EHT group)were in?cluded in this study including Kazak 250 cases and Han 250 cases.Five hundred healthy volunteers(NT)were used as NT group including Kazak 250 cases and Han 250 cases.The values of age,body mass index(BMI),systolic blood pressure(SBP)and diastolic blood pressure(DBP),and other general clinical features were compared between two groups.The poly?morphism of Cx37 gene rs1630310,rs697372 and rs705193 SNP were compared between EHT and NT groups in the two eth?nic groups.Hardy-Weinberg equilibrium was used to detect the representation,and differences of genotype frequencies and gene frequency were calculated in two groups of Kazak and Han groups.ResultsThere were significant differences in BMI,SBP,DBP,apolipoprotein ratios and homocysteine between EHT group and NT group in Kazak and Han groups(P<0.05). There were no significant differences in genotype frequencies and gene frequencies of rs705193 between EHT and NT groups(P>0.05).The differences of Kazak rs1630310 genotype and gene frequency were statistically significant(P<0.01). The frequency of Kazak rs697372 locus genotype was not significantly different(P>0.05),but the difference of gene frequen?cy was statistically significant(P<0.05).There were no significant differences in rs1630310 and rs697372 locus genotype and gene frequency in two groups of Han group.ConclusionCx37 gene polymorphism is associated with the occurrence of EHT in Xinjiang Kazak population,which may be related with the rs1630310 and rs697372 polymorphism.

    connexins;genotype;polymorphism,single nucleotide;ethnic groups;Han Nationlity;essential hyperterten?sion;Kazak;Cx37;rs1630310;rs697372;rs705193

    R544.11;R394.11

    A

    10.11958/j.issn.0253-9896.2015.11.028

    國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(2012CB26600);兵團(tuán)博士基金項(xiàng)目(2010JC16);兵團(tuán)醫(yī)藥專項(xiàng)(2012BA021,2010GG34)

    石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室,新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(郵編832000)

    蘆碧含(1988),女,研究生,主要從事血管生理學(xué)研究

    △通訊作者E-mail:sijunqiang@shzu.edu.cn

    猜你喜歡
    漢族多態(tài)性基因型
    國(guó)清榮
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進(jìn)展
    Study on Local Financial Supervision Right and Regulation Countermeasures
    改成漢族的滿族人
    馬鈴薯cpDNA/mtDNA多態(tài)性的多重PCR檢測(cè)
    GlobalFiler~? PCR擴(kuò)增試劑盒驗(yàn)證及其STR遺傳多態(tài)性
    國(guó)家視野中的河湟漢族
    西安地區(qū)育齡婦女MTHFRC677T基因型分布研究
    BAMBI基因敲除小鼠的繁育、基因型鑒定
    CYP3A4*1G基因多態(tài)性及功能的初步探討
    一本久久中文字幕| 色综合婷婷激情| 中文字幕av在线有码专区| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 此物有八面人人有两片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产乱人伦免费视频| 日韩人妻高清精品专区| 国产主播在线观看一区二区| 深夜精品福利| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 亚洲黑人精品在线| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲国产精品成人综合色| 女警被强在线播放| 久久久久精品国产欧美久久久| 窝窝影院91人妻| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲午夜理论影院| 九九在线视频观看精品| 久久国产乱子伦精品免费另类| 综合色av麻豆| 欧美色视频一区免费| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲av五月六月丁香网| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 真实男女啪啪啪动态图| 精品久久久久久,| 黄色成人免费大全| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 波野结衣二区三区在线 | 欧美中文综合在线视频| 国产v大片淫在线免费观看| 午夜福利免费观看在线| 免费av毛片视频| 精品国产三级普通话版| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 最好的美女福利视频网| 亚洲18禁久久av| 毛片女人毛片| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲电影在线观看av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产高清视频在线观看网站| 久久久久国内视频| 精品国内亚洲2022精品成人| h日本视频在线播放| 嫩草影视91久久| 成人特级av手机在线观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲av二区三区四区| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 日韩欧美免费精品| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 观看免费一级毛片| 国产精品久久久久久久电影 | 国产一区二区在线av高清观看| 99久久精品热视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 床上黄色一级片| 深夜精品福利| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品久久久人人做人人爽| www日本黄色视频网| 欧美日本亚洲视频在线播放| av国产免费在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 国产一区二区在线观看日韩 | 国产91精品成人一区二区三区| 成年女人看的毛片在线观看| 婷婷丁香在线五月| 国产成人福利小说| 欧美日韩精品网址| 日韩欧美在线二视频| 亚洲av美国av| 午夜两性在线视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产精品爽爽va在线观看网站| 麻豆一二三区av精品| 无限看片的www在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 男女视频在线观看网站免费| 久久九九热精品免费| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲第一电影网av| a级一级毛片免费在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美日韩精品网址| 身体一侧抽搐| 亚洲国产精品999在线| 亚洲美女视频黄频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久香蕉国产精品| 久久久色成人| 中出人妻视频一区二区| 国产单亲对白刺激| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美色视频一区免费| 欧美激情在线99| 免费观看的影片在线观看| 成人av在线播放网站| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美色视频一区免费| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 韩国av一区二区三区四区| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲专区中文字幕在线| 国产99白浆流出| 日韩欧美精品v在线| 一进一出好大好爽视频| 亚洲国产欧美人成| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 麻豆一二三区av精品| 激情在线观看视频在线高清| 日本免费一区二区三区高清不卡| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品电影一区二区在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 精品久久久久久,| av天堂在线播放| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产亚洲欧美在线一区二区| av在线天堂中文字幕| 嫩草影院入口| 久久久色成人| 在线免费观看不下载黄p国产 | 久久精品国产亚洲av涩爱 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 成人三级黄色视频| 久久久国产成人精品二区| 两个人视频免费观看高清| 最新中文字幕久久久久| 成人av一区二区三区在线看| 级片在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久草成人影院| 国产99白浆流出| 有码 亚洲区| 99久久精品一区二区三区| 成人18禁在线播放| 亚洲熟妇熟女久久| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美黄色淫秽网站| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品久久久久久久电影 | 中文资源天堂在线| 欧美乱妇无乱码| 国产一区在线观看成人免费| 中文字幕av在线有码专区| 男人和女人高潮做爰伦理| av欧美777| 日本熟妇午夜| 午夜激情福利司机影院| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 成人国产综合亚洲| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 一夜夜www| 国产极品精品免费视频能看的| www.熟女人妻精品国产| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久精品人妻少妇| 脱女人内裤的视频| 久久久色成人| 99精品欧美一区二区三区四区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产成人啪精品午夜网站| 精品免费久久久久久久清纯| 国产野战对白在线观看| 欧美日韩精品网址| 日韩欧美在线二视频| 久久久久久久精品吃奶| 观看美女的网站| 色在线成人网| 国产伦一二天堂av在线观看| 三级毛片av免费| 欧美性猛交黑人性爽| 91字幕亚洲| 中文字幕高清在线视频| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日韩欧美 国产精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲av免费高清在线观看| 午夜免费观看网址| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲第一电影网av| a在线观看视频网站| 97超视频在线观看视频| 国内精品美女久久久久久| 亚洲在线自拍视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 88av欧美| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产激情偷乱视频一区二区| 最近在线观看免费完整版| 哪里可以看免费的av片| 此物有八面人人有两片| 人人妻人人看人人澡| 夜夜夜夜夜久久久久| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲国产欧美网| 成人鲁丝片一二三区免费| 一个人免费在线观看电影| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲电影在线观看av| 欧美最新免费一区二区三区 | 日本黄色片子视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 999久久久精品免费观看国产| 热99在线观看视频| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产伦在线观看视频一区| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产精华一区二区三区| 亚洲精品在线美女| 一区福利在线观看| 俺也久久电影网| 欧美大码av| 久久精品人妻少妇| 天天添夜夜摸| 黄色片一级片一级黄色片| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲片人在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 男女午夜视频在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美不卡视频在线免费观看| 十八禁网站免费在线| 国产97色在线日韩免费| 日韩国内少妇激情av| 国产精品av视频在线免费观看| 国模一区二区三区四区视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日本三级黄在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 精品乱码久久久久久99久播| 91在线精品国自产拍蜜月 | 香蕉久久夜色| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 69av精品久久久久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品乱码一区二三区的特点| 一区福利在线观看| 午夜福利在线观看吧| 欧美一级毛片孕妇| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 久久精品国产综合久久久| 亚洲一区二区三区不卡视频| 99国产精品一区二区三区| 少妇丰满av| 国产伦人伦偷精品视频| 桃色一区二区三区在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲 国产 在线| 国产精品一区二区三区四区久久| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美激情在线99| 亚洲在线观看片| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 香蕉久久夜色| 欧美黑人欧美精品刺激| 色尼玛亚洲综合影院| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩高清综合在线| 国产亚洲精品一区二区www| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日韩精品青青久久久久久| 欧美在线一区亚洲| 国产高清三级在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产美女午夜福利| 精品一区二区三区人妻视频| 制服丝袜大香蕉在线| 中文字幕高清在线视频| 99久久精品热视频| 亚洲avbb在线观看| 亚洲精品一区av在线观看| av女优亚洲男人天堂| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| a级毛片a级免费在线| 欧美极品一区二区三区四区| 国产三级在线视频| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美激情久久久久久爽电影| 一二三四社区在线视频社区8| 精品久久久久久久久久久久久| 精品电影一区二区在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产亚洲精品久久久com| 香蕉久久夜色| 国产精品,欧美在线| 99久久精品国产亚洲精品| 国产老妇女一区| 综合色av麻豆| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 一进一出抽搐gif免费好疼| 观看美女的网站| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品久久久久久,| 日本一二三区视频观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 五月伊人婷婷丁香| av女优亚洲男人天堂| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产av不卡久久| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 免费高清视频大片| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 淫秽高清视频在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| www.色视频.com| 校园春色视频在线观看| 1000部很黄的大片| 久久久色成人| 激情在线观看视频在线高清| 岛国在线免费视频观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲熟妇熟女久久| 国产av麻豆久久久久久久| 一区福利在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 国产精品影院久久| 给我免费播放毛片高清在线观看| 一区二区三区激情视频| aaaaa片日本免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲人成网站在线播| 国产高清视频在线播放一区| 母亲3免费完整高清在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 99久久精品国产亚洲精品| 精品不卡国产一区二区三区| 免费看十八禁软件| 成人国产综合亚洲| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 床上黄色一级片| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲 国产 在线| 无人区码免费观看不卡| 又紧又爽又黄一区二区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产成人系列免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久亚洲精品不卡| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | av片东京热男人的天堂| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲最大成人中文| 九九热线精品视视频播放| 亚洲天堂国产精品一区在线| 精华霜和精华液先用哪个| bbb黄色大片| 国产精品亚洲一级av第二区| 免费观看人在逋| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 国产高清视频在线观看网站| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 一区二区三区高清视频在线| 免费观看的影片在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 级片在线观看| 一a级毛片在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 麻豆成人av在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 嫁个100分男人电影在线观看| 特级一级黄色大片| 成年女人永久免费观看视频| 天堂影院成人在线观看| 草草在线视频免费看| 欧美黄色淫秽网站| 91久久精品电影网| 亚洲精华国产精华精| 国产综合懂色| 日本 av在线| 一级黄片播放器| 国产免费一级a男人的天堂| 母亲3免费完整高清在线观看| 日本一本二区三区精品| eeuss影院久久| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| av在线蜜桃| 国模一区二区三区四区视频| 国内精品一区二区在线观看| or卡值多少钱| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 97超视频在线观看视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 在线视频色国产色| 国产成人av教育| 亚洲电影在线观看av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美午夜高清在线| 午夜激情福利司机影院| 小说图片视频综合网站| 精品欧美国产一区二区三| 在线观看66精品国产| 69av精品久久久久久| 国产视频一区二区在线看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 少妇的逼水好多| 天堂动漫精品| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 啦啦啦免费观看视频1| 免费在线观看成人毛片| 在线观看av片永久免费下载| 麻豆国产av国片精品| 久久香蕉精品热| 日韩av在线大香蕉| 99国产精品一区二区三区| 国产精品精品国产色婷婷| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 免费电影在线观看免费观看| 99久久成人亚洲精品观看| 国产不卡一卡二| 最新在线观看一区二区三区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲 国产 在线| 亚洲国产色片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲最大成人手机在线| 欧美乱色亚洲激情| 中文字幕熟女人妻在线| 成人欧美大片| 国产精品av视频在线免费观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产真人三级小视频在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 好男人电影高清在线观看| 成人av在线播放网站| 成年女人看的毛片在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲,欧美精品.| 老司机午夜福利在线观看视频| 好男人电影高清在线观看| 国产精品久久视频播放| 又黄又爽又免费观看的视频| 一夜夜www| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲国产欧美人成| 丁香六月欧美| 久久久久久大精品| 色综合婷婷激情| 国产淫片久久久久久久久 | 神马国产精品三级电影在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 国产成年人精品一区二区| 在线播放无遮挡| 老鸭窝网址在线观看| 悠悠久久av| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av二区三区四区| 在线观看一区二区三区| 亚洲专区中文字幕在线| 制服丝袜大香蕉在线| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲专区中文字幕在线| 91在线精品国自产拍蜜月 | 嫩草影院入口| 窝窝影院91人妻| 91av网一区二区| a在线观看视频网站| 麻豆一二三区av精品| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 午夜精品在线福利| 国内精品一区二区在线观看| 床上黄色一级片| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产乱人伦免费视频| 深爱激情五月婷婷| xxx96com| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品乱码一区二三区的特点| 在线免费观看的www视频| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲不卡免费看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 中文字幕av在线有码专区| 俄罗斯特黄特色一大片| 天天一区二区日本电影三级| 日韩亚洲欧美综合| 成人av一区二区三区在线看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 色老头精品视频在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品久久久久久久电影 | av专区在线播放| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日韩大尺度精品在线看网址| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 丁香六月欧美| 久久香蕉国产精品| 免费人成在线观看视频色| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 真人做人爱边吃奶动态| 听说在线观看完整版免费高清| 国产午夜精品论理片| 男女之事视频高清在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 伊人久久精品亚洲午夜| 69人妻影院| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久久久国内视频| 亚洲精品在线美女| 一级作爱视频免费观看| 成人国产一区最新在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 99热这里只有精品一区| 色综合亚洲欧美另类图片| 午夜精品一区二区三区免费看| 有码 亚洲区| 一区二区三区国产精品乱码| 叶爱在线成人免费视频播放| www日本在线高清视频| 天天躁日日操中文字幕| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久色成人| 国产乱人视频| 日本黄色片子视频| 久久精品国产自在天天线| 成人18禁在线播放| 久久久久久久久久黄片| 免费人成在线观看视频色| or卡值多少钱| 少妇的逼水好多| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲18禁久久av| 看黄色毛片网站| 午夜福利免费观看在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 90打野战视频偷拍视频| 在线观看66精品国产| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲欧美日韩东京热| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲电影在线观看av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 香蕉av资源在线| 一本久久中文字幕| 国产亚洲精品一区二区www| 色吧在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 午夜免费成人在线视频| 国产真实乱freesex| 欧美三级亚洲精品| 久久亚洲真实| 中文字幕高清在线视频| 国产成人福利小说| 九色国产91popny在线| 此物有八面人人有两片| 女警被强在线播放| 免费在线观看影片大全网站| 青草久久国产| 成年女人看的毛片在线观看| 俺也久久电影网| 日本熟妇午夜| 亚洲内射少妇av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 深夜精品福利| 国产色爽女视频免费观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 色尼玛亚洲综合影院| 一区福利在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜福利18|