胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑減輕小鼠體質(zhì)量的作用機(jī)制研究

于倩，李春君，丁敏，邢云芝，于德民

胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑減輕小鼠體質(zhì)量的作用機(jī)制研究

于倩，李春君，丁敏，邢云芝，于德民△

目的探討胰高血糖素樣多肽-1受體激動(dòng)劑（GLP-1Ra）減輕小鼠體質(zhì)量的作用機(jī)制。方法正常對(duì)照（N）組8只小鼠以普通飼料喂養(yǎng)，高脂飲食（HF）組32只以高脂飼料喂養(yǎng)，造模成功后的小鼠分為單純HF組（HF）組、處死前寒冷刺激（CS）組和200、400 μg/kg GLP-1 Ra干預(yù)［Lira（200）、Lira（400）］組，喂養(yǎng)8周。觀察各組小鼠的體質(zhì)量、血糖及三酰苷油（TG）的水平變化。HE染色觀察小鼠不同部位白色脂肪（WAT）形態(tài)學(xué)改變；免疫組織熒光染色、Real-time PCR方法觀察利拉魯肽對(duì)棕色脂肪（BAT）特異因子UCP-1表達(dá)的影響；Western blot方法觀察UCP-1表達(dá)的調(diào)節(jié)因子PPAR-γ共激活因子1α（PGC-1α）表達(dá)的影響。結(jié)果Lira（200）組和Lira（400）組平均體質(zhì)量低于HF組（P＜0.05）。HF組較N組血糖和TG水平均升高，Lira（200）組和Lira（400）組血糖和TG水平較HF組降低（P＜0.05）。Lira（200）組及Lira（400）組腎周與腹股溝皮下脂肪組織部分轉(zhuǎn)變?yōu)楹形⑿≈蔚淖厣珮又炯?xì)胞，UCP-1蛋白和基因、PGC-1α蛋白表達(dá)水平較HF組均有不同程度的增加，Lira（400）組均強(qiáng)于Lira（200）組（P＜0.05）。結(jié)論GLP-1Ra能明顯減輕小鼠體質(zhì)量，其機(jī)制可能與增加UCP-1表達(dá)，促進(jìn)白色脂肪發(fā)生棕色樣變有關(guān)。

糖尿病，2型；超重；疾病模型，動(dòng)物；胰高血糖素樣多肽-1受體激動(dòng)劑；胰高血糖素樣肽-1；解偶聯(lián)蛋白-1；棕色脂肪樣變；利拉魯肽

研究顯示，在世界范圍內(nèi)肥胖和糖尿病的患病率逐年增加，2型糖尿?。═2DM）患者中有80%合并肥胖［1］。傳統(tǒng)降血糖藥物如磺脲類、噻唑烷二酮類（TZDs）及胰島素多存在可致體質(zhì)量增加等不良反應(yīng)。胰高血糖素樣肽（GLP）-1受體激動(dòng)劑（GLP-1Ra）——利拉魯肽已經(jīng)被證實(shí)在降血糖的同時(shí)，也能有效地減輕體質(zhì)量［2-3］。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，加用利拉魯肽可使肥胖T2DM患者的體質(zhì)量平均減少5.62 kg，腰圍平均減少5.7 cm［4］，但其具體機(jī)制尚未明確。另有研究顯示，應(yīng)用利拉魯肽治療4周的T2DM患者的24 h基礎(chǔ)代謝率明顯增加，體質(zhì)量降低，能量消耗增加［5］。動(dòng)物模型研究顯示，GLP-1干預(yù)能使小鼠棕色脂肪組織（BAT）產(chǎn)熱增加［6］；給大鼠靜脈注射GLP-1可使其體溫增加0.3℃［7］。本研究旨在探討GLP-1Ra減輕小鼠體質(zhì)量的作用機(jī)制，以期為臨床研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料4周齡的清潔級(jí)雄性C57BL/6小鼠40只，體質(zhì)量（19.07±1.30）g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司。高脂飼料配方參考文獻(xiàn)［8］，購(gòu)自北京華阜康實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司。血糖試紙及血糖儀購(gòu)自上海羅氏制藥有限公司。利拉魯肽購(gòu)自諾和諾德中國(guó)制藥有限公司。微量注射器購(gòu)自上海醫(yī)用制品有限公司?？筆PAR-γ共激活因子1α（PGC-1α）抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。熒光素（FITC）標(biāo)記的二抗購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及SYBR Green熒光定量PCR試劑盒分別購(gòu)自美國(guó)Thermo和pro?mega公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立及分組小鼠由專人飼養(yǎng)，室溫為20～22℃，濕度40%～70%，晝夜比12 h∶12 h。全部動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照（N）組8只和高脂飲食（HF）組32只。N組以普通飼料喂養(yǎng)，HF組以高脂飼料喂養(yǎng)，所有小鼠在造模期間均自由攝食和飲水，飼料和水每日更換1次，第10周末，高脂喂養(yǎng)組C57BL/6小鼠按體質(zhì)量篩選肥胖小鼠。肥胖模型標(biāo)準(zhǔn)為：平均體質(zhì)量大于同周齡N組平均體質(zhì)量+1.96倍標(biāo)準(zhǔn)差且超過(guò)N組平均體質(zhì)量的20%即為肥胖。本實(shí)驗(yàn)成功誘導(dǎo)肥胖小鼠26只（81.25%），按照隨機(jī)數(shù)字表法分為單純HF組（HF）組，處死前4℃72 h寒冷刺激（CS）組，利拉魯肽200 μg/kg干預(yù)組［Lira（200）組］和400 μg/kg干預(yù)組［Lira（400）組］。重新分組后，HF組、CS組、Lira（200）組和Lira（400）組小鼠繼續(xù)以高脂飼料喂養(yǎng)8周。

1.2.2 血糖和血脂水平測(cè)定每周監(jiān)測(cè)小鼠空腹體質(zhì)量和血糖水平1次，方法為禁食12 h后尾尖取血，應(yīng)用血糖儀測(cè)定，持續(xù)8周。在第8周末將小鼠麻醉取血，血標(biāo)本3 000 r/ min離心5 min，取血清，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定小鼠血漿中總?cè)８视停═G）水平。

1.2.3 組織標(biāo)本采集于干預(yù)第8周末稱量體質(zhì)量、測(cè)定血糖后，行內(nèi)眥取血，頸椎脫臼法處死小鼠。血標(biāo)本3500 r/min離心5 min，取血清，放入-80℃冰箱保存。再迅速解剖，分別留取肩胛間棕色脂肪組織、腹股溝皮下脂肪組織及腎周脂肪組織和附睪脂肪組織4處不同部位的脂肪組織，稱質(zhì)量，每種脂肪組織再分為兩部分，其中一部分迅速放入液氮凍存，用于Real-time PCR、Western blot等檢測(cè)；另一部分固定于10%福爾馬林中，用于形態(tài)學(xué)及病理學(xué)觀察，并同時(shí)行免疫組織熒光檢測(cè)。

1.2.4 脂肪組織免疫熒光分析UCP-1的表達(dá)載玻片經(jīng)純丙酮1∶150稀釋的多聚賴氨酸處理，切片厚度為4 μm。10%福爾馬林固定，二甲苯透明，5℃浸蠟30 min 2次，包埋組織塊；4 μm的組織切片附于經(jīng)多聚賴氨酸附膜的載玻片上，60℃過(guò)夜；切片分別浸于二甲苯脫蠟，100%、95%、90%、85%、75%體積分?jǐn)?shù)的乙醇脫水，枸櫞酸緩沖液抗原修復(fù)，微波自然冷卻；滴加5%山羊血清封閉液，滴加一抗UCP-1（1∶100），4℃過(guò)夜；滴加FITC熒光標(biāo)記山羊抗兔IgG二抗（l∶20），37℃溫箱孵育1 h（避光），DAPI染液進(jìn)行細(xì)胞核熒光染色，抗熒光衰減封片劑封片；（×100）顯微鏡下拍照。

1.2.5 Real-time PCR方法檢測(cè)mRNA表達(dá)水平（1）脂肪組織總RNA提取。用Trizol按步驟提取大鼠腎皮質(zhì)總RNA，紫外分光光度計(jì)測(cè)定示樣品光密度（OD）260/OD280比值在1.8～2.0為純度較高，計(jì)算濃度，采用1%的瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA完整性。（2）cDNA的合成。以RNA為模板，oligo（dT）為引物，在逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV的催化下合成cDNA。（3）引物合成。應(yīng)用primer6.0軟件設(shè)計(jì)引物，用NCBI blast評(píng)價(jià)，再由上海生工合成。引物GAPDH：上游5′-TCAACAG?CAACTCCCAC-3′，下游5′-GGTCCAGGGTTTCTTACTC-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物150 bp；UCP-1：上游5′-ACTGCCACACCTCCAGT?CATT-3′，下游5′-CAAGGTAACGCCAGGAAT-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物200 bp。（4）Real-time PCR。SYBRGreenⅠ與雙鏈DNA結(jié)合后發(fā)出熒光，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中的SYBRGreenⅠ的熒光強(qiáng)度監(jiān)測(cè)RCR產(chǎn)物的擴(kuò)增量。反應(yīng)體系包括12.5 μL SYBR Premix Ex Taq，上、下游引物各0.5 μL，cDNA模板2 μL，ddH2O 9.5 μL，總體系為25 μL。PCR擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性30 s；95℃變性5 s，60℃退火且延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)；最后生成熔解曲線。目的基因與內(nèi)參基因擴(kuò)增閾值的差值，即△CT值，根據(jù)公式2-ΔΔCt計(jì)算出樣品初始模板量進(jìn)行分析。

1.2.6 Western blot檢測(cè)脂肪組織蛋白表達(dá)脂肪組織蛋白裂解，SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，免疫反應(yīng)，化學(xué)發(fā)光、顯影，進(jìn)行圖像分析。各部位脂肪組織稱質(zhì)量，液氮、研缽粉碎組織塊，加入RIPA緩沖液（50 g組織加入1 μL RIPA），PMSF（10 mmol/L），利用Polytron進(jìn)一步勻漿（15 000 r/min，共1 min）維持4℃，冰上孵育30min，移入離心管4℃，約20000g（15000 r/min）離心15 min，上清液為細(xì)胞裂解液后分裝，-20℃保存，進(jìn)行Bradford比色法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，取相同質(zhì)量的細(xì)胞裂解液（體積×蛋白質(zhì)濃度），并加等體積的2×電泳加樣緩沖液，沸水浴中5 min，上樣，電泳（濃縮膠20 mA，分離膠35 mA），電轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)膜（100 mA 40 min），麗春紅染膜，考馬斯亮藍(lán)染膠，Western blot試劑盒顯色。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠體質(zhì)量的比較Lira（200）組和Lira（400）組平均體質(zhì)量低于HF組（P＜0.05）。Lira（200）組和Lira（400）組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

Tab.1Comparison of general indexes and biochemical parameters between five groups of mice表1 各組體質(zhì)量、血糖及TG比較

Tab.1Comparison of general indexes and biochemical parameters between five groups of mice表1 各組體質(zhì)量、血糖及TG比較

*P＜0.05；a與N組比較，b與HF組比較，c與CS組比較，d與Lira（200）組比較，P＜0.05

體質(zhì)量（g）2 6 . 5 2 ± 3 . 3 2 3 3 . 6 7 ± 4 . 2 6a3 3 . 1 2 ± 3 . 8 7a2 9 . 7 4 ± 3 . 5 7abc2 8 . 2 5 ± 3 . 2 4abc8 . 5 3*組別N組H F組C S組L i r a（2 0 0）組L i r a（4 0 0）組F n 8 6 6 7 7血糖（m m o l / L）5 . 9 ± 1 . 0 2 1 0 . 5 ± 1 . 7 3a1 0 . 2 ± 1 . 5 6a7 . 5 6 ± 1 . 3 3abc6 . 8 8 ± 1 . 4 9abc6 4 . 5 0*T G（m m o l / L）1 . 0 2 ± 0 . 1 4 1 . 2 8 ± 0 . 1 3a1 . 2 2 ± 0 . 1 8a1 . 1 6 ± 0 . 1 8ab1 . 0 8 ± 0 . 1 6bcd8 . 1 0*

2.2 各組小鼠血糖和TG水平的比較HF組較N組血糖和TG水平均升高，Lira（200）組和Lira（400）組血糖和TG水平較HF組降低（P＜0.05），CS組與HF組血糖和TG水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

2.3 腎周脂肪組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)N組小鼠腎周白色脂肪細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞內(nèi)含一大脂滴，細(xì)胞核位于一側(cè)。HF組小鼠脂肪細(xì)胞數(shù)目增多，體積增大。CS組腎周脂肪細(xì)胞變小，大脂滴數(shù)目減少，多被小脂滴取代，出現(xiàn)了類似棕色脂肪的形態(tài)。Lira（200）組及Lira（400）組小鼠腎周脂肪細(xì)胞小而密，胞質(zhì)內(nèi)可見許多微小脂滴，利拉魯肽干預(yù)后使腎周白色脂肪組織出現(xiàn)了棕色樣脂肪細(xì)胞樣的形態(tài)學(xué)特征，見圖1。

2.4 腹股溝皮下脂肪組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)N組小鼠腹股溝皮下白色脂肪細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞內(nèi)含一大脂滴，細(xì)胞核位于一側(cè)。HF組小鼠脂肪細(xì)胞體積明顯增大。CS組小鼠皮下脂肪細(xì)胞體積變小，大脂滴內(nèi)出現(xiàn)許多小脂滴，表現(xiàn)出類似棕色脂肪的形態(tài)。Lira（200）組及Lira（400）組小鼠皮下脂肪細(xì)胞體積較HF組減小，胞質(zhì)內(nèi)也出現(xiàn)小脂滴，利拉魯肽干預(yù)后使腹股溝皮下白色脂肪組織也出現(xiàn)了棕色樣脂肪細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征，見圖2。

2.5 各組腎周及腹股溝皮下脂肪中UCP-1表達(dá)的免疫熒光檢測(cè)結(jié)果HF組腹股溝皮下脂肪中UCP-1陽(yáng)性表達(dá)與N組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，HF組、CS組、Lira（200）組和Lira（400）組較N組腎周脂肪組織和腹股溝皮下脂肪組織中UCP-1蛋白熒光顯色均增加；與HF組比較，CS組、Lira（200）和Lira（400）組的兩部位脂肪中UCP-1陽(yáng)性表達(dá)均明顯增加，其中CS組最為明顯，Lira（400）強(qiáng)于Lira（200）組（P＜0.05），見圖3，表2。

Tab.2Results of UCP1 detected by immunohistochemistry in peri-renal WAT and inguinal subcutaneous WAT表2 各組腎周和腹股溝皮下脂肪UCP-1免疫熒光結(jié)果（IOD值，)

Tab.2Results of UCP1 detected by immunohistochemistry in peri-renal WAT and inguinal subcutaneous WAT表2 各組腎周和腹股溝皮下脂肪UCP-1免疫熒光結(jié)果（IOD值，)

*P＜0.05；a與N組比較，b與HF組比較，c與CS組比較，d與Lira（200）組比較，P＜0.05

組別N組H F組C S組L i r a（2 0 0）組L i r a（4 0 0）組F n 8 6 6 7 7腎周（× 1 03）1 2 . 8 5 ± 2 . 9 9 2 4 . 7 3 ± 5 . 4 6a6 4 . 7 5 ± 7 . 5 4ab4 2 . 2 3 ± 5 . 8 6abc4 8 . 2 8 ± 7 . 5 3abcd7 . 9 1*腹股溝（× 1 03）1 6 . 6 4 ± 3 . 2 8 1 9 . 5 8 ± 3 . 9 5 5 8 . 5 2 ± 7 . 9 1ab3 2 . 2 6 ± 5 . 1 5abc4 5 . 7 9 ± 5 . 9 2abcd1 2 . 6 3*

2.6 各組腎周及腹股溝皮下脂肪中UCP-1 mRNA表達(dá)水平比較HF組腹股溝皮下脂肪中UCP-1mRNA表達(dá)與N組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，HF組、CS組、Lira（200）組和Lira（400）組較N組腎周脂肪組織和腹股溝皮下脂肪組織中UCP-1mRNA表達(dá)均增加；與HF組比較，CS組、Lira（200）和Lira（400）組的兩部位脂肪中UCP-1mRNA表達(dá)均明顯增加，其中CS組最為明顯，Lira（400）強(qiáng)于Lira（200）組（P＜0.01），見圖4。

Fig.4The expression of UCP1 mRNA in peri-renal WAT and inguinal subcutaneous WAT圖4 各干預(yù)組小鼠腎周和皮下脂肪中UCP-1 mRNA表達(dá)

2.7 GLP-1Ra對(duì)PGC-1α表達(dá)的影響HF組腹股溝皮下脂肪中PGC-1α表達(dá)水平與N組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，HF組、CS組、Lira（200）組和Lira（400）組較N組在兩部位均增高（P＜0.05）；與HF組比較，CS組、Lira（200）和Lira（400）組的兩部位脂肪中PGC-1α表達(dá)均明顯增加，其中CS組最為明顯，Lira（400）組較Lira（200）組表達(dá)水平升高更為明顯（P＜0.05），見圖5。

Fig.5The expression of PGC-1a protein in peri-renal WAT and inguinal subcutaneous WAT圖5 各組小鼠腎周及腹股溝皮下脂肪中PGC-1α蛋白表達(dá)水平

3 討論

GLP-1及其受體激動(dòng)劑都具有葡萄糖依賴的促胰島素分泌和抑制胰高血糖素分泌的作用，能有效降低血糖，同時(shí)還具有延緩胃排空、增加飽腹感及抑制食欲的作用，因此，能兼顧降低體質(zhì)量［9］。臨床研究證實(shí)，GLP-1能抑制健康受試者餐后血漿TG和游離脂肪酸（FFA）水平的增加［10］，也可降低T2DM患者血漿極低密度脂蛋白（VLDL）和FFA水平［11］。本研究結(jié)果顯示，Lira（200）及Lira（400）組小鼠的體質(zhì)量、血糖及TG水平明顯低于HF組，提示GLP-1Ra干預(yù)能引起血糖、體質(zhì)量及TG水平明顯降低，而且隨著GLP-1Ra干預(yù)劑量的增加，其水平有進(jìn)一步下降的趨勢(shì)。處死小鼠后對(duì)其各部位脂肪稱量亦發(fā)現(xiàn)，GLP-1Ra干預(yù)后，小鼠各部位脂肪組織均較HF組明顯減少，這也進(jìn)一步證實(shí)了GLP-1Ra能有效控制血糖且兼顧減輕體質(zhì)量，其中以減少脂肪組織含量更為顯著，同時(shí)還能改善血脂代謝紊亂。

脂肪組織主要分為棕色脂肪（BAT）、白色脂肪（WAT）以及在WAT中可能出現(xiàn)具有BAT形態(tài)及功能特征的米色脂肪［12-13］。WAT主要存在于皮下脂肪以及腹腔中的內(nèi)臟，僅含少量線粒體，一般無(wú)線粒體UCP-1表達(dá)，主要作用為貯存脂肪，含量增多可引起超重、肥胖、胰島素抵抗及2型糖尿??；與之相反，BAT細(xì)胞富含線粒體，含大量在線粒體內(nèi)膜特異表達(dá)的UCP-1。UCP-1是一種質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，驅(qū)使質(zhì)子從線粒體內(nèi)膜漏出，進(jìn)而改變電化學(xué)梯度，解偶聯(lián)ATP的同時(shí)增加其氧化磷酸化，從而將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為熱能釋放，因此，其具有對(duì)抗低溫和寒冷，以及抵抗肥胖、抵抗糖尿病的天然作用［9］。本研究病理染色結(jié)果顯示，腎周及腹股溝皮下脂肪在寒冷刺激及GLP-1Ra干預(yù)后變化明顯，脂肪細(xì)胞明顯減少，脂滴增多，部分大脂滴轉(zhuǎn)變?yōu)槲⑿≈?，形態(tài)發(fā)生顯著改變。

本研究的分子生物學(xué)結(jié)果與病理染色結(jié)果趨勢(shì)相一致，Lira（200）組和Lira（400）組較HF組腎周脂肪組織及腹股溝皮下脂肪組織中UCP-1蛋白熒光顯色均增加。腎周脂肪及腹股溝皮下脂肪和睪周脂肪組織相同，均來(lái)源于白色脂肪組織，但能在寒冷刺激及GLP-1Ra的干預(yù)下出現(xiàn)棕色樣脂肪細(xì)胞的形態(tài)特征，而且免疫熒光組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示這2組棕色脂肪特異標(biāo)志蛋白UCP-1表達(dá)較N組和HF組均明顯升高，表明腎周及腹股溝皮下WAT可能具有BAT樣生物學(xué)作用的前體細(xì)胞，可在寒冷刺激及GLP-1Ra干預(yù)下出現(xiàn)棕色樣變，并增加BAT特異性蛋白UCP-1的表達(dá)水平。

目前尚未發(fā)現(xiàn)某種單一的具有組織特異性的調(diào)節(jié)因子能夠主導(dǎo)完整的BAT形成過(guò)程。但是隨著研究的深入，已發(fā)現(xiàn)一些轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子對(duì)BAT細(xì)胞的形成起著關(guān)鍵作用。其中，PGC1-α作為一種轉(zhuǎn)錄共激活因子在BAT中高度表達(dá)，而且PGC1-α在WAT中表達(dá)時(shí)，能激活適應(yīng)性產(chǎn)熱相關(guān)基因程序［1］。本研究發(fā)現(xiàn)，Lira（200）及Lira（400）組PGC-1α蛋白表達(dá)水平較mRNA升高更為明顯，且在腎周和腹股溝皮下WAT中，隨著GLP-1Ra干預(yù)劑量的增加，PGC-1α蛋白表達(dá)水平水平有進(jìn)一步增加的趨勢(shì)，Li?ra（400）組比Lira（200）組升高更為顯，提示GLP-1Ra可能干預(yù)誘導(dǎo)了腹股溝皮下和腎周的WAT表達(dá)PGC-1α，進(jìn)而促進(jìn)了明顯的BAT樣改變。

綜上所述，GLP-1Ra引起體質(zhì)量降低的可能機(jī)制為：PGC-1α的表達(dá)激活促進(jìn)了UCP-1的表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而誘導(dǎo)白色脂肪發(fā)生棕色樣變，從而起到降低體質(zhì)量的作用。

（圖1～3見插頁(yè)）

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（2015-09-16收稿 2015-10-30修回）

（本文編輯 陸榮展）

Mechanism of glucagon-like peptide 1 receptor agonist induced weight loss of mice

YU Qian，LI Chunjun，DING Min，XING Yunzhi，YU Demin△
Metabolic Diseases Hospital&Tianjin Institute of Endocrinology，Tianjin Medical University/Ministry of Health Key Laboratory of Hormones and Development，Tianjin 300070，China△

ObjectiveTo investigate the possible mechanisms of glucagon-like peptide 1 receptor agonists（GLP-1Ra）induced weight loss.MethodsHigh fat diet induced obese c57BL/6 mice were divided into normal control group（N，n=8），high fat feeding group（HF，n=32）and GLP-1Ra group treated with GLP-1Ra（liraglutide 200 μg/（kg·d）or 400 μg/（kg·d）for 8 weeks）.Changes of body weight，blood glucose and three acyl glycosides（TG）levels were observed in three groups.HE staining was used to observe the morphological changes.Immunofluorescence staining and real-time PCR were used to mea?sure the expression of UCP-1.Furthermore，the expression of PGC-1α in protein level was observed to explore the possible mechanism of GLP-1Ra induced browning in white fat（WAT）.ResultsAfter 8-week liraglutide（Lira）administration，the body weights were significantly reduced in obese mice（P＜0.05）.The levels of blood glucose and TG were significantly high?er in HF group than those in N group，which reduced significantly in Lira（200 μg·kg-1）and Lira（400 μg·kg-1）administra?tion groups（P＜0.05）.HE staining showed adipocytes in perirenal and inguinal subcutaneous adipose tissue partly acquired brown-like morphological characteristics.The expression levels of UCP-1 protein and mRNA and PGC-1α protein were ele?vated in adipse tissues，which increased more in Lira（400）than those in Lira（200，P＜0.05）.ConclusionGLP-1Ra can induce weight loss through white fat browning by activation of UCP-1.

diabetes mellitus，type 2；overweight；disease models，animal；GLP-1Ra；glucagon-like peptide-1；uncou?pling protein-1；adipocyte browning；Liraglutide

R587.1

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.11.003

國(guó)家青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81300663/H0713）；天津市衛(wèi)生局科技基金（2013KZ098）

天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院，衛(wèi)生部激素與發(fā)育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（郵編300070）

于倩（1986），博士，主要從事2型糖尿病發(fā)病機(jī)制研究

△通訊作者E-mail:yudemintij@126.com