利奈唑胺含量測定方法的選擇

蔣萍萍，張華玲

（杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)生物工程研究所，浙江杭州310011）

分析測試

利奈唑胺含量測定方法的選擇

蔣萍萍，張華玲

（杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)生物工程研究所，浙江杭州310011）

［目的］建立測定利奈唑胺的高效液相色譜方法。［方法］采用YMC ODS-AM（150×4.6 mm粒徑5 μm）為色譜柱；流動相：0.1%三氟乙酸的水溶液：0.1%三氟乙酸的乙腈溶液=90：10梯度洗脫，柱溫：25℃，流速：1 mL/min，檢測波長：254 nm。［結(jié)果］本方法專屬性強(qiáng)，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測定利奈唑胺的含量。

高效液相色譜法；利奈唑胺；YMC ODS-AM；含量測定

利奈唑胺是一種人工合成的唑烷酮類抗生素，為細(xì)菌蛋白質(zhì)合成抑制劑。于2000年獲得美國FDA批準(zhǔn)，用于治療革蘭陽性（G+）球菌引起的感染。隨后在澳大利亞、加拿大、英、法、韓、香港、日本等19個國家和地區(qū)上市；2006年9月在中國取得進(jìn)口藥品注冊證；于2007年9月在中國上市。本品獨(dú)特的作用機(jī)制，與其它類型的抗菌藥無交叉耐藥性，同時具有口服生物利用度高、藥動學(xué)性質(zhì)好及毒性小的特點(diǎn)，在治療革蘭陽性耐藥菌引起的嚴(yán)重感染方面顯示出較大的潛力。

利奈唑胺化學(xué)結(jié)構(gòu)式

本文優(yōu)化了在YMC ODS-AM反向色譜柱上分離利奈唑胺的質(zhì)量檢測條件。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜輸液泵，1260DAD型紫外檢測器。

已腈（色譜純ACS）、三氟乙酸、三乙胺（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）、磷酸二氫鉀（分析純，湖州胡試化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 色譜條件

色譜柱：YMC ODS-AM 150×4.6 mm 5 μm色譜柱；流動相：V（0.1%三氟乙酸的水溶液）：V（0.1%三氟乙酸的乙腈溶液）=90：10梯度洗脫，流速為1 mL/min，檢測波長：254 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10 μL。

1.3 不同因素對利奈唑胺檢測結(jié)果的影響

1.3.1 色譜柱的選擇

參照進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)進(jìn)行色譜柱的篩選，150×4.6 mm柱子流速為1.0 mL/min，250×4.6 mm柱子流速相應(yīng)調(diào)整為1.67 mL/min，結(jié)果見表1。色譜圖見附圖1。

表1 色譜柱的選擇

圖1 不同色譜柱選擇的HPLC圖

從以上試驗可見，使用YMC ODS-AM 150× 4.6 mm 5 μm色譜柱，主峰峰型最好，與雜質(zhì)分離度最高，理論塔板數(shù)最高。故選擇YMC ODS-AM 150×4.6 mm 5μm色譜柱。

1.3.2 流動相的選擇

1.3.2.1 緩沖鹽的選擇

在初期選用的YMC ODS-AM 150×4.6 mm 5 μm的基礎(chǔ)上，取粗品適量，用乙腈-水（1：9）稀釋制成濃度約0.5 mg/mL的供試品，再加入專屬性項下酸、堿、氧化降解后的樣品適量，作為供試品，對流動相進(jìn)行選擇。結(jié)果見表2。

表2 緩沖鹽的選擇

圖2 不同緩沖鹽選擇的HPLC圖

從以上試驗可見：流動相2對利奈唑胺的一種降解產(chǎn)物未起到保留作用，流動相3使降解產(chǎn)物的峰型變差，流動相4空白干擾嚴(yán)重。流動相1對各峰都有較為合適的保留能力，峰型較好，基線波動小，更利于雜質(zhì)的檢出。所以最終參考進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)，選擇流動相1，色譜圖見附圖2。

1.3.2.2 梯度時間選擇

在其余色譜條件均一致的情況下，取粗品適量，用乙腈-水（1：9）稀釋制成濃度約0.5 mg/mL的供試品，調(diào)試不同梯度洗脫速度，方法1參考進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)（測定儀器延遲體積為1.1 mL），方法2、3、4為自調(diào)方法，結(jié)果見表3。色譜圖見附圖3。

表3 梯度時間的選擇

圖3 不同梯度時間選擇的HPLC圖

從以上結(jié)果看出，方法4整個梯度時間較長，且各雜質(zhì)間相鄰太近，故首先排除。方法1、2、3無論是對出峰時間、峰型、分離度、雜質(zhì)檢出個數(shù)都未見明顯差別，說明梯度程序的略微變化對雜質(zhì)的檢出沒有明顯區(qū)別，故無需采用測量延時體積的方法，排除方法1。方法2因為在35 min從梯度洗脫變?yōu)榈榷认疵?，所以可能比方?產(chǎn)生更多的空白峰，且方法3的洗脫能力比方法2更強(qiáng)，更有利于雜質(zhì)的檢測。故方法3為優(yōu)選方法。因為在相對保留時間1.73的雜質(zhì)之后就未見有其他雜質(zhì)檢出，且90%的乙腈2洗脫能力已經(jīng)足夠強(qiáng)，所以最終梯度程序調(diào)整為：

時間A%B% 0 9010 208020 401090

1.3.2.3 溶劑的選擇

分別選擇水、乙腈、水-乙腈（1：1）、水-乙腈（9：1）作為溶劑，按有關(guān)物質(zhì)項下方法進(jìn)樣，結(jié)果見表4。色譜圖見附圖4。

表4 溶劑的選擇

圖4 不同溶劑選擇的HPLC圖

結(jié)果表明，用水作為溶劑時利奈唑胺溶解稍慢，乙腈作為溶劑時溶劑效應(yīng)明顯，水-乙腈（1：1）作為溶劑時2 min處有溶劑峰，而水-乙腈（9：1）作為溶劑時以上問題都不存在，峰型較好，故選擇作為溶劑。

1.3.2.4 柱溫的選擇

分別以柱溫T=20℃、25℃、30℃、35℃、40℃試驗，結(jié)果見表5，結(jié)果表明溫度越高對稱因子反而越低，且高溫對色譜柱壽命有影響，故選擇柱溫為25℃。

表5 柱溫的選擇

1.3.2.5 流速的選擇

在其他相同的條件下，分別以流速V=0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 mL/min試驗，結(jié)果見表6，結(jié)果表明：適當(dāng)增加流速可加快出峰時間，但柱效有所降低，故仍選擇常規(guī)流速1.0 mL/min作為測定流速。

表6 流速的選擇

2 結(jié)果與討論

綜上所述，最佳的色譜條件為：色譜柱：YMC ODS-AM 150×4.6mm 5μm色譜柱；流動相：V（0.1%三氟乙酸的水溶液）：V（0.1%三氟乙酸的乙腈溶液）=90：10梯度洗脫，流速為1 mL/min，檢測波長：254 nm；柱溫：25℃。

3 方法評價

在最終優(yōu)化的色譜條件下，對同一樣品重復(fù)測定5次。取利奈唑胺對照品適量，用乙腈-水（1：9）溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的對照品溶液兩份，各取10 μL注入液相色譜儀，一份重復(fù)進(jìn)樣3次，一份重復(fù)進(jìn)樣2次，五針樣品主峰峰面積與濃度的比值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%，理論板數(shù)按利奈唑胺峰計算應(yīng)不低于5000。

精密稱取利奈唑胺對照品適量，加乙腈-水（1：9）溶解并稀釋制成每1 mL中含0.5 mg溶液，精密量取上述溶液用乙腈-水（1：9）稀釋制成0.17、0.5、2.5、5.0、7.5、10.0 μg/mL的溶液，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為x軸，峰面積為y軸，進(jìn)行線性回歸，見表6和圖6。

圖6 利奈唑胺的線性

表6 線性回歸結(jié)果

結(jié)果表明，利奈唑胺在0.17～10.06 μg/mL濃度范圍內(nèi)（相對濃度0.03%～2.0%）與峰面積線性良好。

在本方法條件下測定利奈唑胺化學(xué)純度，可得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)，并可在生產(chǎn)過程中對其進(jìn)行精確的質(zhì)量控制。

［1］毛桂福.HPLC法測定水楊酸苯酚洗劑中苯酚和水楊酸的含量［J］.藥學(xué)實踐雜志，2005，（4）：226-227.

［2］劉曉云，公方美.HPLC法測定阿奇霉素分散片的含量［J］.齊魯藥事，2005，（11）：668-669.

［3］許妍，周國平，羅躍華，等.HPLC法測定高效風(fēng)油精中鹽酸達(dá)克羅寧含量［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，（2）：15-16.

Selectivity of Linezolid's Determination Method

JIANG Ping-ping,ZHANG Hua-ling
（Hangzhou Huadong Medicine Group Pharmaceutical Research Institute Co.，Ltd.，Hangzhou，Zhejiang 310011，China）

［Objective］To establish a HPLC method for the determination of linezolid.［Methods］The separation was performed on YMC ODS-AM（150×4.6 mm，5 μm）column，the mobile phase consisted of water-acetonitrile（10∶90）with the flow rate of 1 mL/min，the detection wavelength was at 254 nm and column temperature was 25℃.［Results］The method is simple，quick and specific.

HPLC;linezolid;YMC ODS-AM;determination

1006-4184（2015）7-0045-06

2015-03-17

蔣萍萍（1986-），女，浙江紹興人，助理工程師，理學(xué)學(xué)士，本科，從事藥物分析工作。E-mail:sxjiangpingping@163.com。