姜君
(宜昌市第三人民醫(yī)院,湖北 宜昌 443000)
結(jié)核病主要免疫保護(hù)機(jī)制是細(xì)胞免疫,在結(jié)核病中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)能夠抑制T 細(xì)胞的反應(yīng),也能使巨噬細(xì)胞失活,可能是結(jié)核病免疫發(fā)病中的一個(gè)關(guān)鍵因素[1]。為此,我們對(duì)726例患者TGF-β1濃度水平進(jìn)行測(cè)定,探討其濃度水平與肺結(jié)核活動(dòng)性的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)告如下。
1.1 臨床資料 選擇2007年5月至2014年3月在我院門(mén)診或住院診療的患者共726例,分為活動(dòng)性肺結(jié)核組(活動(dòng)組)、非活動(dòng)性肺結(jié)核組(非活動(dòng)組)、肺炎組及健康志愿者組,以健康志愿者為對(duì)照組。其中男379例,女347例,年齡18~77歲,平均45.5歲。
1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 活動(dòng)性肺結(jié)核組235例,按照肺部病灶范圍分為≥4 個(gè)肺野組92例,<4 個(gè)肺野組143例,均符合活動(dòng)性結(jié)核病診斷標(biāo)準(zhǔn),診斷標(biāo)準(zhǔn)以中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核分會(huì)制定的《肺結(jié)核診斷和治療指南》為依據(jù)。非活動(dòng)肺結(jié)核組為175例,入選標(biāo)準(zhǔn):(1)X 線檢查肺部?jī)H有鈣化、纖維化條索影或硬結(jié)灶,痰結(jié)核菌檢查陰性;(2)痰結(jié)核細(xì)菌學(xué)陽(yáng)性患者完成規(guī)定的療程后連續(xù)3次涂片結(jié)果陰性,其中2次在完成治療時(shí);(3)痰結(jié)核菌檢查陰性患者抗結(jié)核治療>6個(gè)月,終端治療>2個(gè)月后,X 線檢查肺部結(jié)核病灶病變較上次無(wú)增多。肺炎組153例,均符合肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。健康志愿者163例為對(duì)照組。所有病例均履行了告知義務(wù),本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有研究對(duì)象均簽署了知情同意書(shū)。
1.3 方法(1)標(biāo)本采集:入選病例1周內(nèi)抽取外周靜脈血做細(xì)胞因子測(cè)定。外周血2mL 收集在非抗凝無(wú)菌試管,以每分鐘3 000 轉(zhuǎn)離心10 min后,留取血清儲(chǔ)存在-30 ℃冰箱,等待測(cè)定。(2)細(xì)胞因子檢測(cè):γ-干擾素(IFN-γ)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)檢測(cè)試劑盒均由上海西唐生物科技有限公司提供,采用ELISA 試劑盒測(cè)定,檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行。TGF-β1檢測(cè)試劑盒采用美國(guó)RD Biosciences公司生產(chǎn)的試劑盒,測(cè)定血清標(biāo)本中人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1濃度水平。用純化的人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1,再與HRP標(biāo)記的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的含量。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料用(±s)表示,兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),計(jì)算ROC曲線下面積(AUC),采用SPSS 16.0軟件處理,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 組間血清細(xì)胞因子濃度水平比較 活動(dòng)組血清中TGF-β1濃度水平顯著高于非活動(dòng)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)?;顒?dòng)組IFN-γ 和TNF-α濃度水平分別低于非活動(dòng)組(P<0.01)。活動(dòng)組血清中TGF-β1濃度水平與肺炎組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),IFN-γ和TNF-α濃度水平分別低于肺炎組(P<0.01)?;顒?dòng)組血清中TGF-β1濃度水平與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),IFN-γ組和TNF-α組濃組度組水組平組分組別組低組于組肺組炎組(P<0.01)。對(duì)照組、肺炎組及非活動(dòng)組血清TGFβ1、IFN-γ及TNF-α濃度水平組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。
表1 各組血清TGF-β1、IFN-γ及TNF-α濃度水平比較(±s)
表1 各組血清TGF-β1、IFN-γ及TNF-α濃度水平比較(±s)
注:與對(duì)照組比較,*均P<0.01;與肺炎組比較,#均P<0.05;與非活動(dòng)組比較,▲P<0.01。
2.2 活動(dòng)組內(nèi)細(xì)胞因子濃度水平比較 病灶范圍≥4個(gè)肺野組TGF-β1水平明顯高于病灶<4個(gè)肺野組(P<0.05);病灶范圍≥4個(gè)肺野組TNF-α和IFN-γ水平與病灶<4個(gè)肺野組分別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。
表2 活動(dòng)組中不同病灶范圍TGF-β1、IFN-γ及TNF-α濃度水平比較(±s)
表2 活動(dòng)組中不同病灶范圍TGF-β1、IFN-γ及TNF-α濃度水平比較(±s)
2.3 活動(dòng)組與非活動(dòng)組細(xì)胞因子的相關(guān)性 活動(dòng)組中TGF-β1與TNF-α、IFN-γ水平有顯著負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.815和-0.823,均P<0.05)。非活動(dòng)組血清中TGF-β1 與TNF-α和IFN-γ水平有顯著負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.762和-0.889,均P<0.05)。兩組中TNF-α與IFN-γ水平比較無(wú)明顯相關(guān)性(r值分別為0.229和0.102,均P>0.05)。
2.4 TGF-β1 濃度水平與肺結(jié)核活動(dòng)性關(guān)系分析采用ROC 計(jì)算AUC 0.873,篩選血清TGF-β1濃度判定肺結(jié)核活動(dòng)性的敏感度及特異度交點(diǎn)最大值(Q 值)為0.86,結(jié)果組顯組示TGF-β1組濃組度組值34.21ng/mL組作為最佳截值,敏感性及特異性分別為85.4%和91.2%,TGF-β1濃度水平與活動(dòng)性的判定呈高度相關(guān)一致性。
肺結(jié)核病由于其痰菌陽(yáng)性率低、臨床癥狀及X影像學(xué)缺乏特異性等特點(diǎn),肺結(jié)核活動(dòng)性的判定常是困擾臨床的一個(gè)難題。結(jié)核病主要是由T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),TGF-β1 作為一種免疫抑制因子具有抑制T 淋巴細(xì)胞的增殖及其功能,TGFβ1可能通過(guò)Fas/FasL系統(tǒng)增強(qiáng)結(jié)核病T 細(xì)胞的凋亡,并調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞的凋亡[3],TGF-β1可以促進(jìn)結(jié)核分支桿菌的胞內(nèi)生長(zhǎng),因此認(rèn)為T(mén)GF-β1 可影響著結(jié)核病的活動(dòng)性變化。與之相反,IFN-γ和TNF-α能夠適度增加人單核巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分支桿菌活性,這些細(xì)胞因子在結(jié)核患者體內(nèi)能成功地抑制結(jié)核分支桿菌復(fù)制。本文通過(guò)對(duì)4組血清TGF-β1、TNF-α和IFN-γ濃度水平分別進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示血清TGF-β1水平活動(dòng)組明顯高于非活動(dòng)組、肺炎組及對(duì)照組,而活動(dòng)組的TNF-α和IFN-γ水平低于其他組,可能與活動(dòng)性肺結(jié)核患者體內(nèi)過(guò)量表達(dá)的TGF-β1 抑制T 細(xì)胞免疫應(yīng)答有關(guān),與TGF-β1下調(diào)了IFN-γ、TNF-α的產(chǎn)量和活性有關(guān)。國(guó)外也有研究[4-5]報(bào)道其在結(jié)核病患者血清中表達(dá)升高,升高的TGF-β1 與結(jié)核病活動(dòng)有密切關(guān)系。本文還發(fā)現(xiàn)肺部病灶范圍≥4 個(gè)肺野組的血清TGF-β1水平明顯高于肺部病灶<4個(gè)肺野組,分析可能為過(guò)量的TGF-β1不僅可以引起結(jié)核分支桿菌感染的慢性過(guò)程,而且可以導(dǎo)致廣泛組織破壞、空洞形成和纖維化的結(jié)核病病變特征,TGF-β1 作為結(jié)核病免疫功能損害的指標(biāo),其水平越高,免疫損害越重。本組結(jié)果還顯示肺結(jié)核活動(dòng)性與TGF-β1濃度水平間存在正相關(guān),可能與結(jié)核分支桿菌及其有效成分可以刺激單核巨噬細(xì)胞過(guò)量表達(dá)TGF-β1 有關(guān),血清TGF-β1濃度水平與活動(dòng)性的判定呈高度相關(guān)一致性,對(duì)肺結(jié)核活動(dòng)性的分析判斷有一定的價(jià)值,且實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單,值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。
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