乙型肝炎患者血清HBV cccDNA與肝組織HBV cccDNA、血清HBV DNA的關(guān)系及意義

張房英 吳啟文 賴小麗 熊曉英 姚葉萍 黃莉美

·臨床與基礎(chǔ)研究·

乙型肝炎患者血清HBV cccDNA與肝組織HBV cccDNA、血清HBV DNA的關(guān)系及意義

張房英 吳啟文 賴小麗 熊曉英 姚葉萍 黃莉美

目的 探討乙型肝炎患者血清HBV共價閉合環(huán)狀DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）與肝組織HBV cccDNA、血清HBV DNA的關(guān)系及意義。方法 從本院2011年9月～2013年9月收治的乙型肝炎患者中隨機(jī)選擇69例進(jìn)行研究。結(jié)果 15例肝組織及其血清標(biāo)本中，HBV cccDNA陽性檢出率方面，血清標(biāo)本顯著低于肝組織，經(jīng)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，（χ2=7.13，P＜0.05）。肝組織HBV cccDNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之間均呈正相關(guān)關(guān)系，（r=0.62，r=0.72，均P＜0.05）。隨著HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷貝數(shù)呈現(xiàn)出不斷增大的情況，二者水平之間呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.82，P＜0.05）。69例血清標(biāo)本中，HBV DNA≥105拷貝/m L的高水平組的血清HBV cccDNA陽性檢出率達(dá)到96.6%，顯著高于HBV DNA水平較低組（103拷貝/m L≤HBV DNA＜1×105拷貝/m L）經(jīng)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，（χ2=6.27，P＜0.05）。69例乙型肝炎患者血清標(biāo)本中，隨著病程的不斷進(jìn)展，HBV cccDNA檢出率呈現(xiàn)出不斷上升的情況，其中肝癌組的檢出率最高，不同病程之間的陽性檢出率比較均有統(tǒng)計學(xué)意義，（均P＜0.05）。結(jié)論 乙型肝炎血清HBV cccDNA可間接反映出患者肝組織內(nèi)的HBV cccDNA情況，與HBV DNA之間具有顯著的相關(guān)性，且與病程有關(guān)。

乙型肝炎；HBV cccDNA；HBV DNA；血清；肝組織

乙型肝炎患者在感染HBV之后，在其肝細(xì)胞核內(nèi)可以檢測到一種特殊的病毒DNA，即cccDNA［1］。臨床研究發(fā)現(xiàn)，乙型肝炎患者血清和肝組織HBV cccDNA含量之間具有一定的相關(guān)性［2］。研究中，筆者即對乙型肝炎患者血清HBV cccDNA與肝組織HBV ccc DNA、血清HBV DNA的關(guān)系及意義進(jìn)行分析，現(xiàn)報道如下。

資料和方法

一、一般資料

從本院2011年9月～2013年9月收治的乙型肝炎患者中隨機(jī)選擇69例進(jìn)行研究，其中男39例，女30例，年齡37～81歲，平均年齡（49.1±2.6）歲。所有患者均經(jīng)臨床診斷，確診為乙型肝炎。研究獲得醫(yī)學(xué)倫理學(xué)相關(guān)部門同意，所有患者均了解研究相關(guān)情況，并簽署知情同意書，自愿參與研究。

二、方法

抽取所有患者的清晨空腹靜脈血送檢，對患者進(jìn)行肝組織活檢，并妥善保存標(biāo)本。利用FQ-PCR技術(shù)對患者的肝組織及血清標(biāo)本進(jìn)行HBV cccDNA以及血清HBV DNA進(jìn)行定量PCR檢測。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

研究所得數(shù)據(jù)均輸入Excel表格，建數(shù)據(jù)庫，并使用SPSS公司推出的SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，研究所得計數(shù)資料均進(jìn)行χ2檢驗，計量資料均進(jìn)行t檢驗，并以進(jìn)行表示。并對P 值進(jìn)行檢測，如果可得P小于0.05，則視為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、肝組織和血清HBV cccDNA檢出率比較

15例肝組織及其血清標(biāo)本中，HBV cccDNA陽性檢出率方面，血清標(biāo)本顯著低于肝組織，經(jīng)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，（χ2=7.13，P＜0.05）。具體結(jié)果如表1所示。

表1 肝組織和血清HBV cccDNA檢出率分析

二、肝組織HBV ccc DNA水平與血清HBVcccDNA、HBV DNA及HBs Ag的相關(guān)分析

經(jīng)統(tǒng)計，肝組織HBV ccc DNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之間均呈正相關(guān)關(guān)系，（r=0.62，r=0.72，均P＜0.05）。

三、血清HBV DNA水平與HBV cccDNA水平的相關(guān)性分析

對血清HBV cccDNA與HBV DNA分布的散點圖（見圖1）進(jìn)行分析可以發(fā)現(xiàn)，隨著HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷貝數(shù)呈現(xiàn)出不斷增大的情況，二者水平之間呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.82，P＜0.05）。

圖1 血清HBV cccDNA與HBV DNA分布的散點圖

四、不同HBV DNA水平組血清HBV cccDNA檢出率比較

經(jīng)統(tǒng)計，在69例血清標(biāo)本中，HBV DNA≥105拷貝/m L的高水平組的血清HBV cccDNA陽性檢出率達(dá)到96.6%，顯著高于HBV DNA水平較低組（103拷貝/m L≤HBV DNA＜1×105拷貝/m L）經(jīng)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，（χ2=6.27，P＜0.05）。具體結(jié)果如表2所示。

表2 不同HBV DNA水平組血清HBV cccDNA檢出率分析

五、肝患者不同病程進(jìn)展間血清HBV cccDNA檢出率比較

69例乙型肝炎患者血清標(biāo)本中，隨著病程的不斷進(jìn)展，HBV cccDNA檢出率呈現(xiàn)出不斷上升的情況，其中肝癌組的檢出率最高，不同病程之間的陽性檢出率比較均有統(tǒng)計學(xué)意義，（均P＜0.05）。具體結(jié)果如表3所示。

表3 肝患者不同病程進(jìn)展間血清HBV cccDNA檢出率分析

討 論

在乙型肝炎HBV病毒的整個生活周期中，cccDNA的形成發(fā)揮著十分重要的作用。乙型肝炎治療只有清除了細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA，才能徹底消除乙型肝炎患者病毒攜帶狀態(tài)［3，4］。目前通過抽血化驗檢測出外周血單個核細(xì)胞內(nèi)和肝組織的HBVcccDNA，這樣可以避免和克服以往乙型肝炎病毒指標(biāo)檢測的局限性，cccDNA檢測是目前診斷乙型肝炎病情和判斷療效最有潛力和價值的指標(biāo)［5，6］。

臨床可以用來檢測是否感染HBV，HBV cccDNA的形成會對乙型肝炎病毒的復(fù)制、感染等產(chǎn)生較大的影響［7］。如果肝細(xì)胞中還存在HBV cccDNA，那么HBV病毒便不會停止復(fù)制。因此，臨床可以通過肝組織活檢的方式來對乙型肝炎患者肝組織中的HBV cccDNA水平的變化情況進(jìn)行檢測［8］。從而更好的了解患者體內(nèi)HBV感染、復(fù)制情況，更好的評估患者的病情和治療效果等。本研究結(jié)果顯示，15例肝組織及其血清標(biāo)本中，HBV cccDNA陽性檢出率方面，血清標(biāo)本顯著低于肝組織。即提示，較之血清HBV ccc DNA檢測，肝組織HBV cccDNA檢測可以更加準(zhǔn)確的評價HBV的感染情況［9］。本研究結(jié)果還顯示，肝組織HBV cccDNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之間均呈正相關(guān)。隨著HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷貝數(shù)呈現(xiàn)出不斷增大的情況，二者水平之間呈正相關(guān)關(guān)系［10］。即提示，血清HBV cccDNA可以間接地反映患者肝組織內(nèi)HBV cccDNA的情況。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，69例血清標(biāo)本中，HBV DNA≥105拷貝/m L的高水平組的血清HBV cccDNA陽性檢出率達(dá)到96.6%，顯著高于HBV DNA水平較低組（103拷貝/m L≤HBV DNA＜1× 105拷貝/m L）經(jīng)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。即說明，高水平復(fù)制狀態(tài)離不開高濃度模板，而高水平HBV DNA會伴隨高濃度HBV cccDNA［11］。同時，本研究69例乙型肝炎患者血清標(biāo)本中，隨著病程的不斷進(jìn)展，HBV cccDNA檢出率呈現(xiàn)出不斷上升的情況，其中肝癌組的檢出率最高，不同病程之間的陽性檢出率比較均有統(tǒng)計學(xué)意義。即提示，HBV cccDNA可能會與患者的病情活動以及肝細(xì)胞破壞等伴隨出現(xiàn)。對于未出現(xiàn)癥狀的HBV攜帶者，如果病情長期處于穩(wěn)定狀態(tài)，肝細(xì)胞未出現(xiàn)明顯損傷，則較難檢測到HBV cccDNA。如果患者的病情出現(xiàn)惡化，肝細(xì)胞內(nèi)容物會大量釋放，肝細(xì)胞核中的HBV cccDNA便會大量釋放到血液中，較易臨床監(jiān)測［12］。

綜上所述，乙型肝炎血清HBV cccDNA可間接反映患者肝組織內(nèi)的HBV cccDNA情況，與HBV DNA之間具有顯著的相關(guān)性，且與病程有關(guān)。

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2 劉志紅，江建寧，李華東，等.核苷（酸）類似物對乙肝患者肝細(xì)胞內(nèi)HBV cccDNA和tDNA及血清HBs Ag的影響研究.中國全科醫(yī)學(xué)，2012，15：865-867.

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4 李忠斌，任曉強(qiáng)，劉妍，等.血清病毒檢出核苷（酸）類似物耐藥突變的慢性乙肝患者PBMCs中HBV cccDNA基因突變特點分析.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2012，37：556-560.

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8 許春海，李兆申，代俊英，等.單核細(xì)胞乙型肝炎病毒ccc DNA檢測方法及應(yīng)用價值.中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，2011，25：307-309.

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11 王美容，邱寧，盧實春，等.肝組織中HBV cccDNA熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測法的建立.中華流行病學(xué)雜志，2011，32：504-509.

12 盛慧萍，楊巖，賴雅芳，等.慢性乙型肝炎患者肝組織中HBV ccc DNA定量與病情的相關(guān)性分析.山東醫(yī)藥，2010，50：12-14.

2014-08-26）

（本文編輯：馮珉）

511300 廣東，增城市人民醫(yī)院感染科（張房英，吳啟文，賴小麗，熊曉英，姚葉萍），內(nèi)三科（黃莉美）