中國南海海綿Haliclona sp.中化學成分的研究

許嬌嬌，靳德軍，王佳，祁菁，趙川，喬衛(wèi)，段宏泉，，唐生安

（1.天津醫(yī)科大學藥學院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點實驗室，天津 300070；2.海南醫(yī)學院藥學院，?？冢?71199；3.天津醫(yī)科大學基礎醫(yī)學研究中心，天津 300070）

中國南海海綿Haliclona sp.中化學成分的研究

許嬌嬌1，靳德軍2，王佳1，祁菁1，趙川3，喬衛(wèi)1，段宏泉1，3，唐生安1

（1.天津醫(yī)科大學藥學院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點實驗室，天津 300070；2.海南醫(yī)學院藥學院，?？?，571199；3.天津醫(yī)科大學基礎醫(yī)學研究中心，天津 300070）

目的：對采自中國廣西潿洲島海域海綿Haliclona sp.的化學成分進行分離和結(jié)構(gòu)鑒定。方法：采用硅膠柱色譜、制備薄層色譜、凝膠柱色譜、半制備HPLC、重結(jié)晶等方法分離純化，通過波譜方法分析，并對照文獻來鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果:從海綿Haliclona sp.中分離的5個化合物，依次鑒定為孕甾烯醇酮（1），24-亞甲基膽甾醇（2），膽甾醇（3），苯丙酸（4），鄰二苯甲酸丁酯（5）。結(jié)論:4，5為首次從該屬海綿中分離得到的化合物。

南海海綿；Haliclona sp.；化學成分

在海洋天然藥物的研究中，海綿占據(jù)著非常重要的地位。Haliclona屬海綿含有化學結(jié)構(gòu)新穎的化合物，且很多化合物具有抗菌［1］、抗炎［2］、抗污損［3］等生物活性。Haliclona屬海綿含有多種成分，大部分包括甾醇［4］、生物堿類［5］、萜類［6］、大環(huán)內(nèi)酯類［7］等物質(zhì)。本文采用各種天然藥物化學研究手段，對采自中國廣西潿洲島海域海綿Haliclona sp.進行提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定，通過硅膠柱色譜、制備薄層色譜、凝膠柱色譜和半制備HPLC等方法對各萃取組分進行系統(tǒng)分離純化得到單體化合物，采用核磁共振波譜等有機波譜方法分析，并與文獻資料進行對比確定單體化合物的結(jié)構(gòu)。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑及材料Brucker AV400核磁共振儀（TMS內(nèi)標）；旋光儀：MC 241 digital polarimeter （PERKIN-ELMER）；液質(zhì)聯(lián)用色譜儀：Alliance 2695，Quattro Micro TM ESI（Water）；半制備高效液相色譜儀：日本分光公司（JASCO），PU-2089（泵），RI-2031和UV-2075（檢測器）；制備HPLC色譜柱，C-18反相色譜柱：YMC-PackODS-ASH-343-5（20 mm×250 mm）；氚代試劑（ALDRICH公司）；柱色譜和薄層色譜用硅膠均系青島海洋化工生產(chǎn)，所用試劑均系分析純。

本文所用海綿采自于中國廣西潿洲島海域，經(jīng)天津醫(yī)科大學藥學院唐生安博士鑒定為南海海綿Haliclona sp.，標本編號為WZA-11，保存于天津醫(yī)科大學藥學院。

1.2 提取分離將海綿Haliclona sp.（干重95.0 g）均勻切碎，加入95％乙醇（500 mL）浸泡3次，合并浸泡液，減壓濃縮浸泡液得總提取物3.7 g。

將總提取物通過凝膠（Toyopearl HW-40）柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）為流動相洗脫，得到6個組分（0101-0106）。0105組分采用硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（100∶1，9∶1，8：2，1∶1）為流動相梯度洗脫，經(jīng)分離得到化合物1（2.3 mg）。0104組分（1.5 g）采用硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（98∶2）為流動相洗脫，分離得到組分（0401-0408）。0403組分（70.9 mg）采用硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（96∶4）為流動相洗脫，得到化合物2（2.1 mg），3（20.4 mg）。0401組分（88.0 mg）進一步采用硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯（97∶3）為流動相洗脫，得到化合物5（17.4 mg）。0106組分（250.0 mg）采用硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（100∶1，9∶1，8∶2，1∶1）為流動相梯度洗脫，分離得到組分（1001-1009），其中1003組分（12.0 mg）進一步重結(jié)晶得到化合物4（2.1 mg）。

2 結(jié)果

從南海海綿Haliclona sp.提取物中分離得到5個化合物，見圖1。

圖1 從中國南海海綿Haliclona sp.中分離得到的化合物Fig 1Compounds 1-5 isolated from Haliclona sp.

2.1 化合物1孕甾烯醇酮，無色針狀晶體，EIMS給出準分子離子m/z：316［M］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR光譜推測其分子式為：C21H32O2。1H NMR（400 MHz，CDCl3）中有1個烯質(zhì)子信號δH5.36（1H，brs，H-6），1個羥基信號δH3.67（1H，m，H-3），1個CH信號δH2.53（1H，m，H-17）及3個CH3信號δH0.63 （3H，s，CH3-18），1.00（3H，s，CH3-19），2.13（3H，s，CH3-21）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）共給出21個碳原子信號，分別為：δC37.3（C-1），31.9（C-2），71.7 （C-3），42.2（C-4），140.8（C-5），121.4（C-6），31.9 （C-7），31.8（C-8），50.0（C-9），36.5（C-10），21.1（C-11），38.9（C-12），44.0（C-13），56.9（C-14），22.9（C-15），24.5（C-16），63.7（C-17），13.2（C-18），19.4（C-19），209.6（C-20），31.9（C-21）。

2.2 化合物224-亞甲基膽甾醇，白色針狀晶體，ESI-MS給出準分子離子峰m/z：399［M+H］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR光譜推測其分子式為：C28H46O。1H NMR（400 MHz，CDCl3）中有1個烯質(zhì)子信號δH5.36（1H，s，H-6），1個羥基信號δH3.53（1H，m，H-3），2個末端雙鍵信號δH4.72（1H，brs，H-28a），4.65 （1H，brs，H-28b），1個CH信號δH2.36（1H，m，H-17）及5個CH3信號δH0.68（3H，s，CH3-18），1.01（3H，s，CH3-19），0.95（3H，d，J=6.4 Hz，CH3-21），1.03（6H，m，CH3-26，CH3-27）。13C NMR（100MHz，CDC13）共給出28個碳原子信號，分別為：δC37.3 （C-1），31.6（C-2），71.8（C-3），42.4（C-4），140.7（C-5），121.7（C-6），31.9（C-7），31.6（C-8），50.1（C-9），36.5（C-10），21.2（C-11），39.8（C-12），42.3（C-13），56.8（C-14），24.6（C-15），28.4（C-16），56.0（C-17），12.0（C-18），19.6（C-19），35.8（C-20），18.9（C-21），34.7（C-22），30.1（C-23），157.2（C-24），33.8（C-25），22.0（C-26），22.2（C-27），106.0（C-28）。

2.3 化合物3膽甾醇，白色針狀晶體，EIMS給出準分子離子峰m/z：386［M］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR光譜推測其分子式為：C27H46O。1H NMR（400 MHz，CDCl3）中有1個烯質(zhì)子信號，δH5.28（1H，brs，H-6），1個羥基信號δH3.49（1H，m，H-3），1個CH信號δH2.30（1H，m，H-17）和5個CH3信號δH0.61（3H，s，CH3-18），1.01（3H，s，CH3-19），0.96（3H，s，CH3-21），1.03（3H，m，CH3-26），1.02（3H，m，CH3-27）。

2.4 化合物4苯丙酸，白色臘狀物，ESI-MS給出準分子離子峰m/z：173［M+Na］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR光譜推測其分子式為：C9H10O2。1H NMR（400 MHz，CDCl3）芳香質(zhì)子信號δH7.27（2H，m，H-2′，6′），7.22（3H，m，H-3′，4′，5′）和2個CH2信號δH2.82（2H，t，J=7.8 Hz，CH2-2），2.52（2H，t，J=7.8 Hz，CH2-3）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）共給出6個碳原子信號，分別為：δC179.4（C-1），35.6（C-2），30.5（C-3），141.0（C-1′），128.2（C-2′），128.1（C-3′），125.8 （C-4′），128.2（C-5′），128.2（C-6′）。

2.5 化合物5鄰二苯甲酸丁酯，無色油狀物，EIMS給出準分子離子峰m/z：278［M］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR光譜推測其分子式為：C16H22O4。1H NMR（400 MHz，CDCl3）中4個芳香質(zhì)子信號δH7.66 （2H，dd，J=5.5，3.2 Hz，H-3，H-6），7.48（2H，dd，J= 5.5，3.2 Hz，H-4，H-5），2個CH2信號連氧氫信號，δH4.26（4H，t，J=6.8 Hz，H-1′，1″），4個CH2信號δH1.73（4H，m，H-2′，2″），δH1.42（4H，m，H-3′，3″）和2個末端CH3信號δH0.92（6H，t，J=7.3 Hz，H-4′，4″）。

3 討論

本文對采自中國廣西潿洲島海域的海綿Haliclona sp.進行化學成分分離、純化并得到單體化合物。通過核磁共振波譜、質(zhì)譜等方法，確定化合物的平面結(jié)構(gòu)及其立體構(gòu)型。結(jié)果表明，從海綿Haliclona sp.中分離的5個化合物，1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻報道一致，依次鑒定為孕甾烯醇酮（1）［8］、24-亞甲基膽甾醇（2）［9-10］、膽甾醇（3）［11］、苯丙酸（4）［12］、鄰二苯甲酸丁酯（5）［13］。當前海綿已經(jīng)成為海洋藥物研究的熱點之一，本文豐富了Haliclona屬海綿化學成分的研究內(nèi)容。

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（2015-01-22收稿）

Studies on chemical constituents from the South China Sea sponge Haliclona sp.

XU Jiao-jiao1，JIN De-jun2，WANG Jia1，QI Jing1，ZHAO Chuan3，QIAO Wei1，DUAN Hong-quan1，3，TANG Sheng-an1
（1.School of Pharmacy，Tianjin Medical University，Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics（Theranostics），Tianjin 300070，China；2.School of Pharmaceutical Science，Hainan Medical University，Haikou 571199，China；3.Research Center of Basic Medical Sciences，Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China）

Objective：To study the chemical constituents from the South China Sea sponge Haliclona sp..Methods:The isolation and purification of the compounds were performed by column chromatography techniques with silica gel，PTLC，Toyopearl HW-40 and semipreparative HPLC.Their structures were determined mainly by spectral data analysis and comparison with literatures.Results:Five compounds had been isolated and their structures were identified as pregnenolone（1），24-methylenecholesterol（2），cholesterol（3），phenylpropionic acid（4），dibutylphthalat（5）.Conclusion:Compounds 4，5 have been isolated for the first time from the genus Haliclona.

marine sponge；Haliclona sp.；chemical constitunents

R9

A

1006-8147（2015）05-0385-03

國家自然科學基金資助項目（81102371），天津市自然科學基金資助項目（10JCYBJC15000）

許嬌嬌（1989-），女，碩士在讀，研究方向：天然產(chǎn)物有效分離、分析研究；通信作者：唐生安，E-mail:tangshengan@tijmu.edu.cn。