管碟法比較不同廠家的注射用頭孢曲松鈉的抑菌效力

郭新?tīng)I(yíng)，臧恒昌，王彥厚

（1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東　濟(jì)南　250012；2.瑞陽(yáng)制藥有限公司，山東　淄博　256100；3.淄博市食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東　淄博　255086）

·制劑研究·

管碟法比較不同廠家的注射用頭孢曲松鈉的抑菌效力

郭新?tīng)I(yíng)1，2，臧恒昌1，王彥厚3

（1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250012；2.瑞陽(yáng)制藥有限公司，山東淄博256100；
3.淄博市食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東淄博255086）

目的建立比較不同廠家的注射用頭孢曲松鈉抑菌效力的方法。方法以測(cè)定效價(jià)為反應(yīng)值，按照《中國(guó)藥典》2010年版（二部）附錄ⅪA抗生素微生物檢定法中管碟法的二劑量法設(shè)計(jì)試驗(yàn)，對(duì)不同廠家的注射用頭孢曲松鈉的抑菌效力進(jìn)行比較。結(jié)果對(duì)于金黃色葡萄球菌，A、B廠樣品與原研樣品抑菌效果基本相同。對(duì)于大腸埃希菌，兩個(gè)廠家樣品的抑菌效果與原研樣品基本一致，對(duì)于肺炎克雷伯菌，兩個(gè)廠家樣品的抑菌效果無(wú)顯著性差異，原研樣品抑菌效果更好。結(jié)論該方法能用于比較不同廠家的注射用頭孢曲松鈉的抑菌效力。

注射用頭孢曲松鈉；抑菌效力；生物檢定法；管碟法

注射用頭孢曲松鈉由羅氏制藥最先研制，是一種廣譜、長(zhǎng)效的第三代半合成頭孢類(lèi)抗生素，通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成而發(fā)揮殺菌作用。本品對(duì)多種革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌有效，對(duì)腸桿菌科細(xì)菌有強(qiáng)大活性，對(duì)流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌有較強(qiáng)抗菌作用，對(duì)溶血性鏈球菌和肺炎球菌亦有良好作用。為了了解不同廠家生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉與原研樣品臨床療效的差異，筆者選擇2個(gè)不同廠家的注射用頭孢曲松鈉樣品，參考相關(guān)文獻(xiàn)［1～6］，通過(guò)管碟法測(cè)定樣品的效價(jià)來(lái)間接反應(yīng)樣品的體外抑菌效果，為注射用頭孢曲松鈉仿制藥品與原研樣品臨床療效的差異提供參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器精密電子天平（XS105DU）；生化培養(yǎng)箱（北京蘭貝石恒溫技術(shù)有限公司）；脈動(dòng)真空滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）；牛津杯（外徑7.8mm）；抑菌圈電腦測(cè)量?jī)x（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開(kāi)發(fā)公司）。

1.2試藥金黃色葡萄球菌［批號(hào)：CMCCB（26003），中國(guó)藥品生物制品檢定所］；大腸埃希菌［批號(hào)：CMCCB（44103），中國(guó)藥品生物制品檢定所］；肺炎克雷伯菌［批號(hào)：CMCCB（46117），中國(guó)藥品生物制品檢定所］；抗生素微生物檢定培養(yǎng)基II（批號(hào)：130217，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：20130627，青島海博生物技術(shù)有限公司）；頭孢曲松對(duì)照品（批號(hào)：130480-200903，含量 83.7％，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；其余試劑均為分析純。

1.3供試品注射用頭孢曲松鈉（羅氏制藥，批號(hào)：SH6004；A廠，批號(hào)：13092107、13092108、13092109；B廠，批號(hào)：314033035、314021031、314041037）。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1對(duì)照品溶液假定頭孢曲松純品的效價(jià)為1 000 U·mg-1，則中檢所對(duì)照品的效價(jià)為837 U·mg-1。精密稱取頭孢曲松對(duì)照品約59.7mg，至25 mL容量瓶中，加pH 7.8磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。分別精密量取儲(chǔ)備液1、2、4 mL至200 mL客量瓶中，加pH 7.8磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，得到 10、20、40 U·mL-1的頭孢曲松對(duì)照品溶液。

2.1.2供試品溶液參照《中國(guó)藥典》2010年版注射用頭孢曲松鈉含量測(cè)定的方法，對(duì)原研樣品和2個(gè)不同廠家樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　注射用頭孢曲松鈉含量測(cè)定結(jié)果

按照“2.1.1”項(xiàng)下的方法制備10、20、40 U·mL-1的頭孢曲松供試品溶液。

2.2菌懸液的制備將金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌，肺炎克雷伯菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)21 h，挑選3代菌種的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，用氯化鈉注射液將菌苔洗下，制成菌懸液，保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3雙碟的制備［7，8］按照《中國(guó)藥典》2010年版（二部）附錄ⅪA抗生素微生物檢定法，選用抗生素培養(yǎng)基Ⅱ、Ⅳ作為試驗(yàn)培養(yǎng)基。取培養(yǎng)基按照說(shuō)明書(shū)配制，滅菌后備用。取平底雙碟，分別注入抗生素微生物檢定培養(yǎng)基Ⅱ（用于金黃色葡萄球菌，肺炎克雷伯菌）、抗生素微生物檢定培養(yǎng)基Ⅳ（用于大腸埃希菌）20 mL，使其在碟底均勻涂布，放置水平面上使其凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量，加熱溶化后放冷至50℃，加入1％菌懸液，混合均勻，在每一雙碟中分別加入5 mL作為菌層，放置冷卻后，在每一雙碟中等距均勻安置牛津杯4個(gè)，用陶瓦蓋覆蓋，備用。

2.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)按照《中國(guó)藥典》2010年版（二部）附錄ⅪA抗生素微生物檢定法中管碟法的二劑量法，取制備好的雙碟，在每一雙碟中對(duì)角的2個(gè)牛津杯中分別裝高，低質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液和供試品溶液各0.3mL，在37℃培養(yǎng)15 h后取出，用抑菌圈電腦測(cè)量?jī)x測(cè)量供試品的效價(jià)，結(jié)果見(jiàn)表2～4。

表2　注射用頭孢曲松鈉的效價(jià)測(cè)定（金黃色葡萄球菌）

對(duì)于金黃色葡萄球菌的抑菌效果，A廠和B廠生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉樣品之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05），并且與羅氏制藥的抑菌效果基本一致。

表3　注射用頭孢曲松鈉的效價(jià)測(cè)定（大腸埃希菌）

對(duì)于大腸埃希菌的抑菌效果，2個(gè)廠家生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05），并且與羅氏制藥的抑菌效果基本一致。

表　4 注射用頭孢曲松鈉的效價(jià)測(cè)定（肺炎克雷伯菌）

對(duì)于肺炎克雷伯菌的抑菌效果，2個(gè)廠家生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05），羅氏制藥的抑菌效果更好。

3　討論

3.1金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌對(duì)于頭孢曲松鈉可以形成邊緣清晰、完整的抑菌圈，直徑在16～22 cm范圍內(nèi)，有利于效價(jià)的測(cè)定，而枯草芽孢桿菌，短小桿菌和銅綠假單胞菌對(duì)于頭孢曲松鈉沒(méi)有形成很好的抑菌圈，無(wú)法測(cè)定效價(jià)。

3.22個(gè)不同廠家生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉含量測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異（P＞0.05），并且與原研樣品基本一致，但是不同廠家的樣品對(duì)于不同菌株的抑菌效果卻有所差別，其中原研樣品的抑菌效果最好，可能是因?yàn)樗幬锏木汀⒕Ц衲?、粒度不一致，在體內(nèi)的溶解度不一致，在血液中與血漿蛋白的結(jié)合度不一致，從而導(dǎo)致療效的不一致。若想達(dá)到原研樣品的治療效果，還需在晶型、晶格能、粒度等方面進(jìn)行深入的研究。

3.3不同廠家的注射用頭孢曲松鈉抑菌效果有所差別，提示本品在臨床使用過(guò)程中可能存在差別，臨床使用前有必要進(jìn)行藥敏試驗(yàn)［9］。

3.4臨床用藥一般選擇療效確切，治療費(fèi)用相對(duì)低的國(guó)產(chǎn)品牌，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)于金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌所致的感染，可以選擇A、B廠的產(chǎn)品，對(duì)于肺炎克雷伯菌所致的感染，羅氏制藥的注射用頭孢曲松鈉可以產(chǎn)生更好的效果［10］。

［1］徐蓓蕾，張貴君，崔向微，等.葛根芩連湯藥效組分抑菌生物效價(jià)測(cè)定［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（1）：230-233.

［2］胡云建，陳東科，張秀珍.頭孢哌酮/他唑巴坦體外抗菌活性研究［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2001，17（6）：410-414.

［3］羅予，孟林敏，趙國(guó)新，等.黃連聯(lián)合頭孢菌素類(lèi)抗生素的抑菌作用研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2004，22（11）：2033-2034.

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Comparison of antimicrobial potency of Ceftriaxone Sodium Injection from different manufactures by cup-plate method

GUO Xin-ying1，2，ZANG Heng-chang1，WANG Yan-hou3
（1.School of Pharmaceutical Sciences，Shandong University，Jinan 250012，China；2.Reyoung Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zibo 256100，China；3.Zibo Institute for Food and Drug，Zibo 255086，China）

Objective To establish a method for comparing the antimicrobial potency of Ceftriaxone Sodium Injection from different manufactures.Methods With the potency determined as response value，the test was designed by the two dose method of antibiotic bioassay cup-plate method in the appendixⅪ A of Chinese Pharmacopoeia（edition 2010，part 2），then compared the antibacterial effect of Ceftriaxone Sodium Injection from different factories.Results As to Staphylococcus aureus，samples of A，B factories and samples of original research had the same antibacterial effect.As to Escherichia coli，the antibacterial effect was same between the samples of different factories and samples of original research.As to Klebsiella pneumoniae，the antibacterial effect was no difference between samples from different factories，while the effect of the original research sample was relatively stronger.Conclusion The method could be used for testing the antimicrobial potency of Ceftriaxone Sodium Injection from different manufacturers.

Ceftriaxone Sodium Injection；Antimicrobial potency；Biological assay；Cup-plate method

R927.1

A

2095-5375（2015）12-0711-003

郭新?tīng)I(yíng)，男，研究方向：藥品生產(chǎn)工藝研究，E-mail：guoxinying@reyoung.cn

王彥厚，男，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：藥物分析與質(zhì)量控制，Tel：0533-7868966，E-mail：wyhzb@163.com