用加校正因子的主成分自身對(duì)照法測(cè)定鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量

徐亮亮，朱小林，蘇　麗

（江蘇先科藥業(yè)有限公司，江蘇　南通　226200）

用加校正因子的主成分自身對(duì)照法測(cè)定鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量

徐亮亮，朱小林，蘇麗

（江蘇先科藥業(yè)有限公司，江蘇南通226200）

目的建立加校正因子的主成分自身對(duì)照法測(cè)定鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量。方法采用C18柱（4.6mm×250 mm，5 μm），以乙腈∶0.325％磺酸鈉（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.8）（10∶90）為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為1.5mL·min-1，柱溫為45℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為215 nm，進(jìn)樣量為20 μL。測(cè)定雜質(zhì)C相對(duì)于鹽酸去氧腎上腺素的相對(duì)出峰時(shí)間及校正因子，并計(jì)算其含量。結(jié)果雜質(zhì)C在0.065 1～1.626 9 μg·mL-1，鹽酸去氧腎上腺素在0.064 7～1.618 4 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系；雜質(zhì)C相對(duì)于鹽酸去氧腎上腺素的相對(duì)保留時(shí)間為1.3，校正因子為0.50。結(jié)論本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，無(wú)需提供雜質(zhì)對(duì)照品，能夠準(zhǔn)確測(cè)定鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量。

鹽酸去氧腎上腺素；雜質(zhì)C；校正因子

鹽酸去氧腎上腺素為擬腎上腺素藥物，用于防治脊椎麻醉、全身麻醉、外科手術(shù)延長(zhǎng)局療麻醉時(shí)間，鼻黏膜充血的消炎、眼科的擴(kuò)瞳以及急性低血壓的升壓、感冒等，為急救常備藥品［1～3］。為確保藥物的安全性，降低不良反應(yīng)，需對(duì)藥物的雜質(zhì)進(jìn)行有效的檢測(cè)和控制［4～7］。本文主要對(duì)鹽酸去氧腎上腺素的雜質(zhì)C［1-（3-hydroxyphenyl）-2-（methylamino）ethanone］進(jìn)行研究，建立了測(cè)定雜質(zhì)C含量的加校正因子的主成分自身對(duì)照法。經(jīng)驗(yàn)證，本文建立的方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，可用于鹽酸去氧腎上腺素雜質(zhì)C的質(zhì)量控制，并減少鹽酸去氧腎上腺素質(zhì)量控制過(guò)程中對(duì)雜質(zhì)C對(duì)照品的依賴(lài)。

1　儀器與試藥

1.1儀器Dionex P680高效液相色譜儀（UV檢測(cè)器，美國(guó)戴安公司），色譜柱（Wonda Cract ODS-2C18，4.6mm×250 mm，5 μm）組成色譜系統(tǒng) 1；Agilent 1260高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司），色譜柱（Agilent Zorbax Eclipse Plus C18，4.6mm×250 mm，5 μm）組成色譜系統(tǒng)2；DV215CD電子天平（美國(guó)Ohaus公司）；STARTER3100型pH計(jì)（美國(guó)Ohaus公司）。

1.2試藥鹽酸去氧腎上腺素（批號(hào)：140601、140602、140603，赤峰艾克制藥科技股份有限公司）；鹽酸去氧腎上腺素對(duì)照品（批號(hào)：100261-201403，含量：99.9％，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；雜質(zhì)C對(duì)照品（批號(hào)：03045191C，含量：98.6％，英國(guó)LGC）；乙腈為色譜純（德國(guó) Merck公司），水為超純水，其它試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件C18柱（4.6mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相A：乙腈∶0.325％磺酸鈉（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.8）（10∶90），流動(dòng)相B：乙腈∶0.325％磺酸鈉（用磷酸調(diào)節(jié) pH值為2.8）（90∶10），梯度洗脫（見(jiàn)表1），流速為1.5mL·min-1，柱溫45℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為215 nm，進(jìn)樣量10 μL。

2.2溶液的制備供試品溶液配制：取鹽酸去氧腎上腺素，加混合溶劑［流動(dòng)相B∶流動(dòng)相A（20∶80，V/V）］制成每1 mL中約含鹽酸去氧腎上腺素1 mg的溶液。

對(duì)照品溶液配制：取雜質(zhì)C對(duì)照品，加混合溶劑［流動(dòng)相B∶流動(dòng)相A（20∶80，V/V）］制成每1 mL中約含0.001 mg雜質(zhì)C的溶液。

2.3專(zhuān)屬性試驗(yàn)用混合溶劑配制鹽酸去氧腎上腺素供試品溶液，分別注入儀器系統(tǒng)1、系統(tǒng)2，結(jié)果見(jiàn)圖1～4和表2。結(jié)果顯示雜質(zhì)C相對(duì)于鹽酸去氧腎上腺素的保留時(shí)間確定為1.3，雜質(zhì)C峰前后峰分離度均大于1.5，系統(tǒng)適用性良好，專(zhuān)屬性試驗(yàn)符合要求。

表2　鹽酸去氧腎上腺素和雜質(zhì)C在不同系統(tǒng)中的出峰時(shí)間和分離度

2.4精密度、重復(fù)性試驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下雜質(zhì)C對(duì)照品溶液，在儀器系統(tǒng)1與儀器系統(tǒng)2中各連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得雜質(zhì)C峰面積的RSD分別為0.6％、0.4％。取同一批樣品，平行配制6份，測(cè)定含量，測(cè)得雜質(zhì)C平均含量分別為0.035％，RSD=0.9％（n =6）、0.036％，RSD=1.0％（n=6）。

圖1　系統(tǒng)1：鹽酸去氧腎上腺素供試品圖譜

圖2　系統(tǒng)1：雜質(zhì)C對(duì)照品圖譜

圖3　系統(tǒng)2：鹽酸去氧腎上腺素供試品圖譜

2.5溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.2”項(xiàng)下方法配制供試品溶液，室溫放置，分別于0、1、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果雜質(zhì)C峰面積RSD為0.4％，鹽酸去氧腎上腺素峰面積RSD為0.8％。

2.6檢測(cè)限和定量限采用逐步稀釋法，在儀器系統(tǒng)1和儀器系統(tǒng)2中測(cè)得鹽酸去氧腎上腺素的檢測(cè)限（S/N=3）均為0.39 ng，定量限（S/N=10）均為1.29 ng；雜質(zhì)C的檢測(cè)限和定量限分別為0.20 ng、0.65 ng。

圖4　系統(tǒng)2：雜質(zhì)C對(duì)照品圖譜

2.7回收率試驗(yàn)取本品適量，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，分別精密加入雜質(zhì)C 26.13、52.26、78.39 μg各3份，加混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得雜質(zhì)C的平均加樣回收率為99.29％，RSD為0.66％（n=9），結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　雜質(zhì)C回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8線性試驗(yàn)取雜質(zhì)C對(duì)照品2.20 mg，用流動(dòng)相溶解并依次稀釋制成濃度分別為0.065 1、0.271 2、0.542 3、1.084 6、1.626 9 μg·mL-1的線性溶液；取鹽酸去氧腎上腺素對(duì)照品2.15mg，用流動(dòng)相溶解并依次稀釋制成濃度分別為0.064 7、0.269 7、0.539 5、1.078 9、1.618 4 μg·mL-1的線性溶液。

按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定。由峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，得線性方程：雜質(zhì)C：Y=268 621X-422.49，r=1。雜質(zhì)C濃度為0.0651 ～1.626 9 μg·mL-1時(shí)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系；鹽酸去氧腎上腺素：Y=134 166X-424.83，r =0.999 9。鹽酸去氧腎上腺素濃度為0.064 7～1.618 4 μg·mL-1時(shí)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.9雜質(zhì)C校正因子的確定由雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則可知，由于特定雜質(zhì)的不易取得，可采用加校正因子的方式對(duì)特定雜質(zhì)進(jìn)行定量，參考《中國(guó)藥典》2010年版（二部）附錄藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則，可采用校正因子法對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行定量分析，采用斜率的比值確定并驗(yàn)證雜質(zhì)C的相對(duì)校正因子［8］，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　校正因子測(cè)定結(jié)果

2.10樣品測(cè)定取鹽酸去氧腎上腺素，按“2.1”、“2.2”項(xiàng)下的方法分別用外標(biāo)法和加校正因子（f= 0.50）的主成分自身對(duì)照法測(cè)定雜質(zhì)C的含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5　樣品（雜質(zhì)C）測(cè)定結(jié)果

3　討論

以上研究結(jié)果顯示，本文建立的雜質(zhì)C色譜系統(tǒng)具有良好的專(zhuān)屬性，相對(duì)出峰時(shí)間和校正因子在不同儀器系統(tǒng)有較好的重現(xiàn)性，因此可作為測(cè)定雜質(zhì)C的有效方法。

本文建立了鹽酸去氧腎上腺素雜質(zhì)C的加校正因子（f=0.50）的主成分自身對(duì)照法，為控制鹽酸去氧腎上腺素中雜質(zhì)C的含量提供了有效的檢測(cè)方法，并為解決產(chǎn)品質(zhì)量控制過(guò)程中雜質(zhì)C對(duì)照品的不易獲得性問(wèn)題提供了一個(gè)可行的解決方案。

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［3］孫克剛，施建國(guó)，蔣宇丹.HPLC法同時(shí)測(cè)定鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)［J］.上海醫(yī)藥，2012，33（5）：41-44.

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Determination of the impurity C in phenylephrine hydrochloride by main constituent own control method with correction factor

XU Liang-liang，ZHU Xiao-lin，SU Li
（Jiangsu Ascendia Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nantong 226200，China）

Objective To establish a method for the determination of impurity C in phenylephrine hydrochloride by main constituent own control method with correction factor.Methods The assay was carried out on a C18column（4.6mm ×250 mm，5 μm）with the mobile phase of acetonitrile-0.325％sodium sulfonate solution（with phosphoric acid to adjust pH value of 2.8）（10∶90）at a flow rate of 1.5 mL·min-1.The column temperature，the detection wave length and the injection volume were set at 45℃，215 nm，and 20 μL.The relative retention time and the correction factor between impurity C and phenylephrine hydrochloride were determined.Results The linear ranges of impurity C and phenylephrine hydrochloride were 0.065 1～1.626 9 μg·mL-1，0.064 7～1.618 4 μg·mL-1，respectively.The relative retention time between impurity C and phenylephrine hydrochloride was 1.3，the correction factor between impurity C and phenylephrine hydrochloride was 0.50.Conclusion This method was simple，accurate and reliable to determine impurity C in phenylephrine hydrochloride.without standard substances.

Phenylephrine hydrochloride；Impurity C；Correction factor

R927.11

A

2095-5375（2015）12-0706-004

徐亮亮，男，主管藥師，研究方向：藥物制劑開(kāi)發(fā)與質(zhì)量研究，E-mail：XLL@assendia.cn