大黃素在結(jié)腸靶向護(hù)腸清毒微丸中的體外釋放研究

馬傳江，孫　萍，劉樂(lè)洋

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東　濟(jì)南　250011；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東　濟(jì)南　250355）

大黃素在結(jié)腸靶向護(hù)腸清毒微丸中的體外釋放研究

馬傳江1，孫萍1，劉樂(lè)洋2

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東濟(jì)南250011；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟(jì)南250355）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定護(hù)腸清毒微丸中大黃素含量方法，探討微丸中大黃素的體外釋放特性。方法以甲醇-0.1％冰醋酸溶液（80∶20）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，Phenomenex C18（4.6mm×150 mm，10 μm）為分析柱，采用恒溫振蕩法考察微丸中大黃素的體外釋放規(guī)律。結(jié)果微丸在人工胃液的2 h中，幾乎無(wú)釋放；在人工腸液中5 min后可以檢出，40 min內(nèi)釋藥達(dá)到80％，至220 min幾乎全部釋放。結(jié)論所制備的微丸具有結(jié)腸靶向的作用。

護(hù)腸清毒；微丸；大黃素；結(jié)腸靶向；體外釋放

1　試藥與儀器

1.1儀器 Waters600高效液相色譜儀；高壓微射流納米均質(zhì)機(jī)（美國(guó)Microfludics公司）；D800C智能藥物溶出儀（天津大學(xué)無(wú)線電廠）；85B-2型磁力加熱攪拌器（南通科學(xué)儀器廠）；Biofuge Stratos全能臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Heraeus公司）。

1.2試藥大黃素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110756-200110）；護(hù)腸清毒微丸（自制，批號(hào)：20100314、20100316、20100318）；果膠鈣（鄭州鄭亞化工產(chǎn)品有限公司）；聚丙烯酸樹(shù)脂（MCC）S100型（德國(guó)Rohm公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1微丸的制備［5］采用水煎煮提取，將藥液經(jīng)噴霧干燥得藥粉。以低脂果膠與氯化鈣制備果膠鈣，超微粉碎，備用。將果膠鈣、藥粉和MCC按一定比例混合，加入粘合劑制成軟材，經(jīng)擠出-滾圓機(jī)擠出軟材，高速滾圓微丸丸芯，采用聚丙烯酸樹(shù)脂S100型［4］，pH 6.8～7.4，腸溶包衣材料進(jìn)行包衣，既得結(jié)腸靶向控釋微丸。

2.2體外釋放規(guī)律考察

2.2.1試驗(yàn)方法分別精密稱取3批微丸，以藥粉制得的膠囊劑作為對(duì)照，采用恒溫振蕩法，于pH= 6.8的人工腸液和pH=2的人工胃液（2 h）各1 000 mL中，水浴溫度（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速100 rpm，分別于不同時(shí)間吸取溶液1 mL，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾后測(cè)定含量，同時(shí)補(bǔ)加同體積同溫度人工腸液或人工胃液，由于大黃素的水溶性較差，為增強(qiáng)其溶出度和檢測(cè)性，在人工胃液和人工腸液中添加0.5％的十二烷基硫酸鈉，以大黃素累計(jì)釋放百分率計(jì)算［5］。

2.2.2色譜條件流動(dòng)相：甲醇-0.1％冰醋酸溶液（80∶20），色譜柱：Phenomenex C18柱（4.6mm× 250 mm，10 μm），流速：0.8mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。

2.2.3溶液的制備對(duì)照品溶液的制備：精密稱取大黃素對(duì)照品適量，置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成含大黃素77.20 μg·mL-1的溶液作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

供試品溶液的制備：精密吸取釋放溶液1 mL，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

陰性對(duì)照溶液的制備：取不含大黃的處方藥材，同法制備缺大黃陰性對(duì)照液。

2.2.4檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇參照《中國(guó)藥典》2015年版大黃項(xiàng)下，選擇254 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.5專屬性試驗(yàn)取對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照溶液各10 μL，進(jìn)行樣品測(cè)定，樣品與對(duì)照品在相同的保留時(shí)間內(nèi)有相同的色譜峰，而陰性對(duì)照品無(wú)此色譜峰，表明測(cè)定無(wú)干擾。圖譜見(jiàn)圖1。

2.2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.3、0.5、1 mL于10 mL容量瓶中，再精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1mL至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，進(jìn)樣，分別測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，線性回歸后得A=76 825C +3 567.8，r=0.999 4（n=5）。大黃素在0.308 8～7.72 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.7精密度試驗(yàn)取濃度為1.00 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果RSD為1.63％，表明儀器精密度良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD值為2.90％，表明樣品穩(wěn)定性良好。

圖1　高效液相色譜法測(cè)定微丸中大黃素的含量

2.2.9重復(fù)性試驗(yàn)精密量取樣品5份，按上述樣品制備方法制備樣品溶液，然后測(cè)定峰面積，RSD 為1.4％，重復(fù)性良好。

2.2.10回收率試驗(yàn)精密稱取樣品6份，依次加入對(duì)照品，按供試品溶液制備方法進(jìn)行測(cè)定。每份進(jìn)樣10 mL?；厥章史秶?5.34％～104.20％，RSD 為3.28％，回收率良好，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　大黃素的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3溶出度結(jié)果 檢測(cè)溶出液中大黃素的含量比例，確定藥品的溶出速率。以大黃素含量穩(wěn)定不增加作為藥物全部溶出的標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)為100％，其他時(shí)間點(diǎn)的藥物含量與最大含量的比值，即為藥物累積釋放率。結(jié)果見(jiàn)表2、圖2。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，普通膠囊劑在藥物釋放過(guò)程中，在人工胃液（含0.5％十二烷基硫酸鈉）中正常釋放，80 min后全部釋放。而微丸劑型，在人工胃液的2 h中，測(cè)不到大黃素含量。而將微丸轉(zhuǎn)移到人工腸液中后，5 min后可以檢出，40 min內(nèi)釋藥達(dá)到80％，至220 min幾乎全部釋放完畢。

表2　溶出結(jié)果表

圖2　護(hù)腸清毒微丸樣品和膠囊樣品中大黃素的溶出曲線

3　討論

本文對(duì)自制的護(hù)腸清毒微丸中主要有效成分大黃素的體外溶出度進(jìn)行了考察。試驗(yàn)結(jié)果表明，將中藥經(jīng)過(guò)提取干燥后加入果膠鈣，制備成結(jié)腸靶向控釋包衣微丸，因?yàn)榫郾┧針?shù)脂包衣材料只溶于人工腸液，在人工胃液的2 h中，檢測(cè)不到藥物釋放。在2 h后，藥物從胃排到腸道中，包衣材料在人工腸液中可以較快溶解，使丸芯暴露在溶液中。果膠鈣遇水溶脹，從而形成骨架結(jié)構(gòu)［6］，給藥物溶出提供溶出通道。微丸中所含大黃素在人工腸液中40 min內(nèi)釋藥可達(dá)到80％，220 min幾乎全部釋放，且溶出速率穩(wěn)定，釋藥曲線平滑，具有結(jié)腸定位釋放的效果。

［1］Li Y，Wang L，Su C，et al.Clinical observation on the treatment of chronic severe hepatitis B by retention enema with Huchang Jiedu Decoction［J］.Chin J Integr Med，2010，16（4）：348-352.

［2］劉樂(lè)洋.護(hù)腸清毒結(jié)腸定位控釋微丸的研制［D］.濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

［3］張亞軍，鄭杭生，徐蓮英.果膠在細(xì)菌觸發(fā)型結(jié)腸定位給藥制劑中的應(yīng)用［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（7）：533-536.

［4］武小赟，馬靜，王俊濤，等.解毒止瀉結(jié)腸緩釋微丸釋放度的方法學(xué)研究［J］.藥學(xué)研究，2015，34（1）：23-25.

［5］劉樂(lè)洋，孫萍，馬傳江.結(jié)腸靶向劑護(hù)腸清毒微丸的制備工藝研究［J］.中國(guó)藥房，2012，23（11）：995-997.

［6］王芳，鄭琴，伍振峰，等.應(yīng)答式釋藥系統(tǒng)構(gòu)建方法的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，38（22）：3801-3807.

［7］楊志欣，常爽，謝麗，等.酶控滲透泵型結(jié)腸定位微丸的制備及體外釋放度考察［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28（5）：451-455.

［8］菅曉娟，張文博，牛津梁，等.果膠在結(jié)腸靶向給藥系統(tǒng)中的應(yīng)用［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2006，27（3）：188-191.

Study on release rate in vitro of emodion in colon targeting Huchangqingdu Pellets

MA Chuan-jiang1，SUN Ping1，LIU Le-yang2
（1.The Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China；
2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

Objective To establish an HPLC method for the determination of emodin in Huchangqingdu Pellets，and to study its release rate in vitro.Methods HPLC method was adopted on Phenomenex C18column with the mobile phase of methanol-0.1％acetic acid（80∶20）.The detection wavelength was 254 nm.The release rule in vitro was studied by temperature oscillation.Results The pellets almost had no release in artificial gastric juice in 2 h，and can be detected after 5 minutes in artificial intestinal juice，and reached 80％of drug release in 40 minutes，and almost all of the release in 220 minutes.Conclusion The pellets had colon targeting effect.

Huchangqingdu；Pellets；Emodin；Colon targeting；Release rate in vitro護(hù)腸清毒湯由大黃、赤芍、紫草、黃芩等10味中藥水煎提取而成，經(jīng)臨床實(shí)踐證明，具有健脾清腸、化瘀解毒的功效，作用于肝病和腸源性內(nèi)毒素血癥療效顯著［1，2］。但傳統(tǒng)湯劑服用量大，服用和攜帶不方便，且口服易在小腸部位吸收，到達(dá)結(jié)腸的藥物很少，影響療效。為使藥物在結(jié)腸部位直接釋藥，減少服用量，增加療效，我們將湯劑進(jìn)行改造，加入果膠鈣，制備結(jié)腸靶向控釋微丸［3，4］，并對(duì)其主要有效成分大黃素的體外釋藥規(guī)律進(jìn)行了探索。

R945

A

2095-5375（2015）12-0696-003

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.2007-035）

馬傳江，男，副主任藥師，研究方向：中藥制劑及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，E-mail：mcj77777@126.com