大豆再生相關(guān)基因GmLEC的克隆及生物信息學(xué)分析

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大豆再生相關(guān)基因GmLEC的克隆及生物信息學(xué)分析

武小霞1，王敏1，陳慶山1，張超1，李思楠1，馬彥龍1，孫晶1，劉明1，姜成濤1，李文濱1，李沫1，劉佳慧1，王智1，張希瑞1，蘇安玉2

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，大豆生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150030；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，哈爾濱150030）

摘要：利用同源克隆技術(shù)，對(duì)擬南芥再生相關(guān)基因LEC進(jìn)行同源序列比對(duì)，從大豆中克隆LEC基因兩個(gè)成員的全長(zhǎng)CDS序列，得到大豆再生相關(guān)基因GmLEC1-a，GmLEC1-b及GmLEC2-a，GmLEC2-b，用生物信息學(xué)方法對(duì)大豆GmLEC1及GmLEC2基因核苷酸序列以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、親水性和疏水性及進(jìn)化樹等進(jìn)行分析。結(jié)果表明，大豆再生相關(guān)基因GmLEC1-a編碼區(qū)長(zhǎng)度為672 bp，編碼223個(gè)氨基酸，GmLEC1-b編碼區(qū)長(zhǎng)度為681 bp，編碼226個(gè)氨基酸，GmLEC2-a編碼區(qū)長(zhǎng)度為2 205 bp，編碼734個(gè)氨基酸，GmLEC2-b編碼區(qū)長(zhǎng)度為2 196 bp，編碼731個(gè)氨基酸，GmLEC蛋白為親水性不穩(wěn)定蛋白；通過(guò)對(duì)LEC蛋白功能結(jié)構(gòu)域進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，GmLEC1為H4超家族成員，GmLEC2為B3超家族成員，并均與擬南芥屬植物親緣較近。

關(guān)鍵詞：大豆；再生；GmLEC；生物信息學(xué)

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間2015-4-23 15:49:31

[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20150423.1549.016.html

武小霞,王敏,陳慶山,等.大豆再生相關(guān)基因GmLEC的克隆及生物信息學(xué)分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 46(4): 1-9.

大豆是重要經(jīng)濟(jì)作物，提高大豆產(chǎn)量和優(yōu)化大豆品質(zhì)成為關(guān)注熱點(diǎn)。在大豆、棉花等難再生作物中，離體再生頻率低成為基因工程改良的限制因素。因此建立高效的作物離體再生體系，提高作物體細(xì)胞胚發(fā)生頻率是基因工程改良作物的前提。再生相關(guān)基因的克隆和應(yīng)用可提高大豆再生率和轉(zhuǎn)化率[1]，對(duì)再生作物基因工程改良具有重要意義。

LEC基因是最先在擬南芥中發(fā)現(xiàn)的一種植物胚胎發(fā)育關(guān)鍵基因[2]，包括LEC1和LEC2兩個(gè)基因。LEC基因在胚胎形態(tài)發(fā)生階段，控制子葉特性，決定胚柄細(xì)胞命運(yùn)，在胚胎后期成熟階段，LEC基因促進(jìn)儲(chǔ)藏物質(zhì)積累。

LEC1基因是Lotan等首次從擬南芥中分離出的一種胚胎發(fā)育調(diào)控基因[3-4]，是編碼與CCAAT序列結(jié)合的一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子[5]，被證明在擬南芥中具有促進(jìn)體細(xì)胞胚發(fā)生的功能，單獨(dú)就可以誘導(dǎo)體細(xì)胞向胚性細(xì)胞轉(zhuǎn)變，在正常情況下該基因僅在胚性細(xì)胞和胚乳組織中表達(dá)，當(dāng)該基因被置于一組成型表達(dá)啟動(dòng)子控制下并轉(zhuǎn)化到擬南芥中后，成功誘導(dǎo)體細(xì)胞發(fā)育成胚胎，之后在玉米[6]、胡蘿卜[7]、向日葵[8]、花生[9]等植物中相繼克隆出LEC1基因。研究表明在LEC1突變體或野生型擬南芥中過(guò)量表達(dá)LEC1基因，轉(zhuǎn)基因后代小苗會(huì)出現(xiàn)畸型，幼苗葉片上發(fā)現(xiàn)胚狀體[10]，說(shuō)明LEC1過(guò)量表達(dá)能誘導(dǎo)體細(xì)胞向胚性細(xì)胞轉(zhuǎn)變。擬南芥LEC1基因在胚胎發(fā)育的早期高表達(dá)，是子葉特化以及胚胎成熟所必需的，LEC1活化為胚胎發(fā)生以及胚胎分化所必需基因的表達(dá)，是胚胎發(fā)育的一種重要調(diào)控因子。LEC家族另一重要成員LEC2首先從擬南芥T-DNA插入突變體中發(fā)現(xiàn)并分離得到，在胚胎發(fā)育過(guò)程早期和晚期起重要作用，LEC2的RNA主要積累在發(fā)育種子中，是一個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子[11]。對(duì)LEC基因研究有助于對(duì)體細(xì)胞胚發(fā)生機(jī)理進(jìn)一步認(rèn)識(shí)，提高大豆等難以再生作物再生頻率，促進(jìn)基因工程改良作物。

本研究通過(guò)同源克隆方法從大豆中獲得GmLEC基因，運(yùn)用生物信息學(xué)等相關(guān)技術(shù)手段對(duì)該基因功能進(jìn)行分析，以期進(jìn)一步研究該基因在大豆再生體系中的作用，為最終建立大豆高效穩(wěn)定的再生體系奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1植物材料

大豆品種東農(nóng)50由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所提供，Trizol試劑購(gòu)自TaKaRa公司；DNA凝膠回收試劑盒購(gòu)自O(shè)mega公司；限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶購(gòu)自Fermantas公司，Pmd-19T載體購(gòu)自TaKaRa公司，LA Taq聚合酶及其他各種生化試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；引物合成自上海英駿公司，測(cè)序由華大基因組（BGI）完成。

菌種及載體：大腸桿菌E. coli DH5α菌株；農(nóng)桿菌：EHA105；入門載體：pGWC；表達(dá)載體：pGWB5，pEARLEY-GATEWAY。

1.2方法

1.2.1 GmLEC基因RNA提取及引物設(shè)計(jì)

取東農(nóng)50未成熟的種子提取RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，根據(jù)擬南芥LEC基因（核酸序列號(hào)分別為NM_102046和NM_102595的CDS序列，在phytozome上與Glycine max進(jìn)行Blast比對(duì)，在大豆基因組數(shù)據(jù)中獲得同源最高序列進(jìn)行克隆，在該基因上下游設(shè)計(jì)引物用于擴(kuò)增目的基因，引物設(shè)計(jì)見表1。

1.2.2目的基因PCR擴(kuò)增

以植株葉片總RNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系為：cDNA 1 μL，10×PCR buffer 2 μL，10×mmol·L-1dNTP mixture 0.3 μL，GmLec1-F 0.5 μL，GmLec1-R 0.5 μL，Taq DNA polymerase 0.3 μL，ddH2O 15.4 μL。PCR反應(yīng)條件為：94℃變性5 min，94℃變性30 s，60℃復(fù)性30 s，72℃延伸1 min，擴(kuò)增38個(gè)循環(huán)，72℃終延伸10 min，4℃終止保存.

表1　GmLEC基因擴(kuò)增引物設(shè)計(jì)Table 1　Primer sequences of GmLEC gene amplification

將PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，采用?；邢薰灸z回收試劑盒回收DNA片段，將回收的目的片段與pGWC連接，pGWC載體在使用前，需經(jīng)AhdⅠ酶切，使載體兩端產(chǎn)生5' T，用與PCR產(chǎn)物的兩端的3' A互補(bǔ)。PCR產(chǎn)物回收后與pGWC載體連接，挑取正向克隆測(cè)序正確后連接表達(dá)載體PGWB5及pEARLEY-GATEWAY。

表達(dá)載體均采用Gateway重組克隆技術(shù)構(gòu)建，目標(biāo)基因連入pGWC后即為入門克?。‥ntry Clone），通過(guò)與表達(dá)載體做LR反應(yīng)構(gòu)建目標(biāo)基因表達(dá)載體。LR反應(yīng)體系如下：入門克?。╬GWC+ gene）1.0 μL，表達(dá)載體1.0 μL，LR clonase Enzyme Mix 1.0 μL，ddH2O 2 μL，共計(jì)5 μL。

反應(yīng)液于25℃反應(yīng)4~6 h，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，挑選單菌落進(jìn)行鑒定并送陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序。

1.2.3信息學(xué)分析

利用expasy數(shù)據(jù)庫(kù)（http://web.expasy.org/compute_pi/）預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)pI和分子質(zhì)量；通過(guò)NCBI （http://www.ncbi.nlm.nih.gov）的Protein Conservation Domain程序?qū)mLEC全長(zhǎng)cDNA序列編碼的氨基酸序列進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析；用Protscale（http://www. expasy.ch/tools/protscale.html/）工具對(duì)GmLEC編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物疏水性和親水性進(jìn)行分析；用SOPMA及Phyre（http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/phyre/）軟件分別對(duì)蛋白質(zhì)二級(jí)及三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)；并且從NCBI中收集已知各物種的LEC1基因，ClustalX進(jìn)行蛋白質(zhì)序列比對(duì)，然后用MEGA5以鄰接法構(gòu)建大豆GmLEC基因與其他物種LEC基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹。

2　結(jié)果與分析

2.1目的基因GmLEC1-a、GmLEC1-b、GmLEC2-a、GmLEC2-b克隆目的片段電泳結(jié)果

由圖1可知，GmLEC1-a目的條帶長(zhǎng)度為672bp，GmLEC1-b目的條帶長(zhǎng)度為681 bp，GmLEC2-a目的條帶長(zhǎng)度為2 205 bp，GmLEC2-b目的條帶長(zhǎng)度為2 196 bp。

圖1　PCR擴(kuò)增基因片段電泳結(jié)果Fig. 1　Electrophoresis map of gene fragments PCR amplification

2.2生物信息學(xué)分析

2.2.1 GmLEC基因蛋白質(zhì)序列差異的比對(duì)

運(yùn)用DNAMAN軟件對(duì)LEC1和LEC2基因蛋白序列比對(duì)得出：LEC1-a及LEC1-b基因染色體相似度為88.84%。LEC2-a及LEC2-b基因相似度為90.80%。蛋白質(zhì)序列差異如圖2所示。

在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得GmLEC1-a及GmLEC1-b基因登錄號(hào)分別為EU088288.1和EU088289.1。

2.2.2 GmLEC編碼的蛋白質(zhì)氨基酸結(jié)構(gòu)分析

對(duì)GmLEC1-a、GmLEC1-b及GmLEC2-a、Gm-LEC2-b全長(zhǎng)cDNA序列編碼的223、226、734及731個(gè)氨基酸序列進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。結(jié)果表明，Gm-LEC1-a及GmLEC1-b基因編碼產(chǎn)物均具有H2A超家族的保守結(jié)構(gòu)域，GmLEC2-a及GmLEC2-b基因編碼產(chǎn)物均具有B3超家族的保守結(jié)構(gòu)域（見圖3）。

圖3　GmLEC編碼的蛋白質(zhì)氨基酸結(jié)構(gòu)分析Fig. 3　Analysis of amino acid structure encoded by GmLEC

2.2.3 GmLEC1編碼蛋白質(zhì)產(chǎn)物的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析

運(yùn)用SOPMA對(duì)GmLEC1-a及GmLEC1-b編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。結(jié)果表明，GmLEC1-a二級(jí)結(jié)構(gòu)中34.53%為α螺旋結(jié)構(gòu)，58.30%為不規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)，2.69%為β折疊結(jié)構(gòu)，4.48%為β轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)。GmLEC1-b二級(jí)結(jié)構(gòu)中29.65% 為α螺旋結(jié)構(gòu)，65.93%為不規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)，1.33% 為β折疊結(jié)構(gòu)，3.10%為β轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)（見圖4）。

2.2.4 GmLEC編碼蛋白質(zhì)產(chǎn)物的三級(jí)結(jié)構(gòu)分析

GmLEC1-a蛋白質(zhì)產(chǎn)物含有83個(gè)氫鍵，5個(gè)α螺旋結(jié)構(gòu)，5個(gè)轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)。GmLEC1-b有77個(gè)氫鍵，5 個(gè)α螺旋結(jié)構(gòu)，5個(gè)轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)，GmLEC2-a蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)含有72個(gè)氫鍵，5個(gè)α螺旋結(jié)構(gòu)，5個(gè)折疊結(jié)構(gòu)，10個(gè)轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)。GmLEC2-b含68個(gè)氫鍵，3個(gè)α螺旋結(jié)構(gòu)，8個(gè)折疊結(jié)構(gòu)，10個(gè)轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)（見圖5）。

2.2.5 GmLEC編碼蛋白質(zhì)產(chǎn)物的親水性、疏水性分析

對(duì)GmLEC編碼蛋白質(zhì)產(chǎn)物親水性、疏水性分析結(jié)果表明，GmLEC1-a多肽鏈第111位精氨酸Arg具有最低的分值-3.211，第171位丙氨酸Ala具有最高分值1.500。依據(jù)氨基酸分值越低親水性越強(qiáng)和分值越高疏水性越強(qiáng)的規(guī)律，可見，在第111位精氨酸Arg親水性最強(qiáng)，第171位丙氨酸Ala疏水性最強(qiáng)，而就整體來(lái)看，親水性氨基酸均勻分布在整個(gè)肽鏈中，多于疏水性氨基酸。GmLEC1-b多肽鏈第104位精氨酸Arg具有最低分值-3.211，第166位丙氨酸Ala具有最高分值1.867。依據(jù)氨基酸分值越低親水性越強(qiáng)和分值越高疏水性越強(qiáng)的規(guī)律，可見，在第104位精氨酸Arg親水性最強(qiáng)，第166位丙氨酸Ala疏水性最強(qiáng)，而就整體來(lái)看，親水性氨基酸均勻分布在整個(gè)肽鏈中，多于疏水性氨基酸。

圖4　GmLEC1編碼蛋白質(zhì)產(chǎn)物的二級(jí)結(jié)構(gòu)Fig. 4　Secondary structure of the protein product encoded by GmLEC1

圖5　GmLEC編碼蛋白質(zhì)產(chǎn)物的三級(jí)結(jié)構(gòu)Fig. 5　Tertiary structure of the protein product encoded by GmLEC

GmLEC2-a多肽鏈第288位精氨酸Arg具有最低分值-3.811，第274位異亮氨酸lle具有最高分值

1.733。依據(jù)氨基酸分值越低親水性越強(qiáng)和分值越高疏水性越強(qiáng)的規(guī)律，可以看出，在第288位精氨酸Arg親水性最強(qiáng)，第274位異亮氨酸lle疏水性最強(qiáng)，從整體來(lái)看，親水性氨基酸均勻分布在整個(gè)肽鏈中，多于疏水性氨基酸。親水性區(qū)域峰形有很大相似性，但親水性大小、區(qū)域長(zhǎng)度有的差異也較小，序列相似性很高。GmLEC2-b多肽鏈第292位精氨酸Arg具有最低分值-3.811，第278位異亮氨酸lle具有最高分值1.733。依據(jù)氨基酸分值越低親水性越強(qiáng)和分值越高疏水性越強(qiáng)的規(guī)律，可見，在第292位精氨酸Arg親水性最強(qiáng)，第278位異亮氨酸lle疏水性最強(qiáng)，而就整體來(lái)看，親水性氨基酸均勻分布在整個(gè)肽鏈中，多于疏水性氨基酸。綜上，GmLEC1 及GmLEC2均屬于親水性不穩(wěn)定蛋白（見圖6）。

圖6　GmLEC編碼蛋白質(zhì)產(chǎn)物的親水及疏水性分析Fig. 6　Hydrophilic and hydrophobic analysis of protein product encoded by GmLEC

2.2.6 GmLEC基因進(jìn)化樹分析

構(gòu)建同源進(jìn)化樹表明（見圖7），大豆再生相關(guān)基因GmLEC1與擬南芥屬植物親緣較近，GmLEC2兩個(gè)基因相似性為100%。

圖7　同源進(jìn)化樹比對(duì)Fig. 7　Phylogenetic comparison of homologous

3　討論與結(jié)論

近植物胚胎發(fā)育是一個(gè)受多基因調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程，近年來(lái)，隨著大規(guī)模基因組分析方法應(yīng)用，找到更多的植物胚胎發(fā)育特異基因，其中LEC基因由于其編碼的轉(zhuǎn)錄因子可能調(diào)控胚胎發(fā)育早期形態(tài)建成及后期胚胎成熟而成為研究熱點(diǎn)[12]。大豆的遺傳轉(zhuǎn)化效率與體細(xì)胞胚再生基因密切相關(guān)，在已知再生基因中，LEC基因具有調(diào)控體細(xì)胞胚胎發(fā)育的功能。

本研究根據(jù)TAIR網(wǎng)站上公布的擬南芥LEC基因的CDS序列，在phytozome網(wǎng)站上與Glycine max進(jìn)行Blast比對(duì)，在大豆基因組中調(diào)出GmLEC基因，得到LEC1基因在大豆中有兩個(gè)拷貝的相似度極高，分別位于7號(hào)（GmLEC1-a）、17號(hào)（GmLEC1-b）號(hào)染色體上，相似度為88.84%；LEC2基因在8號(hào)（GmLEC2-a）及18號(hào)（GmLEC2-b）染色體上，似度為90.80%。選擇這四個(gè)基因作為克隆的目的基因，通過(guò)同源克隆方法從大豆中獲得該基因，用生物信息學(xué)等相關(guān)技術(shù)手段對(duì)核苷酸序列以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、親水性和疏水性及進(jìn)化樹等進(jìn)行分析，有助于更確切的解析GmLEC基因在胚胎發(fā)育過(guò)程中主要功能和作用機(jī)理，為最終建立高效、穩(wěn)定的大豆再生體系奠定基礎(chǔ)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]葉興國(guó),佘茂云,王軻,等.植物組織培養(yǎng)再生相關(guān)基因鑒定、克隆和應(yīng)用研究進(jìn)展[J].作物學(xué)報(bào), 2012, 38(2): 191-201.

[2]Meinke D W. A homoeotic mutant of Arabidopsis thaliana with leafy cotyledon[J]. Science, 1992, 258: 1647-1650 .

[2]Lotan T, Ohto M, Matsudaira Y K, et al. Arabidopsis LEAFY COTYLEDON1 is sufficient to induce embryo development in vegetative cells[J]. Cell, 1998, 93(6): 1195-1205.

[4]Kwong R W, Bui A Q, Lee H, et al. LEAFY COTYLEDON1-LIKE definesa class of regulators essential for embryo development [J]. Plant Cell, 2003, 15: 5-18.

[5]Danao J, Yee K M, Harada J J, et al. LEAFY COTYLEDON1 is an essential regulator of late embryogenesis and cotyledon identity in Arabidopsis[J]. Plant Cell, 1994, 6: 1731-1745.

[6]Zhang S, Wong L, Meng L, et al. Similarity of expression patterns of knotted1 and ZmLEC1 during somatic and zygotic embryogenesis in maize (Zea mays L)[J]. Planta, 2002, 215(2):191-194.

[7]Yazawa K, Takahata K, Kamada H. Isolation of the gene encoding carrot leafy cotyledon1 and expression analysis during somatic and zygotic embryogenesis[J]. Plant Physiol Biochem, 2004, 42(3): 215-223.

[8] Fambrini M, Durante C, Cionini G, et al. Characterization of LEAFY COTYLEDON1-LIKE gene in Helianthus annuus and its relationship with zygotic and somatic embryogenesis[J]. Development Genes and Evolution, 2006, 216(5): 253-264.

[9]李愛芹,夏晗,王興軍,等.花生LEC1基因的克隆及表達(dá)研究[J].西北植物學(xué)報(bào), 2009, 29(9): 1730-1735.

[10]Lotan T, Masa-aki O M, Yee K M, et al. Arabidopsis LEAFYCOTY-LEDON1 is sufficient to induce embryo development in vegetative cells[J]. Cell, 1998, 93(7): 1195-1205.

[11]Stone S L, Kwong L W, Yee K M, et al. LEAFY COTYLEDON2 encodes a B3 domain transcription factor that induces embryo development[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2001, 98(20): 11806-11811.

[12]John J, Harada. Role of Arabidopsis LEAFY COTYLEDON genes in seed development[J]. Plant Physiol, 2001, 158: 405-409.

Wu Xiaoxia, Wang Min, Chen Qingshan, et al. Cloning and bioinformatics analysis of regeneration related gene GmLEC in soybean[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2015, 46(4): 1-9. (in Chinese with English abstract)

Cloning and bioinformatics analysis of regeneration related gene

GmLEC in soybean

/WU Xiaoxia1, WANG Min1, CHEN Qingshan1, ZHANG Chao1, LI Sinan1, MA Yanlong1, SUN Jing1, LIU Ming1, JIANG Chengtao1, LI Wenbin1, LI Mo1, LIU Jiahui1, WANG Zhi1, ZHANG Xirui1, SU Anyu2

(1. School of Agriculture, Northeast Agricultural University; Key Laboratory of Soybean Biology in Chinese Ministry of Education, Harbin 150030, China; 2. School of Resources and Environmental Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China)

Abstract:This article compared homologous sequences of regeneration-related gene LEC in Arabidopsis by using homology cloning technology, cloned the full-length CDS sequences of two members of LEC gene from soybean, got the soybean regeneration-related genes GmLEC1-a, GmLEC1-b, GmLEC2-a and GmLEC2-b. And nucleotide sequence, deduced amino acid sequence, protein structure, hydrophilic, hydrophobic and evolutionary trees of soybean GmLEC1 and GmLEC2 gene were analyzed by bioinformatics methods. The results showed that the coding region of soybean regeneration-related gene GmLEC1-a had the length of 672 bp, encoded 223 amino acids, that of GmLEC1-b had the length of 681 bp, encodes 226 amino acids, that of GmLEC2-a had the length of

2 205 bp, encoded 734 amino acids, and that of GmLEC2-b had the length of 2 196 bp, encoded 731 amino acids. GmLEC protein was hydrophilic unstable protein. Through the analysis of the functional domains of the LEC protein, we found that GmLEC1 was member of H4 superfamily, GmLEC2 was member of B3 superfamily, and both were close to Arabidopsis plants in phylogenetic.

Key words:soybean; regeneration; GmLEC; bioinformatics

作者簡(jiǎn)介：武小霞（1971-），女，研究員，博士，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)榇蠖惯z傳育種與生物技術(shù)應(yīng)用。E-mail: xxwu2012@126. com

基金項(xiàng)目：黑龍江省自然科學(xué)重點(diǎn)基金項(xiàng)目（ZD201117）；黑龍江省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目（12531z001）；轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)（2013ZX08004001）

收稿日期：2014-10-14

文章編號(hào)：1005-9369（2015）04-0001-09

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

中圖分類號(hào)：S816.17