遼寧錦州地區(qū)三種家禽大腸桿菌耐藥性研究

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遼寧錦州地區(qū)三種家禽大腸桿菌耐藥性研究

蔣月，盛鵬飛

（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州121001）

摘要：分別從健康和患病雞、鴨、鵝分離出302株大腸桿菌，采用微量稀釋法測定菌株對12種抗菌藥物的敏感性。結(jié)果表明，302株大腸桿菌除對阿米卡星和多粘菌素B較敏感，對其他抗菌藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥且多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。鵝源大腸桿菌和鴨源大腸桿菌對氨芐西林、氯霉素和環(huán)丙沙星耐藥性較高，雞源大腸桿菌對其他抗菌藥物耐藥率較高。同時(shí)，患病組家禽分離的大腸桿菌對氨芐西林以外的其他11種抗菌藥物的耐藥率明顯高于健康組大腸桿菌。結(jié)果顯示，遼寧錦州地區(qū)雞、鴨、鵝三種家禽大腸桿菌對不同抗菌藥物的耐藥性存在差異，三種家禽對抗菌藥物的整體耐藥性較強(qiáng)，應(yīng)加強(qiáng)耐藥性監(jiān)測，為指導(dǎo)獸醫(yī)臨床合理使用抗菌藥物提供指導(dǎo)。

關(guān)鍵詞：雞；鴨；鵝；大腸桿菌；耐藥性

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間2015-1-27 16:00:37

[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20150127.1600.010.html

蔣月,盛鵬飛.遼寧錦州地區(qū)三種家禽大腸桿菌耐藥性研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 46(2): 59-63.

隨著我國養(yǎng)禽業(yè)集約化發(fā)展及長期抗菌藥物大量使用，大腸桿菌耐藥性逐漸增強(qiáng)，一些抗菌藥物治療禽大腸桿菌病已達(dá)不到理想效果，致使禽大腸桿菌病流行[1]，控制禽類耐藥大腸桿菌感染已成為亟待解決問題。

近年來，多有家禽與哺乳動(dòng)物大腸桿菌耐藥性比較報(bào)道[2-3]，但不同家禽大腸桿菌耐藥性比較研究較少。本試驗(yàn)針對目前遼寧錦州地區(qū)禽類大腸桿菌病流行現(xiàn)狀，采集錦州大型規(guī)模化家禽養(yǎng)殖場中健康或具有典型大腸桿菌病臨床癥狀的雞、鴨、鵝樣本，進(jìn)行細(xì)菌分離與鑒定，利用微量稀釋法檢測并比較遼寧錦州地區(qū)三種家禽大腸桿菌分離株的耐藥性，旨在監(jiān)控不同禽類來源大腸桿菌耐藥菌株流行趨勢，為臨床用藥和抗菌藥物的合理使用提供指導(dǎo)。

1　材料與方法

1.1樣品來源

錦州大型規(guī)?；仪蒺B(yǎng)殖場采集的健康或臨床診斷上有典型大腸桿菌癥狀雞、鴨、鵝的泄殖腔拭子、肝臟、血液及卵巢等樣品。

1.2培養(yǎng)基及藥物

營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂等培養(yǎng)基購自杭州天和微生物試劑有限公司；氨芐西林（AMP）、頭孢噻吩（CEF）、鏈霉素（S）、阿米卡星（AN）、慶大霉素（GM）、多西環(huán)素（DOX）、氯霉素（C）、氟苯尼考（FLR）、環(huán)丙沙星（CIP）、諾氟沙星（NOR）、復(fù)方新諾明（SXT）、多粘菌素B（PB）等12種藥敏紙片購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司；大腸桿菌質(zhì)控菌株ATCC25922購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3細(xì)菌分離鑒定

將采集樣品劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)后，將分離菌株劃線接種于麥康凱瓊脂和伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，將分離菌涂片、革蘭氏染色、鏡檢。使用葡萄糖、乳糖、蔗糖、肌糖、木糖、麥芽糖、甘露醇、枸櫞酸、VP和MR生化反應(yīng)管，對疑似分離株進(jìn)行鑒定。

1.4藥敏試驗(yàn)

采用微量稀釋法測定12種抗菌藥物對分離菌株的最小抑菌濃度（MIC）。每次試驗(yàn)前用標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922進(jìn)行質(zhì)控，藥敏試驗(yàn)結(jié)果參照CLSI[4]判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

耐藥性差異統(tǒng)計(jì)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0進(jìn)行處理。

2　結(jié)果與分析

2.1大腸桿菌的分離與鑒定結(jié)果

分離菌株在營養(yǎng)瓊脂上形成圓形凸起、半透明灰白色菌落，在麥康凱和伊紅美藍(lán)瓊脂上分別為紅色和黑色帶金屬閃光的菌落，鏡檢為紅色、兩端鈍圓的短桿菌，初步鑒定是大腸桿菌。經(jīng)生化鑒定進(jìn)一步表明分離株為大腸桿菌。

此次共分離鑒定出302株大腸桿菌，其中包括雞源大腸桿菌210株（健康105株，患病105株），鴨源大腸桿菌65株（健康30株，患病35株），鵝源大腸桿菌27株（健康12株，患病15株）。

2.2禽源大腸桿菌的總體耐藥情況

禽源大腸桿菌的總體耐藥及多重耐藥情況見表1和圖1。

表1　302株禽源大腸桿菌對12種抗菌藥物的耐藥率Table 1　Antibiotic resistant rate of 302 E. coli isolates from poultry

由表1可以看出，本次分離的禽源大腸桿菌總體耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)重，對氨芐西林、慶大霉素、多西環(huán)素及復(fù)方新諾明總耐藥率均在70%以上，尤其是對氨芐西林的耐藥率在90%以上，對鏈霉素、氯霉素和氟苯尼考的耐藥情況也較為嚴(yán)重，總耐藥率在40%~70%之間，對阿米卡星和多粘菌素B較為敏感，總耐藥率均在20%以下?？梢姺蛛x的禽源大腸桿菌多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，多重耐藥數(shù)以6耐和7耐最多。

圖1　302株禽源大腸桿菌的多重耐藥情況Fig. 1　Multidrug resistance of 302 E. coli isolates from poultry

2.3三種禽源大腸桿菌的耐藥性比較結(jié)果

三種禽源大腸桿菌的耐藥性比較及P值比較見圖2和表2。

由圖2和表2可見，對于大部分抗菌藥物，雞源大腸桿菌的耐藥性高于鴨源和鵝源大腸桿菌。而對于氨芐西林耐藥性最高為鵝源大腸桿菌，對氯霉素和環(huán)丙沙星的耐藥最高則為鴨源大腸桿菌。三種禽源大腸桿菌對氨芐西林和環(huán)丙沙星的耐藥性差異不顯著（P>0.05），而對其他10種抗菌藥物，雞、鴨或鵝源大腸桿菌中某兩種大腸桿菌間存在差異，差異顯著或極顯著（P<0.05或P<0.01）。

圖2　三種禽源大腸桿菌的耐藥性比較Fig. 2　Comparison of antibiotic resistance of chickens, ducks and goose

2.4健康組與患病組禽源大腸桿菌的耐藥性比較結(jié)果

圖3顯示健康組與患病組禽源大腸桿菌對12種抗菌藥物的耐藥性比較結(jié)果，由圖3可知，除氨芐西林的耐藥率為健康組家禽大腸桿菌略高于患病組家禽大腸桿菌外，其他7大類抗菌藥物—頭孢類（頭孢噻吩），氨基糖苷類（鏈霉素、慶大霉素和阿米卡星），喹諾酮類（環(huán)丙沙星和諾氟沙星），土霉素類（多西環(huán)素），氯霉素類（氯霉素和氟苯尼考），磺胺類（復(fù)方新諾明）和多粘菌素類（多粘菌素B）的耐藥率，患病組家禽大腸桿菌均明顯高于健康組家禽大腸桿菌（P<0.01）。分析原因，可能與平時(shí)飼養(yǎng)過程中抗菌藥物的添加和發(fā)病后的用藥治療習(xí)慣有關(guān)。

表2　三種禽源大腸桿菌的耐藥性比較結(jié)果Table 2　Comparison of antibiotic resistance of chickens,ducks and goose

圖3　健康組與患病組家禽大腸桿菌的耐藥性比較結(jié)果Fig. 3　Antibiotic resistance comparision of the sick-group and health-group

3　討論與結(jié)論

3.1 302株禽源大腸桿菌的總體耐藥情況分析

結(jié)果顯示，受測菌株對阿米卡星和多粘菌素B較敏感，總耐藥率在20%以下，對其他目前常用和應(yīng)用時(shí)間較長的抗菌藥物均有不同程度的耐藥，對氨芐西林、慶大霉素、多西環(huán)素及復(fù)方新諾明呈現(xiàn)高度耐藥，總耐藥率均在70%以上。受測菌株的多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。本試驗(yàn)結(jié)果對頭孢噻吩、慶大霉素、氨芐西林、鏈霉素、氟苯尼考和阿米卡星等耐藥率較高[5-6]，對環(huán)丙沙星和諾氟沙星耐藥性較宋立研究結(jié)果低，較劉吉山研究結(jié)果高[5-6]，但本試驗(yàn)結(jié)果與廖曉萍等關(guān)于禽類大腸桿菌耐藥率高，耐藥種類多，耐藥譜復(fù)雜，多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重報(bào)道一致[7]。

隨時(shí)間推移，細(xì)菌對某些藥物耐藥性逐漸增加，且細(xì)菌耐藥范圍逐漸變擴(kuò)大，除對應(yīng)用時(shí)間較長的抗菌藥有耐藥性，對臨床使用不久新藥如喹諾酮類的抗性很強(qiáng)。細(xì)菌耐藥性及多重耐藥現(xiàn)象的原因可能是致病性大腸桿菌在藥物選擇性壓力下耐藥基因發(fā)生突變，適用環(huán)境壓力而產(chǎn)生耐藥性；臨床上濫用抗生素，大腸桿菌可通過質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、整合子等可移動(dòng)元件獲得耐藥性[8]。

3.2雞鴨鵝三種禽源大腸桿菌的耐藥性比較

本次分離于錦州地區(qū)雞源大腸桿菌對氨芐西林、阿米卡星、氟苯尼考等的耐藥率較以往報(bào)道低[9-10]。而鴨源和鵝源大腸桿菌與其他地區(qū)的報(bào)道有差異[11-13]。同時(shí)本試驗(yàn)顯示不同禽源大腸桿菌耐藥性也存在差異，對大部分抗菌藥物，雞源大腸桿菌耐藥性高于鴨源和鵝源大腸桿菌。這可能因?yàn)榫攴蛛x時(shí)間和地區(qū)不同，在治療大腸桿菌病時(shí)，不同家禽的耐藥情況不同，不同家禽用藥強(qiáng)度、頻率存在差異，所以不同家禽大腸桿菌的耐藥性存在差異。造成耐藥率差異原因除本次調(diào)查大腸桿菌一部分分離于健康家禽也是重要因素，本試驗(yàn)結(jié)果顯示患病家禽大腸桿菌的耐藥性高于健康家禽大腸桿菌耐藥性。

本試驗(yàn)首次對遼寧錦州地區(qū)的雞鴨鵝三種家禽大腸桿菌的耐藥性進(jìn)行檢測與比較，有利于監(jiān)控錦州地區(qū)不同家禽大腸桿菌耐藥性流行趨勢。本試驗(yàn)大腸桿菌對阿米卡星和多粘菌素B耐藥率較低，而氯霉素在禁用之后，耐藥率也已降低到42%，說明在停止使用抗生素一定時(shí)間后，細(xì)菌能逐漸恢復(fù)對其的敏感性。由此可見，規(guī)范使用抗生素對于減緩細(xì)菌耐藥性的擴(kuò)散和傳播具有重要意義。

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Jiang Yue, Sheng Pengfei. Research on antimicrobial resistance in Escherichia coli isolated from three different poultries[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2015, 46(2): 59-63. (in Chinese with English abstract)

Research on antimicrobial resistance in Escherichia coli isolated from

three different poultries

/JIANG Yue, SHENG Pengfei(Animal Husbandry and VeterinaryCollege of Liaoning Medical University, Jinzhou Liaoning 121001, China)

Abstract:To study the presence of antimicrobial resistance in chicken, duck and goose Escherichia coli in Jinzhou, Liaoning Province. A total of 302 E. coli strains, isolated from chicken, duck and goose (healthy and diseased animals), were tested for resistance to 12 antimicrobials by micro-dilution method. Results showed that besides sensitive to Amikacin and Polymyxin B, all the 302 isolates were differently resistant to the other antibiotics, and multi-drug resistance was serious. Except Ampicillin, Streptomycin and Ciprofloxacin, E. coli isolates from chicken had a higher rate of resistance to the other antibiotics. Except Ampicillin, isolates from diseased poultries were markedly more resistant than those from normal poultries for the other 11 antimicrobial agents assessed. Conclusion: Despite some differences among spices, the whole antimicrobial resistance of these three poultry E. coli is severe, it's necessary to strengthen the surveillance of antimicrobial resistance and give some directions to clinical medication.

Key words:chicken; duck; goose; Escherichia coli; antimicrobial resistance

作者簡介：蔣月（1980-），女，講師，博士研究生，研究方向?yàn)楂F醫(yī)藥理與毒理學(xué)。E-mail: lnyxy_jy@126. com

基金項(xiàng)目：獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金（SKLVBF201107）

收稿日期：2014-03-04

文章編號：1005-9369（2015）02-0059-05

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

中圖分類號：S855.1+2