匝迪-5味丸對(duì)急性應(yīng)激所致行為絕望小鼠的抗抑郁作用研究*

呼日樂巴根　佟海英　蓮花　烏蘭其其格　白龍　阿古拉△

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京100029；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010110）

·研究報(bào)告·

匝迪-5味丸對(duì)急性應(yīng)激所致行為絕望小鼠的抗抑郁作用研究*

呼日樂巴根1，2佟海英1蓮花2烏蘭其其格2白龍2阿古拉2△

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京100029；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010110）

目的初步觀察匝迪-5味丸的抗抑郁作用。方法通過小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）、小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）及利血平致小鼠抑郁模型，并以鹽酸氟西汀為對(duì)照，觀察連續(xù)7 d給匝迪-5味丸后對(duì)急性應(yīng)激所致行為絕望小鼠的影響及腹腔注射利血平誘發(fā)抑郁模型小鼠的眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能及體溫變化的影響。結(jié)果與空白組比較，陽(yáng)性對(duì)照組、匝迪-5味丸高、中劑量組均能縮短小鼠TST不動(dòng)時(shí)間（P＜0.01）；與空白組比較，陽(yáng)性對(duì)照組，匝迪-5味丸高、中、低劑量組均能縮短小鼠FST不動(dòng)時(shí)間（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組，匝迪-5味丸的高、中、低劑量組明顯對(duì)抗利血平所致小鼠眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能及體溫降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論匝迪-5味丸能改善急性應(yīng)激所致行為絕望小鼠及利血平誘導(dǎo)小鼠抑郁狀態(tài)，其作用機(jī)制值得進(jìn)一步研究。

匝迪-5抗抑郁作用急性應(yīng)激行為絕望

抑郁癥是一類持久的心境低落狀態(tài)為主要特征的復(fù)雜的情感障礙性精神疾病，其發(fā)病率較高且有逐年增加的趨勢(shì)，危害性大，已成為醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的問題。本病也是急性腦血管病的常見并發(fā)癥。蒙醫(yī)學(xué)中無(wú)此病名，但從其發(fā)病外緣、主要臨床表現(xiàn)及特征分析與人體“巴達(dá)干”、“赫依”和心臟有著密切相關(guān)。匝迪-5味丸（又稱肉豆蔻-5味丸）是蒙醫(yī)治療心“赫依”病、心煩失眠、心神不安、胸悶氣喘、心絞痛病的常用復(fù)方，對(duì)“赫依”病尤為有效。臨床上主要用于治療抑郁癥、精神分裂癥、心煩失眠等疾病。本藥方出自于蒙醫(yī)經(jīng)典著作《蒙醫(yī)成方集》［1］，并收載于《蒙醫(yī)百科全書·蒙醫(yī)學(xué)》和《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊(cè)》等［2-3］。本實(shí)驗(yàn)研究選擇急性應(yīng)激所致行為絕望小鼠行為學(xué)指標(biāo)的基礎(chǔ)上藥物誘導(dǎo)抑郁模型，初步探索匝迪-5味丸的抗抑郁效應(yīng)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，雄性，體質(zhì)量（20±2）g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［SCXK（蒙）2002-0001］提供。

1.2藥物及試劑匝迪-5味丸（烏蘭浩特中蒙制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z15021785）；鹽酸氟西?。ㄉ轿髑粗扑幑煞萦邢薰荆瑖?guó)藥準(zhǔn)字H20073985）；利血平注射液（廣東邦民制藥廠有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H44021982）；0.9%氯化鈉注射液（安徽豐原淮海制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H34021875）。

1.3儀器TD-200電子體溫計(jì)（新鄉(xiāng)金象科技有限公司）；FA-1104電子天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司）；數(shù)碼相機(jī)；自制小鼠懸尾支架；定時(shí)器；秒表；注射器等。

1.4小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）［4］將正常小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后隨機(jī)分為空白組（予等量去離子水），陽(yáng)性對(duì)照組（予鹽酸氟西汀3.6 mg/kg），匝迪-5味丸高、中、低劑量組（分別為匝迪-5味丸0.8、0.4、0.2g/kg），每組10只。各組小鼠均按0.2 mL/10 g體質(zhì)量給藥，連續(xù)給藥7 d。于末次給藥1 h后將小鼠距尾尖部約1 cm處用橡皮膏貼固定于懸掛支架上，頭部離臺(tái)面約5 cm，一次懸掛2只小鼠，中間用紙板隔開避免互相干擾。小鼠為克服不正常體位而掙扎一段時(shí)間后出現(xiàn)斷性不動(dòng)，顯示絕望狀態(tài)。倒掛6 min，記錄后4 min內(nèi)累計(jì)不動(dòng)時(shí)間（不動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)為小鼠停止掙扎，除呼吸外所有肢體均不動(dòng)）。

1.5小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）［5］將正常小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后隨機(jī)分為空白組（予等量去離子水）、陽(yáng)性對(duì)照組（予鹽酸氟西汀3.6 mg/kg）、匝迪-5味丸高、中、低劑量組（分別為匝迪-5味丸0.8、0.4、0.2 g/kg），每組10只。各組小鼠均按0.2 mL/10 g體質(zhì)量給藥，連續(xù)給藥7 d。于末次給藥15 min后將小鼠單個(gè)放入水深10 cm，直徑12 cm的燒杯內(nèi)，水溫保持在（25±1）℃。置水中2min游泳后開始記錄5min內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間（不動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)為小鼠停止掙扎或小鼠呈漂浮狀態(tài)，四肢有輕微動(dòng)作以保持頭部在水面）。

1.6小鼠利血平拮抗實(shí)驗(yàn)［6］將正常小鼠在室溫安靜環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后隨機(jī)分為空白組（予等量去離子水）、模型組（予等量去離子水）、陽(yáng)性對(duì)照組（予鹽酸氟西汀3.6 mg/kg）、匝迪-5味丸高、中、低劑量組（分別為匝迪-5味丸0.8、0.4、0.2 g/kg），每組10只。各組小鼠均按0.2 mL/10 g體質(zhì)量給藥，連續(xù)給藥7 d。于末次給藥后立即腹腔注射4 mg/kg利血平注射液，其中空白組小鼠注射等量0.9%氯化鈉注射液。（1）腹腔注射利血平2 h后將小鼠放入直徑7.5 cm的白紙圓圈內(nèi)觀察15 s，并記錄各組小鼠的出圈率，計(jì)算運(yùn)動(dòng)不能抵抗百分率=（1-運(yùn)動(dòng)不能只數(shù)/動(dòng)物總數(shù)）×100%，作組間比較。（2）腹腔注射利血平2 h后觀察小鼠眼瞼不能睜開的個(gè)數(shù)，計(jì)算眼瞼下垂抵抗百分率。眼瞼下垂對(duì)抗百分率=（1-睜眼不能只數(shù)/動(dòng)物總數(shù)）×100%，作組間比較。（3）注射利血平3 h后將體溫計(jì)探頭插入小鼠肛門內(nèi)約1 cm測(cè)量體溫，并記錄各組體溫?cái)?shù)據(jù)，作組間比較。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.00統(tǒng)計(jì)軟件。所有數(shù)據(jù)均以（±s）表示，選用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組小鼠TST不動(dòng)時(shí)間的比較見表1。與空白組比較，陽(yáng)性對(duì)照組、匝迪-5味丸高、中劑量組顯著縮短小鼠TST不動(dòng)時(shí)間（P＜0.01）。

表1　各組小鼠TST 4 min累計(jì)不動(dòng)時(shí)間比較（s，±s）

表1　各組小鼠TST 4 min累計(jì)不動(dòng)時(shí)間比較（s，±s）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

組別n不動(dòng)時(shí)間空白組10107.17±21.54陽(yáng)性對(duì)照組1061.01±24.19**匝迪-5味丸高劑量組1057.07±23.32**匝迪-5味丸中劑量組1064.27±19.58**匝迪-5味丸低劑量組1096.55±31.31

2.2各組小鼠FST不動(dòng)時(shí)間影響的比較見表2。與空白組比較，陽(yáng)性對(duì)照組、匝迪-5味丸高、中、低劑量組均顯著縮短小鼠FST不動(dòng)時(shí)間（P＜0.05或P＜0.01）。

表2　各組小鼠FST 5 min累計(jì)不動(dòng)時(shí)間比較（s，±s）

表2　各組小鼠FST 5 min累計(jì)不動(dòng)時(shí)間比較（s，±s）

組別n不動(dòng)時(shí)間空白組1079.66±6.54陽(yáng)性對(duì)照組1050.79±10.23**匝迪-5味丸高劑量組1054.71±16.45**匝迪-5味丸中劑量組1056.86±7.36**匝迪-5味丸低劑量組1058.15±10.04*

2.3各組利血平所致小鼠的眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能、體溫下降影響的比較見表3。與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組、匝迪-5味丸的高、中、低劑量組均明顯抵抗小鼠眼瞼下垂和運(yùn)動(dòng)不能。與空白組比較，模型組小鼠體溫顯著低于空白組（P＜0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組、匝迪-5味丸高、中、低劑量組均能抵抗利血平引起小鼠體溫降低（P＜0.05或P＜0.01）。

表3　各組利血平所致小鼠眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能及體溫下降影響的比較

3　討論

抑郁癥是一種由生物、心理、社會(huì)等多種因素作用而致的復(fù)雜性疾病，并引起人體多個(gè)系統(tǒng)、多個(gè)層次的病理反應(yīng)。目前，對(duì)于抑郁癥的藥物治療，尚未研制出一種理想的西藥。檳榔-13味丸、匝迪-5味丸等傳統(tǒng)蒙藥在臨床上用于治療本病具有一定的療效［7］。從傳統(tǒng)的方藥中挖掘臨床有效而毒副作用少的復(fù)方，是治療精神類疾病值得探索的新途徑。

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)在篩選具有抗抑郁效應(yīng)的藥物方面發(fā)揮著非常重要的作用。其中TST和FST實(shí)驗(yàn)是常用的行為絕望動(dòng)物模型，使動(dòng)物在不可逃避性應(yīng)激狀態(tài)下，因絕望致不動(dòng)時(shí)間的改變可反映藥物的抗抑郁效應(yīng)。這種行為絕望模型對(duì)絕大多數(shù)抗抑郁藥物敏感，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單而快捷，被廣泛應(yīng)用于抗抑郁藥的初步篩選［8］。本研究采用TST和FST實(shí)驗(yàn)，經(jīng)7 d給藥后觀察到匝迪-5味丸高、中劑量和鹽酸氟西汀均能顯著縮短行為絕望小鼠的不動(dòng)時(shí)間。結(jié)果提示，匝迪-5味丸具有一定的抗抑郁效應(yīng)，并與臨床應(yīng)用一致。匝迪-5味丸低劑量組對(duì)TST不動(dòng)時(shí)間的影響不明顯，而FST不動(dòng)時(shí)間的影響相比之下弱于高、中劑量組，這可能與用藥劑量有一定的關(guān)系?？垢哐獕核幬锢睫卓箤?shí)驗(yàn)是最早建立的抑郁癥動(dòng)物模型，經(jīng)利血平處理的動(dòng)物出現(xiàn)眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能及體溫下降［9］。最早上世紀(jì)50年代的提出的“單胺假說(shuō)”認(rèn)為抑郁癥與腦內(nèi)單胺能神經(jīng)遞質(zhì)（NT），即5-HT、NE、DA等水平的降低有關(guān)，并抑郁癥發(fā)病機(jī)制及抗抑郁藥的研制和應(yīng)用中起主導(dǎo)作用［10］。利血平是一種囊泡再攝取抑制劑，其作用與單胺氧化酶的抑制有密切相關(guān)。利血平拮抗是能阻止單胺遞質(zhì)的代謝而增加單胺遞質(zhì)的含量，其拮抗實(shí)驗(yàn)反映了藥物對(duì)單胺能神經(jīng)系統(tǒng)的興奮作用［11］。研究顯示，與空白組比較，模型組小鼠眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能及體溫下降有顯著性差異（P＜0.01）；與模型組比較，匝迪-5味丸高、中、低劑量組均能顯著低抗腹腔注射利血平后小鼠眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能及體溫下降（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果提示，匝迪-5味丸改善利血平所致動(dòng)物抑郁狀態(tài)，其作用機(jī)制可能與單胺遞質(zhì)含量有關(guān)。

蒙醫(yī)藥迄今已有幾千年的歷史，其理論體系的基本特點(diǎn)是整體觀和辨證施治理論。蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為，胸部屬于“巴達(dá)干”區(qū)，心位于胸腔之中，故而心居于“巴達(dá)干”的總位。心又是“赫依”的竄行之道，因此心臟與“赫依”、“巴達(dá)干”有著密切關(guān)系。當(dāng)“赫依”的功能紊亂時(shí)，影響心主精神、意志、思維活動(dòng)等正常生理功能，故蒙醫(yī)學(xué)古籍經(jīng)典著作《蒙醫(yī)藥選編》中記載，心“赫依”者出現(xiàn)神志不清，睡眠減少，頭暈，嘆氣等表現(xiàn)，臨床上可出現(xiàn)記憶力減退，思維遲鈍等抑郁癥狀［12］。當(dāng)“巴達(dá)干”功能紊亂時(shí)，臨床上可見反應(yīng)遲鈍，意識(shí)模糊等“巴達(dá)干”異常的癥狀，這與抑郁癥的臨床表現(xiàn)一致。蒙醫(yī)學(xué)理論中心臟與腦有著不可分割的關(guān)系，心臟和腦主要以黑白脈相連。蒙醫(yī)學(xué)古籍經(jīng)典著作《醫(yī)宗要旨》中對(duì)白脈的一段描述：從腦部脈的海洋里，像樹根一樣向下延伸的十九條白脈［13］。白脈的起源是腦，腦是白脈之海，從腦出發(fā)的白脈像彩帶一樣延伸到心臟連接與腦。當(dāng)心“赫依”和“巴達(dá)干”功能紊亂時(shí)，將影響白脈的傳導(dǎo)功能，臨床可出現(xiàn)意識(shí)模糊、精神紊亂、煩躁不安等抑郁癥狀。因此，從蒙醫(yī)學(xué)理論分析抑郁癥的病因，可認(rèn)為心“赫依”、“巴達(dá)干”功能紊亂，進(jìn)而影響白脈的傳導(dǎo)功能而引起。

總之，本實(shí)驗(yàn)研究根據(jù)匝迪-5味丸的復(fù)方特點(diǎn)及臨床應(yīng)用，結(jié)合目前抑郁癥研究進(jìn)展利用3種方法，從動(dòng)物整體行為學(xué)角度評(píng)價(jià)匝迪-5味丸的抗抑郁作用，為其臨床應(yīng)用及進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。

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Antidepressant Effect of Zadi-5 Pill on Mouse Models with Depressant

Hurilebagen1，2，TONG Haiying1，Lianhua2，et al.1 Basic Medicine College，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China；2 Inner Mongolia Medical Universit，Inner Mongolia，Hohhot 010110，China

Objective:To discuss the antidepression effect of Zadi-5 Pill.Methods:Depressant model was establised by the conduct forced swimming test，tail suspension test on mice and reserpine test to make depression model.The effect of Zadi-5 Pill on acute stress caused despair behavior of mice after 7d and recorded rectal temperature change and blepharoptosis and akinesia after ip resperine.Meanwhile，these indicators were compared to Fluoxetine Hydrochloride group.Results:Compared with blank group，positive control group and Zadi-5 Pill high，middle，low dose groups significantly shortened the immobility time in forced swimming test（P＜0.05）and tail suspension test（P＜0.01）.Compared with the model group，positive control group and Zadi-5 Pill high，middle，low dose groups can reverse the blepharoptosis，the akinesia and abnormally low body temperatures induced by reserpine（P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion:Zadi-5 Pill can significantly reduce acute stress caused despair behavior and reverse depressive state induced by reserpine，and then have anti-depression affect.The pharmacologic mechanism of Zadi-5 Pill may concerned with preventing monoamine metabolites to increase monoamine content.

Zadi-5 Pill；Antidepression effect；Acute stress；Behavioral despair

R285.5

A

1004-745X（2015）01-0056-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.01.019

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)“英才培育”項(xiàng)目（2014YCPY003）

（電子郵箱：agula372000@126.com）

2014-09-15）